專利名稱：保肝中藥復(fù)方提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥復(fù)方提取物，具體是涉及一種采用二氧化碳超臨界萃取技術(shù)和大孔吸附樹脂富集技術(shù)，以桃仁、白花敗醬草、車前子、文冠果種仁、當(dāng)歸、白芍、柴胡和甘草為原料制得的提取物，該提取物具有明顯的抗肝損傷作用。本發(fā)明還涉及了該提取物在制備保肝藥物制劑和保健食品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
肝損傷是多種肝臟疾病共有的一種病理狀態(tài)，其中，由病毒型肝炎引起的肝損傷、 酒精性肝損傷以及由藥物、毒物引起的化學(xué)性肝損傷最為常見，肝損傷長期存在往往是導(dǎo)致肝纖維化，甚至肝硬化、肝癌發(fā)生的重要使動因素。我國是病毒性肝炎高發(fā)區(qū)，約有1. 2 億人口為乙型肝炎病毒攜帶者，其中約10%發(fā)展為慢性肝炎，會逐漸出現(xiàn)肝損傷以及更嚴(yán)重的病理損害。但是，無論中醫(yī)還是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)均沒有直接殺滅患者體內(nèi)肝炎病毒的良策。所以，防治肝損傷，阻斷肝炎-肝纖維化-肝硬化-肝癌的發(fā)展進(jìn)程，是治療病毒型肝炎的有效方法，從而使患者處于終身無癥狀病毒攜帶者狀態(tài)，將會大大延長生命，改善生活質(zhì)量。 另外，在亞洲各國(包括我國)，盡管病毒性肝炎所致的各種肝病占主要地位，但是隨著酒類消耗量的增加，人們飲食結(jié)構(gòu)的改變，近年來由酒精所致的肝損害亦呈逐年上升趨勢，酒精已成為繼病毒性肝炎后導(dǎo)致肝損害的第二大病因。因此，如何防治酒精性肝損傷也已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)在肝損傷的治療方面并無特異性藥物，多采用休息、加強(qiáng)營養(yǎng)、補(bǔ)充維生素或?qū)ΠY治療等，嚴(yán)重者甚至被迫終止用藥。而中醫(yī)藥歷經(jīng)幾千年的發(fā)展，通過方劑的用藥規(guī)律配伍，而辨證組方，其作用既優(yōu)于西藥，而毒性又會明顯小于西藥。因此，尋找能夠有效治療肝損傷(保肝)的中藥組方，并開展現(xiàn)代新藥研發(fā)，對拓寬肝損傷的防治手段意義重大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是提供一種具有抗肝損傷作用的中藥復(fù)方提取物。本發(fā)明另一個目的是提出該中藥復(fù)方提取物在制備具有保肝作用的藥物制劑和保健食品中的應(yīng)用。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采取了以下技術(shù)方案組方藥材及比例為以重量份計，桃仁5份、車前子3份、白花敗醬草3份、文冠果種仁3份、當(dāng)歸3份、柴胡3份、白芍2份、甘草1份。以重量份數(shù)計，按照桃仁5份、車前子3份、白花敗醬草3份、文冠果種仁3份、當(dāng)歸3份、柴胡3份、白芍2份、甘草1份，稱取各藥材適量，混合粉碎，過藥典2號篩，藥粉裝入二氧化碳超臨界萃取裝置中，加入夾帶劑無水乙醇，用量為0. 5ml/g藥粉，設(shè)定萃取溫度為45°C，萃取壓力為40MPa，解析I壓力為lOMPa、溫度為40°C，解析II壓力為4MPa、溫度為25°C，萃取時間為池，得棕黃色粘稠油狀物。再將上一步二氧化碳超臨界萃取后的藥渣，加入10倍量70%乙醇浸泡12小時，加熱回流提取2小時，過濾，再向藥渣中再加入5倍量 70%乙醇加熱回流提取2小時，過濾，合并濾液，減壓干燥得浸膏。將浸膏加適量水稀釋后與等體積的D-101型大孔吸附樹脂混合拌勻，上樣于D-101型大孔吸附樹脂柱中(上樣量以生藥量與樹脂量之比計算為1 2)，靜態(tài)吸附30分鐘，然后依次用10個柱體積的水、10 個柱體積的20 %乙醇和10個柱體積的50 %乙醇進(jìn)行洗脫，收集50 %乙醇洗脫液，減壓干燥后粉碎，制得棕色粉末。將此粉末與二氧化碳超臨界萃取制得的棕黃色粘稠油狀物混合，即得本發(fā)明的中藥復(fù)方提取物。作為對上述技術(shù)方案的改進(jìn)和補(bǔ)充1、組方中藥材的相對量以重量份計，可以按照桃仁4-6份、車前子2-4份、白花敗醬草2-4份、文冠果種仁2-4份、當(dāng)歸2-4份、柴胡2-4份、白芍1_3份、甘草1_2份的比例進(jìn)行調(diào)整。2、在進(jìn)行二氧化碳超臨界萃取時，萃取溫度可以設(shè)定為30-60°C。3、在進(jìn)行二氧化碳超臨界萃取時，萃取壓力可以設(shè)定為20_60MPa。4、在進(jìn)行二氧化碳超臨界萃取時，萃取時間可以設(shè)定為Ih或以上。5、在進(jìn)行二氧化碳超臨界萃取時，夾帶劑可以為乙醇或濃度為95%以上的乙醇， 并且用量可以設(shè)定為0. 1-lml/g藥粉。6、在用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀對二氧化碳超臨界萃取液進(jìn)行減壓濃縮回收乙醇時，溫度可以設(shè)定為45°C或以下。7、在對二氧化碳超臨界萃取后的藥渣進(jìn)行提取時，提取溶劑可以是30% -100%乙醇。8、在對二氧化碳超臨界萃取后的藥渣進(jìn)行提取時，提取方式可以是加熱回流提取、超聲提取或者滲漉提取。9、在對乙醇提取浸膏進(jìn)行大孔吸附樹脂富集時，使用的柱脂可以是D-101型或者 AB-8型，以及其他非極性、弱極性或者中等極性大孔吸附樹脂。10、在對乙醇提取浸膏進(jìn)行大孔吸附樹脂富集時，洗脫溶劑可以是水或不同濃度的乙醇，依照乙醇濃度由低到高依次洗脫。通過上述技術(shù)方案制備得到的提取物，具有明顯的抗肝損傷作用，可以用于制備保肝藥物制劑和保健食品。當(dāng)將上述提取物混合進(jìn)保肝藥物制劑和保健食品時，除這些提取物外，在不防礙本發(fā)明效果的范圍內(nèi)，可以根據(jù)需要適當(dāng)混合用于通常的藥物制劑和保健食品的其他成分中，例如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、羧甲淀粉鈉、微晶纖維素、乳糖、阿司巴坦、硬脂酸鎂等內(nèi)加輔料、外加輔料和包衣輔料。其型劑可以是任何一種藥學(xué)上所說的劑型，優(yōu)選片劑、丸劑、膠囊劑或口服液。本發(fā)明中藥復(fù)方提取物是藥食兼用的純天然的植物提取物，隨后的藥效實驗將證明，本發(fā)明中藥復(fù)方提取物具有抗肝損傷的作用。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例和表格，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實施例應(yīng)理解為僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。在閱讀了本發(fā)明記載的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等效變化和修飾同樣落入本發(fā)明權(quán)利要求書所限定的范圍。為說明方便，以下將本發(fā)明提取物簡稱為TQW。實施例1 (TQW對ConA誘導(dǎo)的肝損傷模型小鼠的保護(hù)作用)ConA誘導(dǎo)的肝損傷與肝炎病毒所致的肝損傷機(jī)理相似，本實施例用此模型來驗證 TQW對病毒型肝炎引起的肝損傷的保護(hù)作用。1材料與方法1. 1 材料清潔級ICR雄性小鼠60只，體重18 20g，4 5周齡，購自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) GLP中心。TQff混懸液將TQW混懸于蒸餾水中即得。ConA(刀豆蛋白A) IV型(sigma公司)，臨用時在無菌條件下，用0. 9%氯化鈉注射液配制成0. 2%溶液，0. 22um微孔濾膜過濾除菌。聯(lián)苯雙酯片(上海天平制藥廠)，臨用時配成水混懸液。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)試劑盒、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)試劑盒、小鼠Y 干擾素(IFN-Y)試劑盒、小鼠腫瘤壞死因子α (TNF-α)試劑盒(南京建成生物工程研究所)。1. 2分組、造模與給藥小鼠購買后適應(yīng)性喂養(yǎng)3天，將60只小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、聯(lián)苯雙酯組 (陽性對照組)和TQW低、中、高劑量組。于第4日上、下午，第5日上、下午，第6日上午灌胃給藥或等體積的蒸餾水0.2mL/ 只/次(藥物用蒸餾水稀釋成等體積)，共計5次。TQW低劑量組每次灌胃TQW(30mg/kg體重)，TQW中劑量組每次灌胃TQW(60mg/kg體重)，TQff高劑量組每天灌胃TQW(90mg/kg體重)，聯(lián)苯雙酯組每次灌胃聯(lián)苯雙酯(100mg/kg體重)，空白組和模型組每天灌胃等體積的蒸餾水。末次給藥后4h，禁食不禁水，除空白組尾靜脈注射0. 9%氯化鈉注射液外，其余5 組尾靜脈注射ConA20mg/kg體重。IOh后摘眼球取血，檢測各指標(biāo)。2實驗結(jié)果2. ITQff對ConA所致肝損傷小鼠血清ALT和AST的影響結(jié)果見表1，與空白組比較，模型組小鼠血清ALT、AST顯著升高，說明ConA誘發(fā)小鼠肝損傷模型成功。與模型組比較，TQW各組及聯(lián)苯雙酯組ALT、AST顯著降低。TQW高劑量組與聯(lián)苯雙酯組作用相當(dāng)。表1 TQW對ConA肝損傷小鼠血清ALT、AST的影響(X±SD，η = 10)
權(quán)利要求
1.一種具有保肝作用的中藥復(fù)方提取物，其提取方法如下以重量份計，按照桃仁4-6份、車前子2-4份、白花敗醬草2-4份、文冠果種仁2-4份、 當(dāng)歸2-4份、柴胡2-4份、白芍1-3份、甘草1-2份，稱取各藥材適量，混合粉碎，過藥典2號篩，藥粉進(jìn)行二氧化碳超臨界萃取，以乙醇為夾帶劑，在一定的工藝參數(shù)下萃取得棕黃色液體，減壓濃縮回收乙醇，最終得棕黃色粘稠油狀物。再將上一步二氧化碳超臨界萃取后得到的藥渣，用適當(dāng)濃度乙醇浸泡后提取，提取液干燥得浸膏，浸膏利用大孔吸附樹脂柱進(jìn)行富集，在一定的工藝參數(shù)下制得棕色粉末；將此粉末與二氧化碳超臨界萃取制得的棕黃色粘稠油狀物混合，即得本發(fā)明的中藥復(fù)方提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥復(fù)方提取物，其特征在于在進(jìn)行二氧化碳超臨界萃取時，萃取溫度為30-60°C，萃取壓力為20-60MPa，萃取時間為Ih或以上，夾帶劑無水乙醇用量為0. 1-lml/g藥粉，解析壓力為20MI^或以下，解析溫度為40°C或以下。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥復(fù)方提取物，其特征在于在對二氧化碳超臨界萃取后的藥渣進(jìn)行提取時，提取溶劑為30% -100%乙醇，第一次用量為10倍量，浸泡12小時，加熱回流提取或者超聲提取或者滲漉提取2小時，過濾，向藥渣中再加入5倍量30% -100%乙醇，再提取2小時，過濾，合并濾液，減壓干燥得浸膏。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥復(fù)方提取物，其特征在于在對乙醇提取浸膏進(jìn)行大孔吸附樹脂富集時，將浸膏加適量水稀釋后與等體積的D-101型大孔吸附樹脂混合拌勻，上樣于D-101型或者AB-8型，以及其他非極性、弱極性或者中等極性大孔吸附樹脂柱中，上樣量以生藥量與樹脂量之比計算為1 2，靜態(tài)吸附30分鐘，然后依次用10個柱體積的不同濃度的乙醇進(jìn)行洗脫，收集20% -50%乙醇洗脫液，減壓干燥后粉碎，制得棕色粉末。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的中藥復(fù)方提取物，其特征在于在進(jìn)行二氧化碳超臨界萃取時，萃取溫度為45°C，萃取壓力為40MPa，萃取時間為池，夾帶劑無水乙醇用量為0. 5ml/g藥粉，解析I壓力為lOMPa、溫度為40°C，解析II壓力為4MPa、溫度為25°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的中藥復(fù)方提取物，其特征在于對二氧化碳超臨界萃取后的藥渣進(jìn)行提取時，提取方式為加熱回流提取、超聲提取或者滲漉提取。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥復(fù)方提取物，其特征在于對乙醇提取浸膏進(jìn)行大孔吸附樹脂富集時，使用的柱脂為D-101型或者AB-8型，以及其他非極性、弱極性或者中等極性大孔吸附樹脂。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥復(fù)方提取物，其特征在于對乙醇提取浸膏進(jìn)行大孔吸附樹脂富集時，洗脫溶劑為水或不同濃度的乙醇，依照乙醇濃度由低到高依次洗脫。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥復(fù)方提取物，其特征在于對乙醇提取浸膏進(jìn)行大孔吸附樹脂富集時，將浸膏加適量水稀釋后與等體積的D-101型大孔吸附樹脂混合拌勻，上樣于 D-101型大孔吸附樹脂柱中(上樣量以生藥量與樹脂量之比計算為1 2)，靜態(tài)吸附30分鐘，然后依次用10個柱體積的水、10個柱體積的20%乙醇和10個柱體積的50%乙醇進(jìn)行洗脫，收集50%乙醇洗脫液，減壓干燥后粉碎，制得棕色粉末。
10.權(quán)利要求1-9中任何一項所述的中藥復(fù)方提取物在保肝藥物制劑及保健食品中應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有保肝作用的中藥復(fù)方提取物。本發(fā)明中的中藥復(fù)方提取物是以桃仁、白花敗醬草、車前子、文冠果種仁、當(dāng)歸、白芍、柴胡和甘草等八種中藥為原料，采用二氧化碳超臨界萃取技術(shù)和大孔吸附樹脂富集技術(shù)，在一定工藝參數(shù)下提取制得的提取物，該提取物具有顯著的抗肝損傷作用，該提取物可以直接安全地應(yīng)用于保肝藥物制劑和保健食品的制備。
文檔編號A61P1/16GK102362916SQ20111029134
公開日2012年2月29日 申請日期2011年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月30日
發(fā)明者周琦, 張寧, 張春蕾, 樸成玉, 王發(fā)善, 祁永華, 趙旭 申請人:王發(fā)善