專(zhuān)利名稱(chēng)：乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種磷脂復(fù)合物及其制備方法，特別涉及一種去甲斑蝥素衍生物的磷 脂復(fù)合物及其制備方法，屬醫(yī)藥制備技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
去甲斑蝥素為斑蝥素的合成衍生物，是由我國(guó)首先開(kāi)發(fā)的治療肝癌的新藥，主要 用于原發(fā)性肝癌的治療。文獻(xiàn)“去甲斑蝥素的藥學(xué)研究與臨床應(yīng)用進(jìn)展”(吳建梅等，中國(guó) 藥學(xué)雜志，2002，37 (8) :566 一 569)研究表明，由于臨床應(yīng)用時(shí)去甲斑蝥素的泌尿系統(tǒng)毒性 較大，其臨床最大用藥劑量有嚴(yán)格限制。文獻(xiàn)“肝靶向去甲斑蝥素修飾物的合成及其納米粒 的制備”(胡展紅等，中國(guó)藥學(xué)雜志，2009，44 (9) 679-684)和文獻(xiàn)“乳糖化-去甲斑蝥素納 米粒的肝靶向抗癌活性研究”(胡展紅等，中草藥，2010,41(12))中，公開(kāi)了一種利用乙二 胺為連接臂，將去甲斑蝥素與乳糖酸偶聯(lián)，合成新的化合物乳糖化-去甲斑蝥素，其在體內(nèi) 被肝細(xì)胞的去唾液酸糖蛋白受體(asialoglycoprotein receptor, ASGP-R)特異性識(shí)別，從 而提高藥物肝靶向性，降低藥物的腎毒性。但是，將乳糖化-去甲斑蝥素與磷脂制備成復(fù)合 物，目前國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種能有效改善乳糖化-去甲斑蝥素脂溶性的 乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物，且提供一種制備該復(fù)合物工藝簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，產(chǎn)率高 的的方法。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是提供一種乳糖化-去甲斑蝥素磷 脂復(fù)合物，乳糖化-去甲斑蝥素與磷脂的質(zhì)量比為1:1 1:5 ；所述磷脂的平均分子量為 700 800。其中，所述磷脂包括大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂或合成磷脂；磷脂優(yōu)選平均分子量 為750的大豆卵磷脂。所述乳糖化-去甲斑蝥素與磷脂的質(zhì)量比優(yōu)選為1:1.5。所述乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物的制備方法，包括如下步驟
(1)將磷脂溶于適量溶劑A中，攪拌溶解；所述溶劑A包括氯仿、二氯甲烷、甲醇、四氫 呋喃及其含有上述溶劑的各種比例的混合溶劑；
(2)稱(chēng)取與磷脂的質(zhì)量比為1 1 1 5的乳糖化-去甲斑蝥素，加入適量溶劑B中，超 聲分散；所述溶劑包括甲醇、乙醇及其含有上述溶劑的各種比例的混合溶劑；溶劑B的用量 為乳糖化-去甲斑蝥素的反應(yīng)濃度為5 100mg/ml ；
(3)將乳糖化-去甲斑蝥素混懸液加至磷脂溶液中，在溫度為25 35°C的條件下攪
拌；
(4)將所得溶液過(guò)濾，濾液旋蒸除去溶劑，真空干燥，得到黃色粉末狀乳糖化-去甲斑 蝥素磷脂復(fù)合物。
其中，所述溶劑A與溶劑B的用量體積比為1:1 1:5。本發(fā)明的原理是由于乳糖化-去甲斑蝥素的高水溶性和低滲透性，導(dǎo)致其口服 生物利用度低，使其臨床使用具有局限性，為改善高水溶性藥物的脂溶性，將藥物與磷脂按 一定配比在非質(zhì)子傳遞體系溶劑中結(jié)合而形成復(fù)合物，通過(guò)制備藥物磷脂復(fù)合物，其理化 性質(zhì)和生物學(xué)特性將發(fā)生很大改變，可改善藥物的脂溶性進(jìn)而提高其在體內(nèi)的吸收。具體 地說(shuō)，其依據(jù)是(1)乳糖化-去甲斑蝥素抗癌作用的發(fā)揮在于其結(jié)構(gòu)中氧橋結(jié)構(gòu)的完整， 并且其末端的半乳糖殘基可被肝臟表明的去唾液酸糖蛋白受體專(zhuān)一性識(shí)別，達(dá)到肝臟的主 動(dòng)靶向治療作用。(2)乳糖化-去甲斑蝥素結(jié)構(gòu)中有大量羥基存在，磷脂可與其發(fā)生氫鍵締 和，反應(yīng)容易進(jìn)行，產(chǎn)率高，終產(chǎn)物保留了乳糖化-去甲斑蝥素的藥效基團(tuán)。(3)利用藥物極 性基團(tuán)與磷脂締和，使藥物極性基團(tuán)受到屏蔽，達(dá)到提高乳糖化-去甲斑蝥素脂溶性的目 的。本發(fā)明所得復(fù)合物在HPLC上顯示與乳糖化-去甲斑蝥素相同的保留時(shí)間，說(shuō)明形 成的是復(fù)合物，而不是新的化合物，但該復(fù)合物與乳糖化-去甲斑蝥素和磷脂的物理混合 物在紅外光譜(IR)、差熱分析(DSC)及核磁共振分析(1H-NMR)中存在明顯差別頂中乳糖 化-去甲斑蝥素在3359. 98957CHT1處的酚-OH寬峰帶已與磷脂的-OH吸收峰重合，而磷脂 在1732. 07269cm"1處的-C=O吸收峰也向低波數(shù)移動(dòng)至1695. 42528CHT1，提示在形成磷脂復(fù) 合物的過(guò)程中，磷脂的-C=O與乳糖化-去甲斑蝥素-OH形成了一定強(qiáng)度的締和。磷脂復(fù)合 物與物理混合物-C=O吸收峰位置的差異，即1695. 42538CHT1和1737. 85913cm"1,以及指紋 區(qū)內(nèi)磷脂復(fù)合物與物理混合物的差別，都可以說(shuō)明制備的磷脂復(fù)合物并不是兩種物質(zhì)的簡(jiǎn) 單物理混合，其形成過(guò)程中有化學(xué)鍵締和；DSC中混合物在157°C 173°C之間表現(xiàn)出磷脂 的熱力學(xué)特性，但在189°C有較強(qiáng)烈的吸收峰，考慮為藥物吸熱峰。與藥物及磷脂相比，磷脂 復(fù)合物的DSC圖譜發(fā)生了明顯改變，藥物的吸熱峰消失，在119°C 182°C之間出現(xiàn)了多個(gè) 明顯的吸熱峰，提示形成磷脂復(fù)合物后，藥物和磷脂的熱力學(xué)性質(zhì)已被明顯改變；1H-NMR中 顯示，乳糖化-去甲斑蝥素糖基上的各氫向高場(chǎng)發(fā)生了部分位移，推測(cè)是糖基上的羥基與 磷脂中的氫鍵供體結(jié)合，形成的磷脂復(fù)合物中各共軛基團(tuán)使得電子云密度發(fā)生了改變。以 上四種圖譜說(shuō)明了所制備的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物不是新生成的化合物，但也不 同于其二者的簡(jiǎn)單物理混合物，而是以一種復(fù)合物的形式存在。由于上述技術(shù)方案的運(yùn)用，本發(fā)明技術(shù)方案的優(yōu)點(diǎn)在于
(1)制備乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物后，能夠有效提高藥物的脂溶性，從而改善口 服給藥后其在體內(nèi)的吸收，提高生物利用度。(2)所用原料成本低，反應(yīng)易于進(jìn)行，產(chǎn)率高，容易實(shí)現(xiàn)工業(yè)化大生產(chǎn)；在制備過(guò)程 中的有毒物質(zhì)二氯甲烷及甲醇都可通過(guò)旋蒸除盡；反應(yīng)復(fù)合物率達(dá)到97. 2%，終產(chǎn)物不需 要進(jìn)一步純化。因此，生產(chǎn)成本低，制備工藝簡(jiǎn)單，終產(chǎn)物產(chǎn)率高，純度高，容易實(shí)現(xiàn)工業(yè)化 大生產(chǎn)。


圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的乳糖化-去甲斑蝥素與混合物的HPLC分析結(jié)果比較； 圖2是本發(fā)明實(shí)施例提供的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物與混合物的頂分析結(jié)果
比較；圖3是本發(fā)明提供的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物與混合物的DSC分析結(jié)果比較； 圖4是本發(fā)明提供的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物與混合物的UV分析結(jié)果比較。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述。實(shí)施例一
稱(chēng)取大豆磷脂0. 075g溶于IOmL 二氯甲烷中，攪拌溶解；稱(chēng)取乳糖化_去甲斑蝥素 0. 05g，加入IOmL甲醇中，超聲分散后，加入到大豆磷脂溶液中，35°C水浴攪拌2小時(shí)，過(guò) 濾，濾液蒸去溶劑，真空干燥48小時(shí)，得乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物0. 122g(產(chǎn)率 97. 2%)。采用流動(dòng)相條件為乙腈pH3. 2磷酸水=10:90對(duì)乳糖化-去甲斑蝥素，磷脂，乳糖 化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物及物理混合物進(jìn)行HPLC分析，其結(jié)果參見(jiàn)附圖1，圖中，a為乳 糖化-去甲斑蝥素，b為磷脂，c為復(fù)合物，d為物理混合物；由圖1的結(jié)果表明，乳糖化-去 甲斑蝥素及其磷脂復(fù)合物在此條件下的色譜行為一致，保留時(shí)間為5. 188min,這說(shuō)明乳糖 化-去甲斑蝥素與磷脂形成的是一種復(fù)合物，而不是新的化合物。對(duì)乳糖化-去甲斑蝥素、磷脂、乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物及混合物進(jìn)行紅 外掃描，其結(jié)果參見(jiàn)附圖2。圖中，a為乳糖化-去甲斑蝥素，b為磷脂，c為復(fù)合物，d為 物理混合物；圖a顯示了的乳糖化-去甲斑蝥素的特征吸收峰1. -0H, 3359. 98957^1 ； 2. -C=O, 1694. 31676cm-1 ；圖 b 顯示 了磷脂的特征吸收峰1. -0H, 3423. 64035cm-1; 2. -CH2, 2926. 00699cm-1 ； 3. -C=O, 1732. 07269cm-1 ；4. -P=O, 1234. 43934cm-1 ；圖 c 中乳糖 化-去甲斑蝥素在3359. 98957CHT1處的酚-OH寬峰帶已與磷脂的-OH吸收峰重合，而磷脂 在1732. 07269cm"1處的-C=O吸收峰也向低波數(shù)移動(dòng)至1695. 42528CHT1，提示在形成磷脂復(fù) 合物的過(guò)程中，磷脂的-C=O與乳糖化-去甲斑蝥素-OH形成了一定強(qiáng)度的締和。磷脂復(fù)合 物與物理混合物-C=O吸收峰位置的差異，即1695. 42538CHT1和1737. 85913cm"1,以及指紋 區(qū)內(nèi)磷脂復(fù)合物與物理混合物的差別，都可以說(shuō)明制備的磷脂復(fù)合物并不是兩種物質(zhì)的簡(jiǎn) 單物理混合，其形成過(guò)程中有化學(xué)鍵締和。對(duì)乳糖化-去甲斑蝥素、磷脂、乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物及混合物進(jìn)行差 示熱分析，其結(jié)果參見(jiàn)附圖3。圖中，a為乳糖化-去甲斑蝥素，b為磷脂，c為復(fù)合物，d為 物理混合物；圖3結(jié)果表明，乳糖化-去甲斑蝥素在190°C左右有一強(qiáng)烈的吸熱峰，表明藥 物熔點(diǎn)為190°C。磷脂為一混合物，無(wú)明顯的熔點(diǎn)，在127°C 212°C內(nèi)都有不明的吸熱峰 出現(xiàn)。物理混合物在157°C 173°C之間表現(xiàn)出磷脂的熱力學(xué)特性，但在189°C有較強(qiáng)烈的 吸收峰，考慮為藥物吸熱峰。與藥物及磷脂相比，磷脂復(fù)合物的DSC圖譜發(fā)生了明顯改變， 藥物的吸熱峰消失，在119°C 182°C之間出現(xiàn)了多個(gè)明顯的吸熱峰，提示形成磷脂復(fù)合物 后，藥物和大豆磷脂的熱力學(xué)性質(zhì)已被明顯改變，磷脂復(fù)合物不是兩種物質(zhì)的簡(jiǎn)單混合物。對(duì)乳糖化-去甲斑蝥素、磷脂及乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物進(jìn)行核磁 共振分析，其結(jié)果參見(jiàn)附圖4。圖中，a為乳糖化-去甲斑蝥素，b為磷脂，c為復(fù)合 物，圖4結(jié)果表明，乳糖化-去甲斑蝥素1H-NMR (400MHz，氘代DMSO)，δ (ppm) :1.619 (4H, s, 1-H) ； 2. 982 (2H, q, J=7. 2, 3-H) ； 3.146 (1H, t, J=6. 8, 5-H) ； 3. 236 (1H, t, J=6. 4，5-H) ； 3. 321 (4H, m, 12—H, 15—H, 10-2H) ； 3. 399 (2H, t, J=4. 4，4_H) ； 3. 491 (2H, t, J=5. 6，16-H) ； 3. 579 (2H, m, 13-H, 14-H) ； 3. 672 (2H, m, 8_H, 9-H) ； 3. 961 (1H, s, 7-H) ； 4. 055 (1H, d, J=4. 4，6-H) ； 4. 255 (1H, d, J=6. 4，11-H) ； 4. 663 (2H, s, 2—H)；磷脂復(fù)合物 1H-NMR (400MHz, 氘代 DMS0)，δ (ppm) 1.629 (4H, s, 1-H) ； 2. 99 (2H, q, J=7. 2, 3-H) ； 3. 425 (4H, m, 12-H, 15-H, 10-2H) ； 3. 505 (2H, t, J=4. 4，4_H) ； 3. 518 (2H, t, J=5. 6，16-H) ； 3. 613 (2H, m ，13-H, 14-H) ； 3. 685 (2H, m, 8_H, 9-H) ； 0. 853 (4H, s, 6-H, 4_H)。實(shí)施例二
稱(chēng)取大豆磷脂0. 05g溶于IOmL 二氯甲烷中，攪拌溶解；稱(chēng)取乳糖化-去甲斑蝥素 0. 05g，加入IOmL甲醇中，超聲分散，加至大豆磷脂溶液中，25°C水浴攪拌1小時(shí)，過(guò)濾，濾液 蒸去溶劑，真空干燥48小時(shí)，得Lac-NCTD磷脂復(fù)合物0. 093g (產(chǎn)率93. 4%)。實(shí)施例三
稱(chēng)取大豆磷脂1. Og溶于IOmL 二氯甲烷中，攪拌溶解；稱(chēng)取乳糖化-去甲斑蝥素0. 5g， 加入IOmL甲醇中，超聲分散，加至大豆磷脂溶液中，30°C水浴攪拌1. 5小時(shí)，過(guò)濾，濾液蒸 去溶劑，真空干燥48小時(shí)，得乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物1. 42g (產(chǎn)率94. 7%)。實(shí)施例四
稱(chēng)取大豆磷脂50. Og溶于IOOmL 二氯甲烷中，攪拌溶解；稱(chēng)取乳糖化_去甲斑蝥素 10. 0g，加入IOOmL甲醇中，超聲分散，加至大豆磷脂溶液中，35°C水浴攪拌2小時(shí)，過(guò)濾，濾 液蒸去溶劑，真空干燥48小時(shí)，得乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物57. 84g (產(chǎn)率96. 4%)。
權(quán)利要求
1.一種乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物，其特征在于乳糖化-去甲斑蝥素與磷脂的 質(zhì)量比為1:1 1:5 ；所述磷脂的平均分子量為700 800。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物，其特征在于磷脂包 括大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂或合成磷脂；磷脂優(yōu)選平均分子量為750的大豆卵磷脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物，其特征在于乳糖 化-去甲斑蝥素與磷脂的質(zhì)量比優(yōu)選為1:1.5。
4.一種制備如權(quán)利要求1所述的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物的方法，其特征在于 包括如下步驟(1)將磷脂溶于適量溶劑A中，攪拌溶解；所述溶劑A包括氯仿、二氯甲烷、甲醇、四氫 呋喃及其含有上述溶劑的各種比例的混合溶劑；(2)稱(chēng)取與磷脂的質(zhì)量比為1:1 1:5的乳糖化-去甲斑蝥素，加入適量溶劑B中，超 聲分散；所述溶劑包括甲醇、乙醇及其含有上述溶劑的各種比例的混合溶劑；溶劑B的用量 為乳糖化-去甲斑蝥素的反應(yīng)濃度為5 100mg/ml ；(3)將乳糖化-去甲斑蝥素混懸液加至磷脂溶液中，在溫度為25 35°C的條件下攪拌；(4)將所得溶液過(guò)濾，濾液旋蒸除去溶劑，真空干燥，得到黃色粉末狀乳糖化-去甲斑 蝥素磷脂復(fù)合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種制備乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物的方法，其特征在 于溶劑A與溶劑B的用量體積比為1 1 1 5。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種利用磷脂與乳糖化-去甲斑蝥素的大量-OH形成氫鍵締和，得到乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物，該新復(fù)合物在保留乳糖化-去甲斑蝥素原抗癌活性的同時(shí)，顯著改善其脂溶性，因此能改善其在體內(nèi)的吸收，提高生物利用度。它是利用氫鍵將乳糖化-去甲斑蝥素和磷脂連接起來(lái)得到的新化合物，具有較好的脂溶性。其制備方法簡(jiǎn)單，產(chǎn)率高，具有保持原有抗腫瘤作用的基礎(chǔ)上，提高藥物體內(nèi)吸收，提高治療肝癌的療效的作用。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102068702SQ20101061892
公開(kāi)日2011年5月25日 申請(qǐng)日期2010年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月31日
發(fā)明者周奕, 張學(xué)農(nóng) 申請(qǐng)人:蘇州大學(xué)