專利名稱：非甾體消炎藥磷脂囊泡及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類消炎藥，具體涉及非甾體消炎藥(non-steroidalanti-inflammatory drug，NSAID)。
藥物對(duì)粘膜上皮的非直接刺激與NSAID抑制胃腸道分泌前列腺素有關(guān)。由于注射給藥時(shí)，對(duì)胃腸道的損害仍可出現(xiàn)，說明存在另一條副反應(yīng)途徑。胃粘膜屏障的某些成分(粘液和碳酸氫鹽)的分泌、上皮細(xì)胞的更新、粘膜免疫功能及局部供血等均受前列腺素的調(diào)節(jié)，而多數(shù)NSAID進(jìn)入體循環(huán)后主要分布于胃、小腸和腎，由于這些部位的前列腺素合成受抑，胃腸道粘膜出現(xiàn)損傷。依據(jù)上述原理，可從兩方面著手降低胃腸道副反應(yīng)降低對(duì)胃腸道的局部刺激將藥物制成腸溶制劑、緩/控釋制劑、對(duì)NSAID藥物微粒表面進(jìn)行修飾、對(duì)NSAID進(jìn)行酯化修飾、服用抗酸劑以降低胃酸分泌等，可在不同程度上緩解NSAID的胃腸道刺激性，但上述措施同時(shí)會(huì)帶來兩個(gè)問題藥物的吸收被推遲到小腸進(jìn)行，延遲起效；藥物在腸道釋放后，局部高濃度仍可造成潰瘍。
提高對(duì)COX2的選擇性COX有兩種同工酶COX1與COX2，NSAID的抗炎作用主要是通過抑制COX2實(shí)現(xiàn)的，對(duì)COX1的抑制則導(dǎo)致副作用。IC50(COX-2)/IC50(COX-1)的比值將決定藥物的利弊比。遺憾的是，目前多數(shù)常用NSAID對(duì)COX2的抑制作用都小于對(duì)COX1的抑制作用，因此副作用較大。利用COX1與COX2兩種酶分子結(jié)構(gòu)上的差異，可以合成出對(duì)COX2選擇性高的NSAID，降低對(duì)COX1的作用，從而減輕NSAID的副反應(yīng)。非特異性COX抑制劑一般分子較小，易通過COX1或COX2的開口進(jìn)入通道，與120位的精氨酸殘基建立氫鍵結(jié)合，從而競(jìng)爭(zhēng)性阻礙正常底物花生四烯酸的進(jìn)入，使酶無從發(fā)揮催化作用。特異性抑制劑由于帶有一個(gè)剛性側(cè)鏈(帶苯環(huán)，以磺?；蚧酋０坊鶠槎嘶?，且整個(gè)分子較大，難以進(jìn)入開口較小的COX1通道，故而不能發(fā)揮作用。但此類藥物仍能進(jìn)入口徑稍大，后段略有柔性的COX2通道，不僅能與120位的精氨酸殘基建立氫鍵，其帶有特殊基團(tuán)的側(cè)鏈還能伸入523位纈氨酸旁的側(cè)袋，在此建立共價(jià)鍵結(jié)合，故而仍能對(duì)COX2產(chǎn)生抑制。
盡管已有數(shù)個(gè)COX2選擇性NSAID上市，如塞來克西(Celebrex)、羅非克西(Vioxx)等，大多數(shù)醫(yī)生在給患者開COX2選擇性抑制劑時(shí)持謹(jǐn)慎態(tài)度，因?yàn)樗鼈冇锌赡苁挂殉霈F(xiàn)的潰瘍惡化。COX2選擇性抑制劑近期內(nèi)難以取代已應(yīng)用多年的其它非特異性NSAID。
因此，現(xiàn)在比較理想的預(yù)防/治療手段只有同服胃粘膜細(xì)胞保護(hù)劑米索前列醇。如果能依靠制劑手段實(shí)現(xiàn)對(duì)炎癥部位的靶向給藥，則更為簡(jiǎn)便，且具有普適性。
本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思是這樣的毛細(xì)血管壁內(nèi)皮細(xì)胞間有3nm～20nm的狹縫。急性炎癥時(shí)，炎癥部位毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞間空隙擴(kuò)大，可允許200nm以下的粒子透過。炎癥時(shí)微血管通透性提高的原因有(1)某些炎性介質(zhì)，如緩激肽、組胺能直接作用于微血管內(nèi)皮細(xì)胞上的收縮蛋白、微絲，從而使毛細(xì)血管與微靜脈的內(nèi)皮細(xì)胞收縮，緊密連接擴(kuò)大。(2)炎癥時(shí)，血液中纖維連接蛋白消耗增加，這樣細(xì)胞表面的纖維連接蛋白因補(bǔ)充血中不足而減少，導(dǎo)致微血管完整性破壞。病變狀態(tài)下，納米粒子可從毛細(xì)血管滲出至組織并長(zhǎng)時(shí)間滯留的現(xiàn)象稱為EPR效應(yīng)(enhancedpermeability and retention effect，EPR effect)。
利用炎癥部位毛細(xì)血管通透性提高的病理學(xué)特點(diǎn)，以將藥物包裹在納米粒內(nèi)，有可能實(shí)現(xiàn)對(duì)炎癥部位的被動(dòng)靶向給藥。LM Lichtenberger等研究發(fā)現(xiàn)，NSAID能夠與磷脂復(fù)合，并且復(fù)合物的消炎作用增強(qiáng)，同時(shí)對(duì)胃腸道的負(fù)作用降低(USP5,955,451 Sept21，1999)。
本發(fā)明根據(jù)NSAID與磷脂可復(fù)合的特點(diǎn)，在USP5,955,451的基礎(chǔ)上，制備了NSAID-磷脂囊泡，經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)，與NSAID溶液相比，它具有消炎作用提高、胃腸道刺激性下降的特點(diǎn)。
本發(fā)明的技術(shù)方案本發(fā)明的NSAID-磷脂囊泡為一種NSAID與磷脂的復(fù)合物經(jīng)處理得到的囊泡，所指的囊泡指的是粒徑為小于1000nm的膠體溶液及其凍干品，最好為小于500nm。
本發(fā)明所說的NSAID包括含游離羧基的所有NSAID，包含但不限于以下藥物苯乙酸或苯丙酸類阿氯芬酸、雙氯滅痛、苯氧苯丙酸、托美丁、水楊酰胺、非諾洛芬、氟比洛芬、舒洛芬、苯惡洛芬、布洛芬、酮洛芬、萘普生、奧沙普秦、依托度酸、酮咯酸等。
吲哚類葡美辛、阿西美辛、舒林酸、吲哚美辛等。
芬那酸類 甲氯芬那酸、甲芬那酸。
水楊酸類二氟尼柳、阿斯匹林、貝諾酯等。
吡唑啉酮類羥布宗、保泰松等。
氨基苯甲酸類氟滅酸、甲滅酸、尼氟滅酸。
本發(fā)明的制劑可以含有任何來源的藥學(xué)上可接受的磷脂包括豆磷脂、卵磷脂以及提純的各種磷脂，磷脂中含有磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、神經(jīng)酰胺等。磷脂中磷脂酰膽堿(PC)的含量在5％～100％(w/w)間。
NSAID與磷脂的投料摩爾比為(以PC的含量計(jì))NSAID∶PC(mol/mol)為0.1～10。
上述的NSAID-磷脂囊泡的制備包括如下步驟將配比量的NSAID與磷脂，溶于有機(jī)溶劑中，攪拌均勻，除去有機(jī)溶劑，加入緩沖液，使pH范圍為1～10，處理至粒徑降至1000nm以下，成品經(jīng)6號(hào)砂芯漏斗過濾。
處理的方式可為高壓勻質(zhì)化(壓力范圍為10KPa～100,000KPa)、超聲波處理、加壓經(jīng)膜擠出等。
所述及的有機(jī)溶劑為氯仿、丙酮、二氯甲烷、乙醇、甲醇、正己烷、環(huán)己烷中的一種或一種以上。
所說的緩沖液為pH1～10的緩沖液。
本發(fā)明的制劑可以通過靜脈注射、皮膚用藥、口服等形式用于需要這種治療的患者。
用于靜脈時(shí)，可將其制備成靜脈注射劑、靜脈注射粉針劑；用于皮膚時(shí)，可將其制備成透皮帖劑、軟膏；用于口服時(shí)，可將其制備成片劑、膠囊、滴丸；用于肺部或鼻腔給藥時(shí)，可以制成噴霧劑；用于直腸給藥時(shí)，可以制成栓劑；用于眼部給藥時(shí)，可以制成滴眼劑等。本發(fā)明的各種劑型可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法進(jìn)行制備。
本發(fā)明制備的NSAID磷脂囊泡的消炎作用，與NSAID相比，可提高0.5～5倍以上；同時(shí)，囊泡的胃腸道副作用下降至NSAID的1/3～1/10或更低。
實(shí)施例2吲哚美辛囊泡的制備取適量吲哚美辛與磷脂，溶于二氯甲烷，攪拌1h，真空抽去有機(jī)溶媒，加入緩沖液，高壓勻質(zhì)化處理至粒徑降至1000nm以下，成品經(jīng)6號(hào)砂芯漏斗過濾。大部分囊泡外形圓整，稍有一些囊泡外形不規(guī)則。囊泡的藥物包裹率在98％以上。
實(shí)施例3甲芬那酸囊泡的制備取適量甲芬那酸與磷脂，溶于二氯甲烷，攪拌1h，真空抽去有機(jī)溶媒，加入緩沖液，高壓勻質(zhì)化處理至粒徑降至1000nm以下，成品經(jīng)6號(hào)砂芯漏斗過濾。大部分囊泡外形圓整，也有一些囊泡外形不規(guī)則。囊泡的藥物包裹率在97％以上。
實(shí)施例4保泰松囊泡的制備取適量保泰松與磷脂，溶于二氯甲烷，攪拌1h，真空抽去有機(jī)溶媒，加入緩沖液，高壓勻質(zhì)化處理至粒徑降至1000nm以下，成品經(jīng)6號(hào)砂芯漏斗過濾。大部分囊泡外形圓整，也有一些囊泡外形不規(guī)則。囊泡的藥物包裹率在96％以上。
實(shí)施例5氟滅酸囊泡的制備取適量氟滅酸與磷脂，溶于二氯甲烷，攪拌1h，真空抽去有機(jī)溶媒，加入緩沖液，高壓勻質(zhì)化處理至粒徑降至1000nm以下，成品經(jīng)6號(hào)砂芯漏斗過濾。大部分囊泡外形圓整，有一些囊泡外形不規(guī)則。囊泡的藥物包裹率在98％以上。
實(shí)施例6阿斯匹林囊泡及其凍干品的制備取適量阿斯匹林與磷脂，溶于二氯甲烷，攪拌1h，真空抽去有機(jī)溶媒，加入緩沖液，高壓勻質(zhì)化處理至粒徑降至1000nm以下，成品經(jīng)6號(hào)砂芯漏斗過濾。大部分囊泡外形圓整，有一些囊泡外形不規(guī)則。囊泡的藥物包裹率在94％以上。往上述囊泡液中，加入乳糖、甘露醇、海藻糖，經(jīng)過凍干處理，得到穩(wěn)定的凍干品。
實(shí)施例7囊泡的胃腸道刺激性試驗(yàn)動(dòng)物150～180g SD雄性大鼠供試樣品陽性對(duì)照組酮洛芬粉末水混懸液(20mg/ml)試驗(yàn)組酮洛芬粉末+空白磷脂囊泡20mg/ml酮洛芬-磷脂囊泡20mg/ml大鼠空腹48h，每組5只，各灌胃2ml樣品，4h后處死，對(duì)胃粘膜損傷目測(cè)評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)以潰瘍指數(shù)表示，條索狀損傷的長(zhǎng)度大于1mm者測(cè)量其長(zhǎng)度，每mm計(jì)1分；寬度大于1mm者加倍計(jì)分。計(jì)分總和為該動(dòng)物的潰瘍指數(shù)。
表1 胃刺激性試驗(yàn)結(jié)果

★與酮洛芬相比p＜0.01▲與酮洛芬粉末+空白磷脂囊泡p＜0.01大鼠灌胃給藥后，對(duì)胃粘膜的損傷由大到小依次為酮洛芬＞＞酮洛芬+PC囊泡＞＞酮洛芬-PC囊泡，表明囊泡對(duì)胃粘膜的刺激性顯著低于酮洛芬原料，且這種保護(hù)作用并不是由于磷脂阻礙了酮洛芬與胃粘膜接觸，而是歸功于酮洛芬與PC的復(fù)合作用。
囊泡對(duì)胃的損傷顯著降低，主要原因有①對(duì)胃粘膜的直接刺激降低NSAID原料給藥后，與胃粘膜的磷脂復(fù)合，將疏水性粘膜轉(zhuǎn)化為親水性，導(dǎo)致胃酸逆向擴(kuò)散，造成損傷。與PC復(fù)合后，NSAID與胃粘膜的磷脂發(fā)生相互作用的機(jī)會(huì)下降，且研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)合物由于脂溶性提高，在pH2.0緩沖液-正辛醇系統(tǒng)的Ko/w是NSAID的2倍，復(fù)合物可快速離開胃粘膜入血。
②對(duì)COX-2的選擇性提高 NSAID與PC復(fù)合后，分子體積變大，難以進(jìn)入COX-1酶的內(nèi)腔，對(duì)COX-1的作用下降，可緩解由COX-1引起的胃腸道全身副作用。
③整體劑量降低由于藥效提高，可望降低整體使用劑量，因此對(duì)胃腸道的副作用能進(jìn)一步得到緩解。
實(shí)施例8囊泡的消炎作用動(dòng)物150～180g SD雄性大鼠供試樣品陰性對(duì)照組生理鹽水陽性對(duì)照組酮洛芬溶液(pH10.0，3mg/ml)試驗(yàn)組酮洛芬-磷脂囊泡3mg/ml模型對(duì)大鼠的右后足趾皮下注射含2.5％甲醛的生理鹽水0.1ml致炎，1h后尾靜脈注射供試樣品1ml(n＝5)，用排水法測(cè)定致炎前、給藥后1.5h、3.0h、4.5h大鼠致炎足趾體積，計(jì)算腫脹率與抑制率。
結(jié)果表2 大鼠灌胃給藥的消炎作用(n＝5)

▲與酮洛芬溶液相比p＜0.05 ★與酮洛芬隱性囊泡相比p＜0.05表3大鼠靜脈注射給藥的消炎作用 (n＝5)

★與酮洛芬溶液相比p＜0.01以酮洛芬溶液為對(duì)照計(jì)算相對(duì)抑制率以比較兩種給藥途徑間的差異

表4不同給藥途徑對(duì)相對(duì)抑制率的影響

可見無論靜脈注射或灌胃給藥，在甲醛致大鼠炎癥爪的模型上，囊泡的消炎作用遠(yuǎn)高于酮洛芬溶液，同時(shí)高于隱性囊泡，且靜脈注射的消炎作用更強(qiáng)。藥效提高的原因NSAID到達(dá)COX靶酶而發(fā)揮藥效的整個(gè)路徑為①進(jìn)入血循環(huán)后，到達(dá)炎癥部位的毛細(xì)血管，②從變寬的內(nèi)皮細(xì)胞連接處滲出，③透過炎癥細(xì)胞膜，④進(jìn)入COX疏水性內(nèi)腔而發(fā)揮抑制酶活性的作用。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合NSAID在體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)路徑，可以從宏觀至微觀逐個(gè)層次來分析囊泡的藥效高于溶液劑的原因①吸收入血加快 由于pH2.0時(shí)酮洛芬-PC復(fù)合物的Ko/w為酮洛芬的2倍，因此在胃部被吸收入血的速度與程度均得到提高。藥效試驗(yàn)也顯示，兩種給藥途徑中囊泡均優(yōu)于溶液，灌胃給藥時(shí)囊泡的藥效提高的幅度高于靜注給藥。
②透過炎癥性細(xì)胞的細(xì)胞膜的能力提高 酮洛芬的蛋白結(jié)合率在99％以上，因此酮洛芬在體內(nèi)主要以酮洛芬-白蛋白結(jié)合體的形式存在。由于親水性提高，酮洛芬-白蛋白結(jié)合體難于透過細(xì)胞膜，與靶酶接觸的幾率下降。酮洛芬-PC的脂溶性提高，利于其跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)。隱性囊泡的藥效下降，證明隱性修飾不利于炎癥細(xì)胞捕獲囊泡。
③更易進(jìn)入COX靶酶 COX1與COX2都有一個(gè)發(fā)夾狀(hairpinshaped)結(jié)構(gòu)，中間是一條狹長(zhǎng)的疏水性通道。在催化前列腺素合成時(shí)，底物花生四烯酸自通道口旁磷脂膜上釋放出來，隨即被吸入通道內(nèi)，在發(fā)夾狀的頂部發(fā)生扭轉(zhuǎn)，插入兩個(gè)氧原子，抽去一個(gè)自由基，構(gòu)成前列腺素結(jié)構(gòu)中的五碳環(huán)，并轉(zhuǎn)化為前列腺素G2與前列腺素H2。由于酮洛芬-磷脂復(fù)合物的脂溶性提高，更易進(jìn)入COX疏水性內(nèi)腔，對(duì)靶酶的作用增強(qiáng)；而酮洛芬-白蛋白結(jié)合體即使?jié)B入細(xì)胞膜，也難以進(jìn)入COX的疏水性內(nèi)腔，因此難以發(fā)揮藥效。
權(quán)利要求
1.一種非甾體消炎藥磷脂囊泡，為一種NSAID與任何來源的藥學(xué)上可接受的磷脂的復(fù)合物，其特征在于，該復(fù)合物為一種囊泡，其粒徑小于1000nm。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的非甾體消炎藥磷脂囊泡，其特征在于，囊泡粒徑小于500nm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的非甾體消炎藥磷脂囊泡，其特征在于，囊泡為膠體溶液及其凍干品。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的非甾體消炎藥磷脂囊泡，其特征在于，囊泡為膠體溶液及其凍干品。
5.根據(jù)權(quán)利要求1～4任一項(xiàng)所述的非甾體消炎藥磷脂囊泡，其特征在于磷脂中磷脂酰膽堿(PC)的含量為5％～100％(w/w)，NSAID與磷脂的摩爾比以PC的含量計(jì)為NSAID∶PC＝0.1～10。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的非甾體消炎藥磷脂囊泡，其特征在于所說的NSAID包括含游離羧基的所有NSAID。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的非甾體消炎藥磷脂囊泡，其特征在于所說的NSAID包含但不限于以下類藥物苯乙酸或苯丙酸類、吲哚類、芬那酸類、水楊酸類、吡唑啉酮類或氨基苯甲酸類。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的非甾體消炎藥磷脂囊泡，其特征在于NSAID包含但不限于以下藥物阿氯芬酸、雙氯滅痛、苯氧苯丙酸、托美丁、水楊酰胺、非諾洛芬、氟比洛芬、舒洛芬、苯惡洛芬、布洛芬、酮洛芬、萘普生、奧沙普秦、依托度酸、酮咯酸、葡美辛、阿西美辛、舒林酸、吲哚美辛、甲氯芬那酸、甲芬那酸、二氟尼柳、阿斯匹林、貝諾酯、羥布宗、保泰松、氟滅酸、甲滅酸或尼氟滅酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求1～8任一項(xiàng)所述的NSAID-磷脂囊泡的制備方法包括如下步驟將配比量的NSAID與磷脂，溶于有機(jī)溶劑中，攪拌，除去有機(jī)溶劑，加入緩沖液，使pH范圍為1～10，處理至粒徑降至1000nm以下，過濾。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于所述及的處理的方式包括高壓勻質(zhì)化、超聲波處理或加壓經(jīng)膜擠出。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于高壓勻質(zhì)化壓力范圍為10Kpa～100,000Kpa。
12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于所述及的有機(jī)溶劑為氯仿、丙酮、二氯甲烷、乙醇、甲醇、正己烷、環(huán)己烷中的一種或一種以上。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種非甾體消炎藥磷脂囊泡及其制備方法。本發(fā)明的NSAID－磷脂囊泡為一種NSAID與磷脂的復(fù)合物經(jīng)處理得到的囊泡，所指的囊泡指的是粒徑為小于1000nm的膠體溶液及其凍干品，本發(fā)明所說的NSAID包括含游離羧基的所有NSAID，NSAID與磷脂的投料摩爾比為(以PC的含量計(jì))NSAID∶PC＝0.1～10。NSAID－磷脂囊泡的制備包括如下步驟將配比量的NSAID與磷脂，溶于有機(jī)溶劑中，攪拌均勻，除去有機(jī)溶劑，加入緩沖液，使pH范圍為1～10，處理至粒徑降至1000nm以下，成品經(jīng)6號(hào)砂芯漏斗過濾。本發(fā)明制備的NSAID磷脂囊泡的消炎作用，與NSAID相比，可提高0.5～5倍；同時(shí)，囊泡的胃腸道副作用下降至NSAID的1/3～1/10。
文檔編號(hào)A61P29/00GK1415284SQ0213768
公開日2003年5月7日 申請(qǐng)日期2002年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月29日
發(fā)明者瞿文, 陳慶華, 朱寶泉 申請(qǐng)人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院