專利名稱：低pufa濃度的動(dòng)物飼料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及低濃度的一種或多種多不飽和脂肪酸(PUFA(s))[例如花生四烯酸]在(單胃和/或非反芻)動(dòng)物飼料中的應(yīng)用(例如，每千克動(dòng)物飼料低于0.1克的PUFA)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，即使在這些小用量下，PUFA(s)也可以改善豬、家禽、魚和肉用小牛的生長和飼料轉(zhuǎn)化率。此外，在飼料中也可存在一種或多種(如抗微生物)酶。
背景技術(shù)：
為了生產(chǎn)肉、魚和蛋，使動(dòng)物(例如豬、家禽、肉用小牛和魚)充分生長。給這些動(dòng)物喂食含各種動(dòng)物和/或植物來源的原料的食物以提供能量和蛋白質(zhì)。消耗的大多數(shù)飼料是由配合飼料工業(yè)商業(yè)法生產(chǎn)的，但相當(dāng)一部分是在農(nóng)場上生產(chǎn)的并直接喂食。飼料中補(bǔ)充了維生素和礦物質(zhì)以滿足動(dòng)物對(duì)這些必需營養(yǎng)物的需要。用工業(yè)法生產(chǎn)的酶作飼料添加劑幾乎已成為常規(guī)的做法。這類酶的例子包括植酸酶、α-淀粉酶、蛋白酶和各種植物細(xì)胞壁降解酶例如β-葡聚糖酶、木聚糖內(nèi)切酶和甘露聚糖酶。這些酶用于改善生長和飼料轉(zhuǎn)化率以及減少由豬、家禽和魚的糞肥造成的環(huán)境污染。然而，飼料成本是動(dòng)物生產(chǎn)中最重要的成本因素。
在二十世紀(jì)五十年代，人們認(rèn)識(shí)到，向動(dòng)物飼料中添加少量抗生素會(huì)在單胃動(dòng)物中導(dǎo)致改善了的動(dòng)物工藝結(jié)果(例如生長，飼料利用)。現(xiàn)在，常規(guī)使用抗生素作為飼料添加劑。這些抗生素對(duì)改善生長和飼料轉(zhuǎn)化率的作用方式仍沒有被完全理解。這類飼料添加劑的通用術(shù)語是生長促進(jìn)劑，例子包括阿維霉素(avilamycin)、維吉霉素、泰洛星、黃霉菌素和阿伏帕星。
人病原性細(xì)菌對(duì)抗生素的抗性正迅速提高。這已使患細(xì)菌感染的病人更難治愈。很多專家指責(zé)抗生素在動(dòng)物飼料中的廣泛應(yīng)用，因?yàn)闀?huì)加速對(duì)各種抗生素的抗性的積累。這已導(dǎo)致歐盟發(fā)出禁止大多數(shù)抗生素作為生長促進(jìn)劑在動(dòng)物飼料中使用的禁令?，F(xiàn)在，在歐盟范圍內(nèi)，只有少數(shù)幾種生長促進(jìn)劑仍允許使用。歐盟以外的其它國家有可能將由于消費(fèi)者和衛(wèi)生組織以及商業(yè)利益的壓力而效仿該禁令。因此，飼料工業(yè)對(duì)具有生長促進(jìn)效果而沒有任何對(duì)人的治療用途的天然添加劑特別關(guān)注。
如WO-A-00/21381中所述，作為在動(dòng)物飼料中使用抗生素的替代方式，已經(jīng)探索了兩種抗微生物酶和一種PUFA組合在一起的應(yīng)用。WO-A-00/21381提出了使用兩種不同的抗微生物酶和濃度為0.1克-1000克/千克動(dòng)物飼料的一種PUFA?，F(xiàn)已出乎意料地發(fā)現(xiàn)，即使(在動(dòng)物飼料中的)更低的PUFA濃度，在WO-A-00/21381中公開的濃度以下，仍然是有效的，而且對(duì)動(dòng)物是有益的。
鑒于消費(fèi)者和衛(wèi)生組織等的要求，農(nóng)場主和配合飼料工業(yè)都希望以得到準(zhǔn)許的方式，以最小的成本獲得最佳生長和飼料轉(zhuǎn)化率。然而，降低動(dòng)物飼料中添加劑(例如PUFA)的濃度不會(huì)顯著降低功效這一發(fā)現(xiàn)絕不是顯而易見的。
發(fā)明描述本發(fā)明基于這樣的發(fā)現(xiàn)，即，可以使用比以前所述的那些濃度更低濃度的PUFA來實(shí)現(xiàn)生長和飼料轉(zhuǎn)化率的相同或相似的改善(正如以前公開過的較高濃度那樣)。這意味著，可使用較少的PUFA實(shí)現(xiàn)相似的效果，導(dǎo)致動(dòng)物飼料組合物成本的降低和任何可能的副作用的減少。
PUFA的效果可以通過向本發(fā)明組合物中添加一種或多種抗微生物酶而得以提高。所述PUFA和酶可能協(xié)同作用而導(dǎo)致比任一組分單獨(dú)作用時(shí)生長和飼料轉(zhuǎn)化方面更大的改善。
本發(fā)明的第一個(gè)方面涉及一種適用于單胃或非反芻動(dòng)物的動(dòng)物飼料組合物，該組合物包含從低于(即，不多于)0.1下至0.0001克PUFA/千克飼料。一般而言，所述組合物將包含0.08、0.07或0.05至0.001或0.0001克PUFA/千克飼料。優(yōu)選0.02、0.01或0.005至0.002克PUFA/千克飼料，更優(yōu)選0.01至0.004或0.001克PUFA/千克飼料。
這些量是指存在的PUFA的重量。因此，如果以油(例如，具有例如30-40％的PUFA)的形式添加PUFA，那么可以相應(yīng)地計(jì)算存在(或添加)的油的量，例如通過用PUFA的量乘以100/X，其中X是油中PUFA的(重量)百分?jǐn)?shù)。所以，舉例來說，對(duì)于30或35至40、45或50％的PUFA含量，可添加的油的量可以相應(yīng)地變化。因此，所述的油可以是從0.33或0.25下至0.00033或0.00025克/千克飼料。以相同的基準(zhǔn)，使用關(guān)于前一自然段中PUFA量的數(shù)值，可以計(jì)算其它的量和中間范圍。
PUFA的量優(yōu)選是這樣的，它可以改善動(dòng)物的生長(例如，體重的增長)和/或飼料轉(zhuǎn)化率。
多不飽和脂肪酸(PUFAs)所述的PUFA既可以是單一的PUFA也可以是兩種或更多種不同的PUFAs。如果有兩種或更多種PUFAs，那么或者每種PUFA或者所有PUFAs的總量在規(guī)定量的范圍內(nèi)(例如，不多于0.1克/千克飼料的總PUFA含量)。所述或每種PUFA可以是n-3或n-6家族的。它優(yōu)選是一種C18、C20或C22 PUFA或者是一種具有至少18個(gè)碳原子和三個(gè)雙鍵的PUFA。所述PUFA(s)可以游離脂肪酸、鹽的形式、作為脂肪酸酯(例如甲酯或乙酯)、作為磷脂和/或以甘油單酯、二酯或三酯的形式提供。
合適的(n-3和n-6)PUFAs包括二十二碳六烯酸(DHA，226Ω3)，適當(dāng)?shù)氖堑米栽孱惢蛘婢?，例?溝鞭藻)Crypthecodinium或者(真菌)破囊壺菌屬(Thraustochytrium)；γ-亞麻酸(GLA，183Ω6)；α-亞麻酸(ALA，183Ω3)；共軛亞油酸(十八碳二烯酸，CLA)；二高-γ-亞麻酸(DGLA，203Ω6)；花生四烯酸(ARA，204Ω6)；和二十碳五烯酸(EPA，205Ω3)。
優(yōu)選的PUFAs包括花生四烯酸(ARA)，二十二碳六烯酸(DHA)，二十碳五烯酸(EPA)和/或γ-亞油酸(GLA)。特別優(yōu)選ARA。
所述PUFAs可以得自天然(例如，植物或海洋)來源或者可以由單細(xì)胞或微生物來源衍生或產(chǎn)生。因此，所述PUFA可以是(或得自)微生物、藻類或植物源(或來源)的。特別是，所述PUFA可以由細(xì)菌、真菌或酵母生產(chǎn)。真菌是優(yōu)選的，優(yōu)選是毛霉目(Mucorales)的真菌，例如，被孢霉屬(Mortierella)、須霉屬(Phycomyces)、布拉霉屬(Blakeslea)、曲霉屬(Aspergillus)、破囊壺菌屬、腐霉屬(Pythium)或蟲霉屬(Entomophthora)。ARA的優(yōu)選來源是得自高山被孢霉(Mortierellaalpina)、三孢布拉霉(Blakeslea trispora)、土曲霉(Aspergillusterreus)或Pythium insidiosum。藻類可以是溝鞭藻和/或包括紫球藻屬(Porphyridium)、菱形藻屬(Nitszchia)或Crypthecodinium(例如Crypthecodinium cohnii)。酵母包括畢赤酵母屬(Pichia)或酵母屬(Saccharomyces)的那些酵母，例如Pichia ciferii。細(xì)菌可以是丙酸桿菌屬(Propionibacterium)的細(xì)菌。
所述PUFA(s)可以一種(例如食用的)油的形式存在于或加到所述組合物中。該油可以是液體(在室溫下)。該油也可以是微生物的(例如單細(xì)胞)油。包含ARA的合適的油可得自DSM N.V.，Wateringseweg 1，P.O.Box 1，2600 MA Delft，The Netherlands，商標(biāo)為VEVODARTM。另一種可商購的(ARA)油是ARASCOTM，得自Martek Corporation，6480 DobbinRoad，Columbia，MD 21045，美國。其它PUFAs也是可以得到的，例如呈DHA油形式的DHA(Martek Corporation的DHASCOTM或者Pronova，Norway的DHA，商標(biāo)為EPAXTM)。
植物油包括黑加侖子油、琉璃苣油和報(bào)春花油(primrose oil)，而且往往含有Ω6 PUFA，例如GLA。它們還包括橄欖油、向日葵油和大豆油、大豆花油，例如烹飪用油和/或色拉油。
一些文獻(xiàn)描述了粗PUFA油的生產(chǎn)。含有ARA的微生物油公開于WO-A-92/13086(Martek)，含有EPA的微生物油公開于WO-A-91/14427(Martek)，含有DHA的微生物油公開于WO-A-91/11918(Martek)。從微生物來源提取PUFA油的各種方法可見于WO-A-97/36996和WO-A-97/37032(兩者都是Gist-Brocades)。制備含有ARA、DHA和EPA的油的方法也公開于WO-A-92/12711(Martek)。
在所述油中，優(yōu)選的是大部分PUFA(s)呈甘油三酯的形式。于是，優(yōu)選至少50％、例如至少60％，或者更優(yōu)選至少70％的PUFA(s)呈甘油三酯形式。然而，甘油三酯的量可以更高，例如油的至少85％、優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％或98％。在這些甘油三酯中，優(yōu)選至少40％、例如至少50％，而且更優(yōu)選至少60％的PUFA存在于甘油的α位(存在于甘油三酯主鏈中)，也稱為在1或3位。優(yōu)選的是，至少20％、例如至少30％，更優(yōu)選至少40％的PUFA(s)在β(2)位。
微生物油可以是一種粗油。它可能已經(jīng)從微生物或單細(xì)胞、藻類提取出來，例如通過使用一種溶劑，如超臨界二氧化碳、己烷或異丙醇。
酶所述飼料組合物也可以包含一種或多種抗微生物酶。在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物包含兩種或兩種以上的抗微生物酶。
優(yōu)選地，所述抗微生物酶中的一種或多種是抗細(xì)菌酶。這些酶可能是不同類型的和/或可能具有不同的活性。它們可以減少微生物可獲得的必須營養(yǎng)物的量。
一種(例如第一種)酶可能能夠破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁。該酶可能是一種可以攻擊或降解肽聚糖的酶。例如，該酶可能能夠裂解肽聚糖。用于該目的的一種優(yōu)選的酶是溶菌酶。該(第一種)酶可以1,000至1,000,000或1000,000，例如5,000或10,000至150,000或1,000,000，更優(yōu)選15,000或25,000至100,000或500,000 Shugar單位/千克動(dòng)物飼料的濃度存在。優(yōu)選的是，該第一種酶可以一定的重量存在，例如，如果使用母雞蛋清溶菌酶，在動(dòng)物飼料中給出的最終濃度為0.04-44毫克/千克飼料，優(yōu)選0.2或0.4至6.7或20毫克/千克飼料，更優(yōu)選0.8或1.1至4.4或10(例如1至5)毫克/千克飼料。
所述第二種酶可能能夠產(chǎn)生一種對(duì)細(xì)菌有毒的化合物。這可能是與細(xì)胞壁可被第一種酶破壞或降解的細(xì)菌相同或不同的細(xì)菌。所述化合物優(yōu)選是一種過氧化物，例如過氧化氫。因此優(yōu)選的酶是氧化酶。特別優(yōu)選的是葡糖氧化酶。該第二種酶可以一定的濃度存在，給出10至10,000，優(yōu)選25或100至1,500或5,000，更優(yōu)選50或200至1,000或2,500Sarrett U/千克動(dòng)物飼料。優(yōu)選的是，該第二種酶可以一定的重量存在，例如，如果使用一種(例如黑曲霉衍生的)葡糖氧化酶，給出在動(dòng)物飼料中的最終濃度為0.05至50毫克/千克飼料，優(yōu)選0.08或0.13至7.5或25毫克/千克飼料，更優(yōu)選或0.25或0.5至5.0或10毫克/千克飼料。
第三種酶或其它酶可能是一種脂肪酶，例如一種對(duì)細(xì)菌有毒的磷脂酶。該第三種酶可以一定的濃度存在，給出5至5,000，優(yōu)選10或25至2,500或4,000，更優(yōu)選50或100至1,000或700(蛋黃)單位/千克動(dòng)物飼料。優(yōu)選的是，該第三種酶可以一定的重量存在，例如，如果使用豬胰PLA2(例如在黑曲霉中產(chǎn)生的)，給出在動(dòng)物飼料中的最終濃度為0.005至5毫克/千克飼料，優(yōu)選0.01至0.025至2.5或4毫克/千克飼料，更優(yōu)選0.05或0.1至1.0或0.7毫克/千克飼料。
所述酶可以如下方式起抗微生物劑的作用a)破壞細(xì)胞壁；b)產(chǎn)生毒性化合物；c)除去必需營養(yǎng)物；或d)使生長所必需的酶失活。
上述每一點(diǎn)將被依次討論。
a)對(duì)于真菌、酵母、革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌來說，微生物細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)是不同的。為破壞這些不同類型的微生物的細(xì)胞壁，人們可需要不同的酶。例如，真菌和酵母細(xì)胞壁可以被甘露聚糖酶、殼多糖酶和/或β-葡聚糖酶破壞。然而，細(xì)菌細(xì)胞壁由于不同類型的結(jié)構(gòu)而對(duì)這些酶不敏感。革蘭氏陽性生物具有被某種蛋白質(zhì)覆蓋的肽聚糖層，但基本上僅由肽聚糖組成。該底物可以被溶菌酶(1，4-b-乙?；谫|(zhì)酶)降解。這可以將N-乙?；谒岬腃1和N-乙?；咸前返腃-4之間的肽聚糖裂解。
在革蘭氏陰性菌中，所述肽聚糖層被緊密的脂多糖-蛋白質(zhì)-二價(jià)陽離子-磷脂層覆蓋。該層可以阻礙溶菌酶在革蘭氏陰性菌中的效能。能破壞該緊密的脂多糖層的作用劑通過使該酶接近肽聚糖層而刺激溶菌酶的作用。
b)氧化酶能夠產(chǎn)生對(duì)大多數(shù)微生物致死性的過氧化氫。例如，葡糖氧化酶催化葡萄糖向葡糖酸和過氧化氫的轉(zhuǎn)化。乳中存在的黃嘌呤氧化酶也能產(chǎn)生過氧化氫。
可以通過酶促法產(chǎn)生的其它抗微生物化合物包括hypothiocyanate(由乳過氧化物酶產(chǎn)生)、氯胺(由髓過氧物酶產(chǎn)生)、游離脂肪酸(由脂肪酶產(chǎn)生)、多不飽和脂肪酸、溶血磷脂酰膽堿(由磷脂酶A2產(chǎn)生)和木糖醇-5-磷酸酯(由木糖醇磷酸化酶產(chǎn)生)。然而，該列舉決非窮舉。
c)可以通過一種氧化酶(例如葡糖氧化酶)從培養(yǎng)基中除去氧。氧的完全脫除阻止了需氧微生物的生長。
d)可借助其它酶使微生物生長所必需的酶失活。例如，巰基氧化酶可能能夠使那些活性取決于活性巰基的酶失活。
所有這些抗微生物酶可以在工業(yè)規(guī)模上生產(chǎn)和/或可能是重組的。溶菌酶是可商購的，分離自蛋清，或者可以是重組的。所述酶可以是天然產(chǎn)生的或者可以是其一種(例如，重組的)變體或突變體。
所述抗細(xì)菌酶優(yōu)選是重組法生產(chǎn)的，例如，通過在適宜的生物體中表達(dá)一種異源基因或cDNA，或者通過適宜的內(nèi)源基因的同源(超量)表達(dá)。例如，已經(jīng)在重組系統(tǒng)中超量表達(dá)了葡糖氧化酶基因(WO-A-89/12675，Chiron)。通過基因在黑曲霉(Aspergillus niger)中的表達(dá)，可以重組法表達(dá)溶菌酶(得自蛋清)(Archer，D.B.等，Bio/Technology 8741-745(1990)。還可使用溶菌酶突變體(通過蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)的)，它們可能具有更好的熱穩(wěn)定性和/或更強(qiáng)的抗微生物作用。
本發(fā)明的第二個(gè)方面涉及一種待加入一種或多種可食用的飼料物質(zhì)或成分的預(yù)混合物或添加劑組合物，例如用于制備一種(所述第一方面的)飼料組合物或者用于添加入已有的飼料中以形成一種(所述第一方面的)飼料組合物。這可能在所述組合物中包含1.0(或100)至0.001(或0.1)克/千克的PUFA(s)。優(yōu)選的是，所述添加劑或預(yù)混合物包含的PUFA(或其它組分，例如酶)是飼料的10至1000，例如25或50至750，優(yōu)選75或100至250或500倍。這是因?yàn)?，制備所述?dòng)物飼料時(shí)，所述預(yù)混合物可以被“稀釋”10至1,000倍(于是，所述預(yù)混合物占最終飼料的10％至0.1％)。所述預(yù)混合物可以呈微?；蝾w粒的形式。
本發(fā)明的第三個(gè)方面涉及一種制備動(dòng)物飼料組合物的方法，該方法包括，向一種動(dòng)物飼料或者向一種或多種可食用的飼料物質(zhì)或成分中添加(或補(bǔ)充)一種或多種PUFA(s)，得到每千克飼料從(低于)0.1到0.0001克的(最終)濃度。通常，所述PUFA(s)將以關(guān)于第一方面所述的濃度存在。
添加的PUFA可能是本發(fā)明第一方面中所述那些中的任意PUFA，但通常會(huì)是ARA。也優(yōu)選添加或存在一種抗微生物酶，更優(yōu)選添加或存在兩種或兩種以上抗微生物酶。這些抗微生物酶可能是本發(fā)明第一方面中所述那些中的任意抗微生物酶，但優(yōu)選將是葡糖氧化酶、溶菌酶和磷脂酶中的一種或多種。通常，所述酶將是葡糖氧化酶、溶菌酶和磷脂酶中的兩種(例如前兩種)或者優(yōu)選將是所有這三種。
動(dòng)物飼料的補(bǔ)充所述PUFA(s)和/或抗微生物酶可以與飼料物質(zhì)或成分分開地、各自地或者與其它飼料添加劑一起添加到所述動(dòng)物飼料組合物中。備選地，或者除此之外，所述PUFA(s)和/或抗微生物酶可以是所述飼料物質(zhì)之一的一個(gè)組成部分。本發(fā)明既包括用所述PUFA(s)(以及抗微生物酶，如果必要的話)制備一種飼料組合物，也包括給現(xiàn)有的飼料組合物補(bǔ)充所述PUFA(s)(以及抗微生物酶，如果存在的話)，在這種情況下，所述PUFA(s)可能存在于所述第二個(gè)方面的預(yù)混合物或添加劑組合物中。
用于向動(dòng)物飼料(外源性)添加所述PUFA(s)和/或(抗微生物)酶的一種特別優(yōu)選的方法是，以轉(zhuǎn)基因植物材料和/或(例如，轉(zhuǎn)基因)種子的形式添加所述PUFA(s)和/或抗微生物酶中的一種或多種。因此，所述PUFA(s)和/或酶可能已經(jīng)通過異源基因表達(dá)而合成，例如，可以在適宜的植物表達(dá)信號(hào)的控制下，將編碼所需(抗微生物)酶的基因克隆入植物表達(dá)載體中，所述植物表達(dá)信號(hào)例如是組織特異性啟動(dòng)子(例如種子特異性啟動(dòng)子)。同一方法可用于PUFA(s)，這時(shí)所述基因編碼參與PUFA生物合成途徑的酶?？蓪⒑谢虻谋磉_(dá)載體隨后轉(zhuǎn)化入植物細(xì)胞，而通過針對(duì)再生成完整植物而對(duì)轉(zhuǎn)化過的細(xì)胞進(jìn)行選擇?？梢允惯@樣獲得的轉(zhuǎn)基因植物生長并收獲，可以將植物的含有異源(對(duì)該植物而言)PUFA(s)和/或抗微生物酶的那些部分包含于所述組合物之一，或原樣包含或經(jīng)進(jìn)一步處理之后包含。
此處提及WO-A-91/14772，它公開了在(轉(zhuǎn)基因)植物中(異源)表達(dá)酶的一般方法，包括種子特異性表達(dá)酶的方法。異源PUFA(s)和/或抗微生物酶可含于轉(zhuǎn)基因植物的種子中，或者它可含于其它植物部分中，例如根，莖，葉，木質(zhì)，花，樹皮和/或果實(shí)中。
添加呈轉(zhuǎn)基因植物材料(例如，含有PUFA(s)和/或抗微生物酶的轉(zhuǎn)基因種子)形式的PUFA(s)/抗微生物酶可能需要加工該植物材料，以便獲得所述PUFA(s)/抗微生物酶，或者至少改善其利用率。這類加工方法可包括各種機(jī)械(例如研磨和/或粉碎)方法或熱機(jī)處理(例如擠出或膨脹)。
所述PUFA(s)和/或抗微生物酶可以一定濃度添加到飼料組合物中，該濃度作為食物組成、PUFA(s)和/或抗微生物酶的類型和目標(biāo)動(dòng)物種類的函數(shù)而變化。
本發(fā)明的組合物優(yōu)選不包含任何抗生素和/或抑球蟲劑。本發(fā)明的組合物可能還不含(添加的或補(bǔ)充的)礦物組分(例如鋅和/或碘)和/或抗壞血酸。
盡管所述抗微生物酶和PUFA(s)都可由添加到飼料組合物中的微生物產(chǎn)生，但對(duì)于很多情況，(所述生產(chǎn)用)微生物不會(huì)被添加到所述飼料中或存在于所述飼料中，或者至少活的(或生存的)生物體，例如細(xì)菌，在所述飼料中并不存在。因此，在這種情況下，該組合物不含產(chǎn)生這些化合物中一種或多種化合物的任何微生物(或鏈霉菌屬(Streptomyces)的微生物)。而且，該組合物可以沒有那些在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生乳酸的微生物(例如，那些乳桿菌屬(Lactobacillus)或腸球菌屬(Enterococcus)的微生物)。通常，在添加所述PUFA(s)以及(需要的話)抗微生物酶之前，將對(duì)所述飼料組合物進(jìn)行加熱以殺滅飼料中存在的任何細(xì)菌或者減少其數(shù)量。
在一些實(shí)施方案中優(yōu)選的是，將所述或每種PUFA(和任何酶)仍然存在于所述微生物(它產(chǎn)生所述或每種PUFA)內(nèi)部。因此，所述PUFA可能以微生物細(xì)胞的形式(例如生物量)添加?？梢詫⑺黾?xì)胞與動(dòng)物飼料(或與一種或多種飼料物質(zhì)或成分)混合。所述微生物可能不僅產(chǎn)生PUFA而且產(chǎn)生所述酶中的一種或多種。
在一個(gè)典型的PUFA生產(chǎn)(通過發(fā)酵)方法中，生產(chǎn)的PUFA的量可能是7至10克/千克肉湯(即，濕生物量)。因此，待加入所述飼料組合物中或存在于所述飼料組合物中的肉湯(濕細(xì)胞)的量可以這樣計(jì)算用70或100乘以所需的PUFA的量(例如，10克肉湯/千克飼料得到的PUFA濃度為0.1克/千克飼料)。如果改為添加或使用干燥過的生物量，那么干燥過的細(xì)胞可具有100至200，例如140至180克/千克細(xì)胞的PUFA含量，而且為了獲得所述的PUFA量，人們可以用10或20乘以PUFA的量得到干燥過的細(xì)胞的量/千克飼料。
動(dòng)物飼料的使用本發(fā)明的第四個(gè)方面涉及一種促進(jìn)單胃或非反芻動(dòng)物的生長和/或飼料轉(zhuǎn)化的方法。該方法包括，給所述動(dòng)物喂食濃度為每千克飼料從(低于)0.1克到0.0001克的一種或多種PUFAs(或者所述第一方面的飼料組合物或者由所述第三方面制備的組合物)。
合適的動(dòng)物包括農(nóng)畜、單胃動(dòng)物和/或非反芻動(dòng)物，例如，豬(或小豬)、家禽(例如雛雞，火雞、產(chǎn)卵母雞)、肉用小牛或者水生(例如海洋)動(dòng)物(例如魚)。
本發(fā)明的組合物可能在體內(nèi)(即，不是在體外)是有活性的，或者只有一旦被攝食或在動(dòng)物體內(nèi)時(shí)才是有活性的。因?yàn)樗鼋M合物可能太干了，例如它具有不高于10、20、30、40或50％的水含量，因此，所述PUFA可能不是有效的(例如作為一種抗微生物劑)。一旦被攝食和在動(dòng)物體內(nèi)(例如在胃或瘤胃中)時(shí)，可能就有足夠的液體(或水)使PUFA成為有活性的或有效的，例如一種抗微生物劑。
動(dòng)物飼料組分本發(fā)明的組合物，特別是添加劑或預(yù)混合物組合物，可以呈液體或固體形式。如果是一種固體，那么這可以是粉末、微粒、擠出物或者它可以是顆粒。對(duì)于固體形式來說，存在的水量可以低于20、15或者甚至低于10％，例如2至10％、3至8％或者4至7％。所述PUFA可以1-30％，例如2-20％，如3-15％，并且最優(yōu)選4-14％的量存在(以干物質(zhì)為基準(zhǔn))。其余組分可以包括碳水化合物和/或碳水化合物聚合物(例如淀粉和/或改性淀粉)，例如至少70、80、90或95％，如75-90％。例如，如果所述組合物呈顆粒、微粒或擠出物的形式，那么它可以具有涂層。因此，在組合物的外部可能有一個(gè)或多個(gè)涂層，包含一種或多種涂料。如果存在的話，所述涂層(或涂料)可以1-10％，例如2-6％，最優(yōu)選3-5％的量存在。所述組合物可以具有一種或多種穩(wěn)定劑(例如甘油和/或山梨醇)和/或一種或多種防腐劑(例如山梨酸鹽和/或苯甲酸鹽)。
如果所述組合物是一種液體，那么水(或水分)含量將較高。水含量可以高達(dá)40、50或60％，例如25-65％，最優(yōu)選35-55％。如果存在一種穩(wěn)定劑，它的量可以是45-65％，例如50-60％，最優(yōu)選52-58％。穩(wěn)定劑優(yōu)選是山梨醇和/或甘油。
關(guān)于制備顆粒和微粒，特別是基于碳水化合物的酶微粒的說明描述于WO-A-98/54980(國際申請(qǐng)No.PCT/EP98/03327)，其內(nèi)容并入本文作參考。
所述組合物可以包含一種載體，該載體可包含至少15％的可食用的碳水化合物聚合物。所述載體可呈微?；蚍勰┑男问?。然而，如果所述組合物是一種液體，它可呈溶液或漿料的形式。所述聚合物優(yōu)選包括葡萄糖或含葡萄糖的單位，盡管它可以含有吡喃葡萄糖單位、直鏈淀粉和/或支鏈淀粉(amylopeptin)。除了淀粉之外，或者作為淀粉的替代物，可以使用葡聚糖、果膠(peptin)或糖原。優(yōu)選的是，所述組合物(或所述固體載體)的至少15％，例如至少30％、至少40％，如至少60％，最優(yōu)選至少80％包含所述碳水化合物聚合物。
有關(guān)用于動(dòng)物飼料的含酶組合物的其它細(xì)節(jié)可見于WO-A-98/55599(國際申請(qǐng)No.PCT/EP98/03328，本文引用的該文件和所有其它文件的內(nèi)容并入本文作參考)。盡管該文件主要涉及植酸酶，但是其講授同樣適用于其它化合物，特別是酶。
所述第一方面的動(dòng)物飼料組合物通常將含有一種或多種飼料成分或物質(zhì)。這些成分和物質(zhì)是旨在被動(dòng)物消耗的成分和物質(zhì)，因此呈適合于動(dòng)物攝入和營養(yǎng)的形式。因此，這通常將排除人類食物，或者旨在被人消耗的食物或成分。優(yōu)選的是，所述飼料組合物既是可以食用的又是可以被動(dòng)物消化的。
適合的是，所述物質(zhì)和/或成分具有至少80、85、90或95％的干物質(zhì)含量。所述組合物(或者物質(zhì)和/或成分)的蛋白質(zhì)含量可以有很大變化，但可以是5-20％(如10-15％)，例如蔬菜和/或植物產(chǎn)物或其部分，例如蕎麥、稻、小麥、大麥或玉米?？梢蕴峁┚哂懈叩鞍踪|(zhì)含量(例如45-95％，如50-80％)的物質(zhì)或成分，例如花生、家禽羽毛、大豆(或其產(chǎn)品)、葵花(例如葵花籽)或酪蛋白。因此，優(yōu)選的動(dòng)物飼料組合物可包含下列中的一種或多種燕麥、豌豆(籽)、花生、大豆、葵花、canola、酪蛋白、椰子、玉米、肉、粟、馬鈴薯、稻、紅花和/或小麥。優(yōu)選的是，所述組合物(和物質(zhì)或成分)具有低于30％、25％、20％、15％或者甚至低于10％的粗纖維含量。同樣，鈣含量可以低于2％，例如1％，低于0.5％并且優(yōu)選低于0.2％。所述(動(dòng)物飼料組合物)的總磷含量優(yōu)選是2至0.01％，例如1至0.1％，最優(yōu)選低于0.5％。
根據(jù)待喂養(yǎng)的動(dòng)物的不同，確切的物質(zhì)和成分可以變化。一種替代性的組合物可包含下列物質(zhì)中的一種或多種面包房廢料、糖用甜菜、啤酒麥芽糟、canola、木薯、玉米、fababean、魚(例如鳀魚或鯡魚粉)、小扁豆、肉和/或粟。
本發(fā)明一個(gè)方面的優(yōu)選特征和特點(diǎn)，如做適當(dāng)變動(dòng)，也適用于另一個(gè)方面。
現(xiàn)將參照如下實(shí)施例以舉例的方式描述本發(fā)明，提供這些實(shí)施例只是為了闡述本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明范圍的限制。
實(shí)施例花生四烯酸的表征花生四烯酸(ARA)得自DSM Food Specialties，Agri Ingredients，PO Box 1，2600 MA DELFT，The Netherlands，商標(biāo)為VEVODAR。這是一種通過培養(yǎng)真菌高山被孢霉得到的微生物油(ARA含量至少為35％)。
抗微生物酶產(chǎn)品的表征獲得了商品形式的葡糖氧化酶(EC 1.1.3.4)，它是一種能產(chǎn)生過氧化氫的氧化酶，商標(biāo)為FERMIZYME GOTM1500，得自DSM FoodSpecialties，PO Box 1，2600 MA DELFT，The Netherlands。該酶制品表現(xiàn)的活性為1500 Sarrett單位/克。一個(gè)Sarrett單位是這樣的酶量在30℃，pH為5.9的磷酸鹽緩沖液中，過量氧和3.3％葡萄糖一水合物的存在下，在Warburg測(cè)壓計(jì)中，引起每分鐘吸收10mm3氧的酶量。該酶是由真菌曲霉屬產(chǎn)生的。
獲得了商品形式的得自雞蛋清的溶菌酶，商標(biāo)為DELVOZYMETM，得自DSM Food Specialties，PO Box 1，2600 MA DELFT，The Netherlands。該產(chǎn)品含20×106Shugar單位/克產(chǎn)品。一個(gè)Shugar單位定義為這樣的酶量在25℃，得自Sigma Chemicals的溶壁微球菌(Micrococcuslysodeikticus)懸浮液(0.25毫克/ml)中，在pH6.2和450nm的條件下，引起每分鐘吸光度降低0.001的酶量。
從Alpharma Inc.(Animal Health Division，One Executive Drive，F(xiàn)ort Lee，NJ 07024，USA)以商業(yè)途徑獲得了BMD(桿菌肽亞甲基雙水楊酸酯)作為BMD 50，它是一種含有50克活性物質(zhì)/lb的產(chǎn)品。
如WO96/36244中所述，通過在黑曲霉中生產(chǎn)豬胰PLA2而獲得了磷脂酶。磷脂酶濃度用蛋黃單位(EYU)來定義。一個(gè)EYU單位定義為這樣的磷脂酶量在pH8和40℃下，每分鐘從蛋卵磷脂釋放1μmol酸。
從Elanco Animal Health(500 East 96thStreet，Suite125，Indianapolis，IN 46240，USA)以商業(yè)途徑獲得了阿維霉素，商標(biāo)為MaxusTMG200。該產(chǎn)品含有20％活性物質(zhì)(阿維霉素)。
對(duì)比實(shí)施例1&2以及實(shí)施例3至5用適合于煎烤的雛雞進(jìn)行試驗(yàn)以確定花生四烯酸的最佳濃度。用適合于煎烤的母雞和公雞完成試驗(yàn)。剛從孵化場到達(dá)之后，就將動(dòng)物隨機(jī)分配于40個(gè)地板圈中，使每一個(gè)圈飼養(yǎng)15只雛雞。將8個(gè)圈分配給每一種處理；因此，每種處理重復(fù)8次(每種處理總共120只雞)。將這些雞圈置于人工加熱、有光照而且通風(fēng)的雞舍中。氣候條件就像通常使用的那樣。按照正常的免疫接種程序給動(dòng)物接種。實(shí)驗(yàn)持續(xù)到28天齡為止。
該實(shí)驗(yàn)包括如下處理(實(shí)施例1-5)(1)基本食物(陰性對(duì)照)；(2)基本食物+10毫克抗微生物生長促進(jìn)劑阿維霉素/千克飼料(陽性對(duì)照)；(3)基本食物+花生四烯酸至最終濃度為4毫克/千克飼料；(4)基本食物+花生四烯酸至最終濃度為2毫克/千克飼料；和(5)基本食物+花生四烯酸至最終濃度為1毫克/千克飼料。
將抗生素或花生四烯酸適當(dāng)?shù)鼗旌系交臼澄镏?。?.5mm的直徑將所述飼料造粒(在該過程中，顆粒的溫度不超過大約70℃)。不限量地給動(dòng)物提供飼料，水也是不限量地提供給動(dòng)物。
所用飼料(基本食物)的組成如下成分含量(％)小麥42黑麥10
大豆粉19全脂烤大豆5菜籽粉7.5大豆分離物2.5玉米面筋粉2.5大豆油2混合動(dòng)物脂肪 6礦物質(zhì)，維生素和氨基酸*3.5計(jì)算的含量ME適合于煎烤的雛雞(MJ/千克) 12.0粗蛋白(％)22.4粗脂肪(％)10.3可消化的賴氨酸(％)1.06可消化的甲硫氨酸+胱氨酸(％) 0.78*基本食物含有荷蘭作法中常見的維生素和痕量礦物質(zhì)水平。
沒有向食物中添加抗生素生長促進(jìn)劑(除了陽性對(duì)照之外)或抑球蟲劑。測(cè)定體重增量和飼料轉(zhuǎn)化率。
下表1表示了抗微生物生長促進(jìn)劑和不同濃度的花生四烯酸對(duì)1-28天齡的適合于煎烤的雛雞的體重增量和飼料轉(zhuǎn)化率的影響。
表1
與陰性對(duì)照(僅有基本食物)相比，用4毫克/千克和2毫克/千克的花生四烯酸喂養(yǎng)的適合于煎烤的雛雞顯示出大為改善的效能，用抗微生物生長促進(jìn)劑(陽性對(duì)照)喂養(yǎng)的雛雞也是這樣。甚至最低的ARA濃度(1毫克/千克)也表現(xiàn)出明確的改善。
對(duì)比實(shí)施例6至10提供這些實(shí)施例是為了表明，更高的PUFA濃度表現(xiàn)的改善的效果可以與其它實(shí)施例中提供的低得多的PUFAs濃度相比。
用適合于煎烤的公雛雞(Cobb)進(jìn)行試驗(yàn)，研究不同濃度的花生四烯酸與抗微生物酶葡糖氧化酶和溶菌酶組合的功效。剛從孵化場到達(dá)之后，就將動(dòng)物隨機(jī)分配于30個(gè)雞籠中，使每個(gè)雞籠飼養(yǎng)16只雛雞。將六個(gè)雞籠分配給每一種處理；因此，每種處理重復(fù)六次(每種處理總共96只雞)。將這些雞籠置于人工加熱、有光照而且通風(fēng)的雞舍中，使用一種三層雞籠系統(tǒng)。每個(gè)雞籠的底面積為0.98m2而且這些雞籠有鐵絲底部。雞舍每天光照24小時(shí)。實(shí)驗(yàn)期間，光強(qiáng)逐漸降低。實(shí)驗(yàn)過程中雞舍的溫度也根據(jù)實(shí)際的方案逐漸降低。試驗(yàn)期間，將濕度保持在大約為60％。按照正常的免疫接種程序給動(dòng)物接種以防傳染性支氣管炎和新城病病毒。
實(shí)驗(yàn)持續(xù)到28天齡為止。該實(shí)驗(yàn)包括如下處理(實(shí)施例6-10)(6)基本食物(陰性對(duì)照)；(7)基本食物+20克抗微生物生長促進(jìn)劑阿維霉素/噸(陽性對(duì)照)；(8)基本食物+溶菌酶(50,000 Shugar單位/千克飼料)+葡糖氧化酶(1,000 Sarret單位/千克飼料)+花生四烯酸至最終濃度為0.5克/千克飼料；(9)基本食物+溶菌酶(50,000 Shugar單位/千克飼料)+葡糖氧化酶(1000 Sarret單位/千克飼料)+花生四烯酸至最終濃度為1.0克/千克飼料；和(10)基本食物+溶菌酶(50,000 Shugar單位/千克飼料)+葡糖氧化酶(1000 Sarret單位/千克飼料)+花生四烯酸至最終濃度為2.0克/千克飼料。
將花生四烯酸、抗生素和酶適當(dāng)?shù)鼗旌系交臼澄镏小Ｒ?.5mm的直徑將所述飼料造粒(在該過程中，顆粒的溫度不超過大約70℃)。不限量地給動(dòng)物提供飼料，水也是不限量地提供給動(dòng)物。測(cè)定體重增量(BWG)和飼料轉(zhuǎn)化率(FCR)。
所用飼料(基本食物)的組成如下成分含量(％)小麥 50.0大豆粉 22.6全脂大豆(焙烤的) 5.0木薯 3.99菜籽粉 5.0魚粉 1.0羽毛粉 1.0大豆油 0.3混合動(dòng)物脂肪 7.0礦物質(zhì)和維生素預(yù)混合物*1.0石灰石 1.24磷酸一鈣 1.25鹽 0.32L-賴氨酸.HCl 0.13D，L-甲硫氨酸 0.16NatugrainTM摻和物 0.01計(jì)算的含量為ME適合于煎烤的雛雞(MJ/千克)11.9粗蛋白(％) 21.9粗脂肪(％) 9.8可消化的賴氨酸(％) 1.05可消化的甲硫氨酸+胱氨酸(％)0.78
*基本食物含有荷蘭作法中常見的維生素和痕量礦物質(zhì)水平。沒有向食物中添加抗生素生長促進(jìn)劑(除了陽性對(duì)照之外)或抑球蟲劑。
下表2表示了不同濃度的花生四烯酸與葡糖氧化酶和溶菌酶組合對(duì)體重增量和飼料轉(zhuǎn)化率的影響。
表2
對(duì)于用含有葡糖氧化酶、溶菌酶和花生四烯酸的食物喂養(yǎng)的適合于煎烤的雛雞來說，生長和飼料轉(zhuǎn)化率得到了改善(P＜0.05)。用最高濃度的花生四烯酸(2.0克/千克，實(shí)施例10)獲得的結(jié)果等同于關(guān)于用抗微生物生長促進(jìn)劑(陽性對(duì)照，實(shí)施例7)喂養(yǎng)的雛雞的結(jié)果。注意，出乎意料的是，改善的程度與其中PUFA(ARA)濃度降低了(至少五分之四)的那些實(shí)驗(yàn)相似。
對(duì)比實(shí)施例11和12以及實(shí)施例13和14用適合于煎烤的雛雞進(jìn)行試驗(yàn)，研究花生四烯酸、溶菌酶和葡糖氧化酶單獨(dú)的或者組合的功效。用在地板圈中喂養(yǎng)的適合于煎烤的雛雞進(jìn)行試驗(yàn)。剛從孵化場到達(dá)之后，就將動(dòng)物隨機(jī)分配于32個(gè)圈中，使每一個(gè)圈有20只雛雞。將八個(gè)圈分配給每一種處理。因此，每種處理重復(fù)八次(每種處理160個(gè)動(dòng)物)。將這些圈置于人工加熱、有光照而且通風(fēng)的雞舍中。保持氣候和衛(wèi)生條件類似于實(shí)踐中通常使用的那些條件。按照正常的免疫接種程序給動(dòng)物接種。實(shí)驗(yàn)持續(xù)到35天齡為止。
該實(shí)驗(yàn)包括如下處理(實(shí)施例11至14)(11)基本食物(陰性對(duì)照)；(12)基本食物+20克抗微生物生長促進(jìn)劑阿維霉素/噸(陽性對(duì)照)；(13)基本食物+花生四烯酸至最終濃度為4毫克/千克；和(14)基本食物+溶菌酶(100,000 Shugar單位/千克飼料)+葡糖氧化酶(1,000 Sarret單位/千克飼料)+花生四烯酸至最終濃度為4毫克/千克。
將花生四烯酸、抗微生物生長促進(jìn)劑和酶適當(dāng)?shù)鼗旌系交臼澄镏小Ｈ缓笤诓患诱羝臈l件下將所述飼料造粒。不限量地給動(dòng)物提供飼料和水。測(cè)定體重增量和飼料轉(zhuǎn)化率。
所用飼料(基本食物)的組成如下成分含量(％)小麥61大豆粉 28大豆油 1混合動(dòng)物脂肪6礦物質(zhì)、維生素、氨基酸 4計(jì)算的含量為ME(MJ/千克) 12.8粗蛋白(％) 21.0粗脂肪(％) 9.0沒有向食物中補(bǔ)充抗生素生長促進(jìn)劑(除了陽性對(duì)照之外)或抑球蟲劑。
下表3表示了單獨(dú)或者組合的花生四烯酸、溶菌酶和葡糖氧化酶對(duì)1至35天齡的適合于煎烤的雛雞的體重增量和飼料轉(zhuǎn)化率的影響。
表3
用花生四烯酸、溶菌酶和葡糖氧化酶的組合物喂養(yǎng)的適合于煎烤的雛雞表現(xiàn)出體重增量和飼料轉(zhuǎn)化率的改善。用含有抗微生物生長促進(jìn)劑的食物喂養(yǎng)的雛雞表現(xiàn)出很大的改善，而僅僅給予花生四烯酸的雛雞得到了良好的改善(在低濃度的花生四烯酸的情況下，后一種改善特別出乎意料)。
對(duì)比實(shí)施例15和16以及實(shí)施例17至22用雄性和雌性的適合于煎烤的雛雞進(jìn)行試驗(yàn)以確定不同濃度的花生四烯酸與不同的酶組合的功效。剛從孵化場到達(dá)之后，就將動(dòng)物隨機(jī)分配于64個(gè)底板圈中，使每一個(gè)圈有15只雛雞。將八個(gè)圈分配給每一種處理。因此，每種處理重復(fù)八次(每種處理120只雛雞)。將這些圈置于人工加熱、有光照而且通風(fēng)的雞舍中。氣候條件就像通常使用的那樣。按照正常的免疫接種程序給動(dòng)物接種。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到28天齡為止。
該實(shí)驗(yàn)包括如下處理(實(shí)施例15至22)(15)基本食物(陰性對(duì)照)；(16)基本食物+10毫克/千克的抗微生物生長促進(jìn)劑阿維霉素(陽性對(duì)照)；(17)基本食物+溶菌酶(50,000 Shugar單位/千克)+葡糖氧化酶(1,000 Sarret單位/千克)+花生四烯酸至總濃度為4毫克/千克；
(18)基本食物+溶菌酶(50,000 Shugar單位/千克)+葡糖氧化酶(200 Sarret單位/千克)+花生四烯酸至總濃度為4毫克/千克；(19)基本食物+溶菌酶(50,000 Shugar單位/千克)+葡糖氧化酶(100 Sarret單位/千克)+花生四烯酸至總濃度為4毫克/千克；(20)基本食物+溶菌酶(50,000 Shugar單位/千克)+磷脂酶(500單位/千克)+花生四烯酸至最終濃度為4毫克/千克；(21)基本食物+溶菌酶(50,000 Shugar單位/千克)+磷脂酶(500單位/千克)+花生四烯酸至最終濃度為2毫克/千克；和(22)基本食物+溶菌酶(50,000 Shugar單位/千克)+葡糖氧化酶(100 Sarret單位/千克)+花生四烯酸至最終濃度為2毫克/千克。
將抗微生物生長促進(jìn)劑、花生四烯酸和酶適當(dāng)?shù)鼗旌系交臼澄镏?。?.5mm的直徑將所述飼料造粒而且在該過程中，顆粒的溫度不超過大約70℃。不限量地給動(dòng)物提供飼料，水也是不限量地提供給動(dòng)物。測(cè)定體重增量(BWG)和飼料轉(zhuǎn)化率(FCR)。
所用飼料(基本食物)的組成如下成分含量(％)小麥42黑麥10大豆粉 19全脂大豆(焙烤的)5菜籽粉 7.5大豆分離物 2.5玉米面筋粉 2.5大豆油 2混合動(dòng)物脂肪6
礦物質(zhì)，維生素和氨基酸*3.5計(jì)算的含量為ME適合于煎烤的雛雞(MJ/千克)12.0粗蛋白(％) 22.4粗脂肪(％) 10.3可消化的賴氨酸(％) 1.06可消化的甲硫氨酸+胱氨酸(％)0.78*所述食物含有荷蘭作法中常見的維生素和痕量礦物質(zhì)水平。沒有向食物中添加抗生素生長促進(jìn)劑(除了陽性對(duì)照之外)或抑球蟲劑。
下表4表示了抗微生物生長促進(jìn)劑和不同組合的花生四烯酸和酶對(duì)1-28天齡的適合于煎烤的雛雞的體重增量和飼料轉(zhuǎn)化率的影響。
表4
結(jié)果表明，即使在只有低濃度的花生四烯酸(和一種或多種抗微生物酶)的情況下，溶菌酶、葡糖氧化酶和花生四烯酸的組合在改善體重增量和飼料轉(zhuǎn)化率方面也是有效的。磷脂酶可以代替花生四烯酸和葡糖氧化酶(的一部分)，但是將所有產(chǎn)品組合在一起可以表現(xiàn)出對(duì)其它任何處理方式進(jìn)一步的微小改善。
權(quán)利要求
1.一種動(dòng)物飼料組合物，每千克該動(dòng)物飼料組合物包含從低于0.1至0.0001克的一種多不飽和脂肪酸(PUFA)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的動(dòng)物飼料組合物，每千克飼料包含0.05到0.0001克的一種PUFA。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的動(dòng)物飼料組合物，其中所述PUFA包含一種n-3或n-6 C18、C20或C22 PUFA和/或是微生物、藻類、單細(xì)胞或植物來源的。
4.根據(jù)前述任一權(quán)利要求的組合物，其中所述PUFA呈游離脂肪酸、鹽、脂肪酸酯、磷脂或者甘油單酯、二酯或三酯的形式。
5.根據(jù)前述任一權(quán)利要求的組合物，其中所述PUFA包括花生四烯酸(ARA)或者存在于一種油中。
6.根據(jù)前述任一權(quán)利要求的組合物，它進(jìn)一步包含一種抗微生物酶，任選包含至少兩種抗微生物酶。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的組合物，其中所述抗微生物酶是一種抗細(xì)菌酶并且任選包括葡糖氧化酶、巰基氧化酶、黃嘌呤氧化酶、過氧化物酶、溶菌酶、β-葡聚糖酶和/或磷脂酶。
8.根據(jù)權(quán)利要求6的組合物，其中所述酶中的至少一種(a)能夠破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁；(b)能夠產(chǎn)生一種對(duì)細(xì)菌有毒的化合物；(c)能夠除去細(xì)菌的一種或多種必需營養(yǎng)物；和/或(d)能夠使生長所必需的一種或多種酶失活。
9.根據(jù)權(quán)利要求6-8任一項(xiàng)的組合物，其中所述抗微生物酶是溶菌酶、氧化酶和磷脂酶中的兩種或更多種并且任選是所有這三種。
10.根據(jù)權(quán)利要求6-9任一項(xiàng)的組合物，其中所述抗微生物酶得自動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品、植物、植物產(chǎn)品、藻類或藻類產(chǎn)品或者微生物和/或所述抗微生物酶是微生物來源的或者是重組蛋白質(zhì)。
11.根據(jù)權(quán)利要求6-10任一項(xiàng)的組合物，其中所述抗微生物酶得自微生物、由微生物產(chǎn)生或存在于微生物中，所述微生物例如是細(xì)菌、酵母或(絲狀)真菌。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的組合物，其中所述微生物是鏈霉菌屬(Streptomyces)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、埃希氏菌屬(Escherichia)、酵母屬(Saccharomyces)、克魯維酵母屬(Kluyveromyces)、漢遜酵母屬(Hansenula)、畢赤酵母屬(Pichia)、Yarrowia、假絲酵母屬(Candida)、曲霉屬(Aspergillus)、木霉屬(Trichoderma)、青霉屬(Penicillium)、毛霉屬(Mucor)、鐮孢屬(Fusarium)或腐質(zhì)霉屬(Humicola)的微生物。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的組合物，其中所述微生物是淺青紫鏈霉菌(Streptomyces lividans)、大腸埃希氏菌(Escherichia coli)、地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)、乳酸克魯維酵母(Kluyveromyceslactis)、黑曲霉(Aspergillus niger)或高山被孢霉(Mortierellaalpina)。
14.根據(jù)權(quán)利要求6-13任一項(xiàng)的組合物，其中所述抗微生物酶含于植物材料中，所述植物材料任選得自轉(zhuǎn)基因植物。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的組合物，其中所述抗細(xì)菌酶葡糖氧化酶和/或溶菌酶含于轉(zhuǎn)基因植物的種子中。
16.根據(jù)權(quán)利要求6-16任一項(xiàng)的組合物，它包含10-10,000Sarrett單位的葡糖氧化酶/千克飼料和/或1,000-10,000,000Shugar單位的溶菌酶/千克飼料和/或5-5,000蛋黃單位的磷脂酶/千克飼料。
17.根據(jù)權(quán)利要求6-16任一項(xiàng)的組合物，它包含0.05-50毫克葡糖氧化酶蛋白質(zhì)/千克飼料和/或0.044-44毫克溶菌酶蛋白質(zhì)/千克飼料和/或0.005-5.0毫克磷脂酶蛋白質(zhì)/千克飼料。
18.一種用于動(dòng)物飼料的添加劑或預(yù)混合物組合物，每千克組合物包含100-0.001克的一種PUFA。
19.一種制備動(dòng)物飼料組合物的方法，該方法包括，將一種PUFA與一種或多種飼料物質(zhì)或成分混合，或者在一種動(dòng)物飼料中添加一種PUFA，使每千克動(dòng)物飼料組合物中PUFA的濃度為低于0.1下至0.001克。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的組合物，其中所述PUFA得自天然(例如植物或海洋)來源或者是由單細(xì)胞或微生物來源生產(chǎn)的。
21.根據(jù)權(quán)利要求19或20的組合物，其中所述PUFA是由真菌、任選是毛霉目(Mucorales)屬的真菌生產(chǎn)的。
22.根據(jù)權(quán)利要求19-21任一項(xiàng)的組合物，其中所述PUFA是由被孢霉屬(Mortierella)的真菌、例如高山被孢霉(M.alpina)生產(chǎn)的。
23.一種改善單胃或非反芻動(dòng)物的生長和/或飼料轉(zhuǎn)化的方法，該方法包括，給所述動(dòng)物喂食一種每千克組合物含有低于0.1到0.0001克的一種PUFA的組合物、一種如權(quán)利要求1至17任一項(xiàng)所定義的組合物或者一種可按照權(quán)利要求19-22的方法制備的組合物。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的方法，其中所述動(dòng)物是豬、家禽(雛雞，火雞、產(chǎn)卵母雞)、肉用小?；蛩鷦?dòng)物。
全文摘要
公開了在單胃和/或非反芻動(dòng)物的動(dòng)物飼料中應(yīng)用低濃度的一種或多種PUFA以改善生長和飼料轉(zhuǎn)化率。所述濃度可以比本技術(shù)領(lǐng)域預(yù)期的濃度低得多，即，0.1－0.0001克/千克飼料，但仍然是有效的。這就能使農(nóng)場主在飼料中使用低濃度的PUFA，因而降低飼料成本。所述飼料中也可以存在一種或多種抗微生物酶。
文檔編號(hào)A61K31/20GK1545383SQ02816260
公開日2004年11月10日 申請(qǐng)日期2002年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2001年7月20日
發(fā)明者A·K·奇斯, A K 奇斯 申請(qǐng)人:Dsm Ip資產(chǎn)有限公司