專利名稱：藥用的微膠囊化乳芽孢桿菌的制作方法
背景技術(shù)：
1.與有關(guān)申請(qǐng)的交叉參考本申請(qǐng)是1994年9月7日提交的08/301,996號(hào)申請(qǐng)的部分繼續(xù)申請(qǐng)，而后者是1993年12月3日提交的08/161,659號(hào)申請(qǐng)的部分繼續(xù)申請(qǐng)。
2.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及含有微膠囊化乳芽孢桿菌的口服、局部和陰道內(nèi)施用的膠囊、片劑、乳膏、泡沫、油膏、粉劑或栓劑等劑型的藥物組合物，該藥物組合物用于治療或預(yù)防與抗菌素有關(guān)的腹瀉、皮膚和陰道感染。
3.現(xiàn)有技術(shù)概述抗菌素有關(guān)的腹瀉是廣譜抗菌治療的常見(jiàn)副作用，并且據(jù)信是由于用抗菌素治療而導(dǎo)致的腸內(nèi)菌叢轉(zhuǎn)移引起的，尤其是由于腸內(nèi)菌叢中的乳芽孢桿菌減少所致。這種狀況可以威脅患者的生命，并且如果是由難辨梭狀芽孢桿菌感染所引起的，那么該疾病非常難以治療。
先前有人試圖通過(guò)口服乳芽孢桿菌來(lái)治療與抗菌素有關(guān)的腹瀉。但是，已經(jīng)得到證實(shí)，由于兩個(gè)主要的原因，該治療僅獲得了有限的成功。第一，按照現(xiàn)有技術(shù)口服施用的乳芽孢桿菌與胃酸接觸，受到胃酸的破壞。因此，僅有不足的少量活乳芽孢桿菌達(dá)到下部腸道，它們需要在那里重新建立健康的乳芽孢桿菌菌叢。第二，在患有與抗菌素有關(guān)腹瀉的患者中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)短暫的不耐乳糖現(xiàn)象(本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員將這種不耐乳糖現(xiàn)象歸因?yàn)榭咕匾鸬哪c絨毛刷狀緣缺失)。此外，這種不耐乳糖現(xiàn)象甚至經(jīng)常發(fā)生在那些其他狀況正常的、沒(méi)有不耐日常產(chǎn)物或乳糖史的個(gè)體中。現(xiàn)有技術(shù)的乳芽孢桿菌制劑通常含有微量或殘留量的乳芽孢桿菌生長(zhǎng)基質(zhì)，因此其中含有乳糖、乳果糖和其他二糖。這些物質(zhì)一旦進(jìn)入與抗菌素有關(guān)腹瀉患者的下部腸內(nèi)，則會(huì)使不耐乳糖現(xiàn)象惡化。如上所述，在現(xiàn)有技術(shù)中存在改進(jìn)的余地。尤其是，在現(xiàn)有技術(shù)中存在著改進(jìn)用于治療與抗菌素有關(guān)的腹瀉以及用于治療或預(yù)防某些皮膚和陰道感染的藥物組合物和方法的需要。本發(fā)明提供了這種改進(jìn)方法。
發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)方面是，給患有與抗菌素有關(guān)腹瀉的患者口服存在于藥物組合物或給藥載體中的每單位劑量大于約103個(gè)活的微膠囊化的乳芽孢桿菌。服用乳芽孢桿菌以治療或預(yù)防腹瀉，并且該治療優(yōu)選在接受抗菌素治療的過(guò)程中或短時(shí)之后連續(xù)進(jìn)行。微膠囊化的乳芽孢桿菌還可以與甲硝噠唑或其他殺難辨梭狀芽孢桿菌的抗菌素聯(lián)合施用。雖然與胃酸接觸，但是有足夠量的微膠囊化的乳芽孢桿菌得以存活下來(lái)，同時(shí)通過(guò)胃部到達(dá)下部腸中，在那里它們有助于建立或重建健康的菌叢，并消除或緩解與抗菌素有關(guān)的腹瀉。
本發(fā)明的另一方面是含有微膠囊化乳芽孢桿菌的藥物組合物局部施用在皮膚上，以預(yù)防或治療皮膚感染，或者使用陰道乳膏、泡沫、油膏或栓劑來(lái)預(yù)防或治療陰道感染。
可以使用各種各樣給藥載體，例如明膠膠囊、片劑或液體劑型，以口服微膠囊化的乳芽孢桿菌。同樣地，可以使用各種各樣給藥載體，例如乳膏、泡沫、油膏、栓劑或與惰性粉劑(如淀粉或滑石粉)的混合物，以局部和/或在陰道內(nèi)使用微膠囊化的乳芽孢桿菌。
下面是對(duì)本發(fā)明的詳細(xì)描述，以及證明本發(fā)明作用的某些實(shí)驗(yàn)和結(jié)果的總結(jié)。
發(fā)明詳述按照本發(fā)明，嗜酸乳芽孢桿菌、鼠李糖乳芽孢桿菌或其他乳芽孢桿菌如保加利亞乳芽孢桿菌、嗜熱乳芽孢桿菌等是微膠囊化的，并且經(jīng)口、局部或陰道施用，用于預(yù)防或治療下述疾病和病癥。在下文中乳芽孢桿菌的各個(gè)種共同稱作此名，除非描述了具體的種名時(shí)才使用其更確定的名稱。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，與用未微膠囊化的乳芽孢桿菌治療或試圖治療某些疾病進(jìn)行比較，微膠囊化的乳芽孢桿菌在治療應(yīng)用上具有很大的優(yōu)點(diǎn)。首先，微膠囊化顯著增加了細(xì)菌的架藏期。但是，更為重要的是，在經(jīng)口服、局部或陰道內(nèi)施用于人或其他哺乳動(dòng)物體之后，膠囊的膜緩緩崩解并將乳芽孢桿菌逐漸釋放至其周?chē)h(huán)境中，即釋放到下部腸中、皮膚上或陰道內(nèi)。當(dāng)微膠囊化的乳芽孢桿菌經(jīng)口服施用時(shí)，該微膠囊化對(duì)乳芽孢桿菌提供了防胃液的保護(hù)作用，并使得活乳芽孢桿菌到達(dá)下部腸中，在那里它們可以具有有益的治療作用。
由于可以使用幾種劑型將微膠囊化的乳芽孢桿菌釋放到其作用部位(口服至下部腸中，局部用于皮膚，或陰道內(nèi)給藥)，一般來(lái)說(shuō)在每一單位劑型中必需含有至少約103個(gè)活乳芽孢桿菌，不管該單位劑型是明膠膠囊、乳膏、油膏、用于皮膚表面的粉劑或陰道栓劑。這就意味著一般來(lái)說(shuō)在每克或每毫升本發(fā)明藥物組合物中含有至少103個(gè)活微膠囊化的乳芽孢桿菌。更優(yōu)選的是，乳芽孢桿菌在給藥載體或藥物組合物中的濃度是每克或每毫升藥物組合物中約103至1012個(gè)活菌，尤為優(yōu)選的是105至1012個(gè)活菌。在此值得注意的是每克或每毫升1012個(gè)乳芽孢桿菌基本上表示了可以以每克或每毫升物質(zhì)中的濃度表示的最高乳芽孢桿菌數(shù)。本發(fā)明最優(yōu)選的局部或口服用乳芽孢桿菌的濃度是每毫升或每克組合物約106至107個(gè)活微膠囊化的乳芽孢桿菌。
在本發(fā)明優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，優(yōu)選鼠李糖乳芽孢桿菌。盡管有些細(xì)菌學(xué)家認(rèn)為鼠李糖乳芽孢桿菌是獨(dú)立的但與嗜酸乳芽孢桿菌有關(guān)的菌種，但是更嚴(yán)格地說(shuō)，鼠李糖乳芽孢桿菌是嗜酸乳芽孢桿菌的簡(jiǎn)單變種。正如本領(lǐng)域已知的，嗜酸乳芽孢桿菌和鼠李糖乳芽孢桿菌以及其他乳芽孢桿菌是“有益”菌，并形成健康的陰道內(nèi)菌叢，也是健康的下部腸菌叢中的一部分。這兩種菌已知產(chǎn)生某些殺菌素和過(guò)氧化氫，這些物質(zhì)有助于抑制致病菌。在本發(fā)明中鼠李糖乳芽孢桿菌超出嗜酸變種的優(yōu)點(diǎn)是鼠李糖乳芽孢桿菌更豐富(約8至10倍)，并且能夠發(fā)酵更多的碳水化合物(與嗜酸變種之比為23∶12)，并且鼠李糖乳芽孢桿菌產(chǎn)生L+乳酸，而不是象嗜酸變種那樣產(chǎn)生乳酸的外消旋混合物。具有上述優(yōu)點(diǎn)是由于鼠李糖變種能夠發(fā)酵更多的碳水化合物使其成為更強(qiáng)健、易存活的細(xì)菌。產(chǎn)生L+乳酸是有利的，因?yàn)長(zhǎng)+對(duì)映體具有殺真菌作用。
用于本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案的嗜酸乳芽孢桿菌和鼠李糖乳芽孢桿菌變種都可以購(gòu)買(mǎi)到，或者可以由實(shí)驗(yàn)菌株獲得。用于下述優(yōu)選實(shí)施方案的鼠李糖乳芽孢桿菌變種是從加拿大魁北克省的Institute RosellMontreal得到的。按照本發(fā)明將乳芽孢桿菌變種微膠囊化，并配制成適于口服、局部或陰道使用的藥物組合物。幾種將這些細(xì)菌微膠囊化的方法描述如下。將這些菌微膠囊化的目的在于增加其架藏期，如果是口服，確保足夠量的活乳芽孢桿菌活著到達(dá)下部腸中，并且如果是局部或陰道內(nèi)給藥，使其緩慢和逐漸的釋放。按照本發(fā)明，選擇用于將這些細(xì)菌微膠囊化的物質(zhì)或包衣材料，在腸或陰道環(huán)境中或者一旦用于皮膚(主要是由于潮濕)將破壞這些物質(zhì)的膜的完整性，并且釋放出乳芽孢桿菌。
下面描述將這些細(xì)菌微膠囊化的幾種方法。
微膠囊化的方法將除去培養(yǎng)基后已經(jīng)凍干的活的、凍干乳芽孢桿菌微膠囊化。這些細(xì)菌可以購(gòu)買(mǎi)到，或者可以由實(shí)驗(yàn)菌株得到。在目前優(yōu)選的實(shí)施方案中，鼠李糖乳芽孢桿菌購(gòu)自加拿大魁北克省的Institute Rosell Montreal。在營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中使生物體生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期。合適的培養(yǎng)基包括Thayer-Martin培養(yǎng)基、Trypticase Soy、腦-心灌注培養(yǎng)基，或者任何其他適用于培養(yǎng)這些生物體的濃縮培養(yǎng)基，對(duì)培養(yǎng)基沒(méi)有特別的限制。唯一重要的因素是這些微生物的成活力和數(shù)量，這些因素一般通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)臨床實(shí)驗(yàn)稀釋法測(cè)定，例如將定量稀釋的細(xì)菌涂布在血液瓊脂板或其他濃縮培養(yǎng)基上，在5-10％二氧化碳?xì)夥罩小⒃?7℃保溫24-48小時(shí)，然后對(duì)菌落計(jì)數(shù)。在0-4℃，以14,000×g的轉(zhuǎn)速離心，并在離心后用無(wú)菌的平衡鹽和5％葡萄糖溶液洗滌至少三次，除去營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基。用液氮將細(xì)菌“速凍”，然后在高真空下凍干。
膠囊化方法A在0-4℃，將如上所述新制得的、經(jīng)洗滌和凍干的細(xì)菌懸浮在10毫升5％葡萄糖鹽水溶液中，從而得到細(xì)菌的重懸浮液，其中在每毫升懸浮液中含有10-100億個(gè)生物體。除非另外指明，所有這些方法均在0-4℃進(jìn)行，以保持乳芽孢桿菌的生活力，這些細(xì)菌在室溫會(huì)失去生活力。將細(xì)菌懸浮液快速而輕柔地?cái)嚢?，同時(shí)加入0.2-0.4毫升藻酸鈉溶液(1.5％重量/體積)。然后經(jīng)帶護(hù)套的14個(gè)計(jì)量針用氮?dú)饬鲗⑸鲜龌旌衔镛D(zhuǎn)入4升圓底燒瓶中。該4升圓底燒瓶預(yù)先用5％白蛋白溶液洗滌，然后在65℃加熱至少10小時(shí)，并且在該方法中所用的針和管也做同樣處理。
之后在加壓下，用大注射器和氮?dú)饬魇股鲜龌旌衔飶?qiáng)行通過(guò)30個(gè)多斜面計(jì)量針。在30個(gè)計(jì)量針的針頭末端生成很小的液滴，該液滴被氮?dú)夂涂諝饬鞲稍铮?.3-2％氯化鈣的水溶液中收集這些液滴，在那里它們形成凝膠。然后，將其用0.08-0.13％的2-(N-環(huán)己基氨基)乙磺酸(CHES)溶液和1.0-1.5％的氯化鈣溶液洗滌至少三次。
將膠凝的液滴或小球進(jìn)一步用至少5倍過(guò)量的0.1％CHES和1.1％氯化鈣洗滌，并用生理鹽水溶液洗滌。將所得到的球在液氮中“速凍”，然后凍干。經(jīng)過(guò)這些步驟后，膠囊化的生物體可以用于本發(fā)明的制劑中。
膠囊化方法B作為膠囊化方法A的改進(jìn)方法，進(jìn)行以下步驟，以使細(xì)菌對(duì)陽(yáng)離子抗菌劑更具有抗性。在0-4℃進(jìn)行這些步驟。于是，在經(jīng)過(guò)了膠囊化方法A中所述的洗滌后，將所述物質(zhì)與聚L-賴氨酸(Sigma)溶液(0.05％w/v)反應(yīng)10分鐘。然后用生理鹽水(用乳酸緩沖至pH4.5)洗滌所得的球形反應(yīng)物。將所得到的球形反應(yīng)物在液氮中“速凍”，然后凍干。經(jīng)過(guò)這些步驟后，膠囊化的生物體可以用于本發(fā)明的制劑中。
膠囊化方法C在0-4℃，將新制得的、經(jīng)洗滌和凍干的細(xì)菌與羥丙基甲基纖維素混合，使細(xì)菌與羥丙基甲基纖維素的重量比為10/90，當(dāng)然其比例范圍可以在1/99至99/1的范圍內(nèi)變化。這將影響最終的質(zhì)量和膠囊化的生物體的生活力。應(yīng)該理解較高比例的纖維素將會(huì)在膠囊化方法中“保護(hù)”細(xì)菌。用“盤(pán)”包衣法將凍干的細(xì)菌和羥丙基甲基纖維素的混合物膠囊化。該方法用不銹鋼圓底燒瓶進(jìn)行，該燒瓶預(yù)先已經(jīng)用約1％的硬脂酸鎂的水懸浮液“涂布”。將可自由透過(guò)水的丙烯酸甲基丙烯酸酯共聚物與可部分透過(guò)水的丙烯酸甲基丙烯酸酯共聚物的混合物(分別是EUDRAGITRLTM和EUDRAGIT RSTM，從德國(guó)Rhom Pharm.Ltd.，購(gòu)得)以5-10％的濃度懸浮在丙酮-異丙醇(1∶1，含有1％w/v蓖麻油)中。兩種共聚物的比例可以是1∶1至1∶10，優(yōu)選1∶2。將該懸浮液裝入不銹鋼圓底燒瓶中。由于共聚物的懸浮液迅速殺死細(xì)菌，所以該方法采用羥丙基甲基纖維素對(duì)細(xì)菌的高比例快速進(jìn)行。因此，將少量細(xì)菌與纖維素的混合物加入不銹鋼燒瓶中，劇烈攪拌3-10分鐘，同時(shí)用氮?dú)饬鞲稍锲渲械奈镔|(zhì)。
膠囊化方法D在0-4℃和輕柔的攪拌下，將新制得的、經(jīng)洗滌和凍干的細(xì)菌迅速加入稠的聚乙烯吡咯烷酮(購(gòu)自德國(guó)BASF)懸浮液中，后者可以在用鹽平衡的5％葡萄糖溶液中(pH5.0，在4.5-8.0的范圍內(nèi))與1％二乙烯基苯(Biorad)交聯(lián)或不交聯(lián)2-12小時(shí)。然后將所得物質(zhì)“速凍”并凍干。
膠囊化方法E在輕柔的攪拌下，將新制得的、經(jīng)洗滌和凍干的細(xì)菌迅速加入聚乙烯吡咯烷酮(CrospovidoneTM)懸浮液中。尤其是，在0-4℃下將10克凍干的細(xì)菌加至50毫克聚乙烯吡咯烷酮(CrospovidoneTM)懸浮液中。經(jīng)過(guò)30-60分鐘的攪拌發(fā)生膠囊化，當(dāng)然可以攪拌更長(zhǎng)的時(shí)間。然后用干燥器在真空下除濕，或者將所得物質(zhì)“速凍”并凍干。
口服微膠囊化的乳芽孢桿菌給患有抗菌素引起的腹瀉或其他形式的急性或慢性腹瀉及其并發(fā)癥的患者口服微膠囊化的乳芽孢桿菌(按照目前優(yōu)選的實(shí)施方案微膠囊化的鼠李糖乳芽孢桿菌變種)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，按照本發(fā)明，用微膠囊化的乳芽孢桿菌進(jìn)行的治療顯著減輕或消除了抗菌素引起的腹瀉癥狀。采用本發(fā)明的治療方法可以使其腹瀉副作用顯著減小或消除的抗菌素的實(shí)例包括氯林可霉素、氨芐青霉素或四環(huán)素。本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員將容易理解，給患者服用抗菌素是治療感染所必須的，并且用本發(fā)明的微膠囊化的乳芽孢桿菌伴隨抗菌素進(jìn)行治療可以消除或減輕其副作用。如果是被難辨梭狀芽孢桿菌感染的患者，本發(fā)明還推薦用甲硝噠唑、萬(wàn)古霉素或其他合適藥物進(jìn)行治療，因?yàn)檫@些藥物能夠殺死難辨梭狀芽孢桿菌。
很多公知的通常適用于口服給藥的載體也可以用于本發(fā)明微膠囊化乳芽孢桿菌的口服給藥。一般來(lái)說(shuō)，微膠囊乳芽孢桿菌對(duì)患有抗菌素引起的腹瀉或其他形式急性或慢性腹瀉的成年患者的口服計(jì)量約為每天4×103至4×1012個(gè)活菌，優(yōu)選每天以4個(gè)基本相等的劑量給藥。更優(yōu)選的是，每天約4次口服約105至1012個(gè)活的微膠囊化的乳芽孢桿菌?？梢詫⒖诜┝康娜檠挎邨U菌與藥用賦形劑混合，這些賦形劑是本領(lǐng)域眾所周知的，用于形成片劑、粉劑、口服液、滴劑，或者這些微膠囊化的細(xì)菌可以裝入膠囊中并以膠囊的形式例如明膠膠囊給藥。但是口服液和滴劑應(yīng)該是新配制的，否則該液體將會(huì)破壞微膠囊膜，并使得細(xì)菌在與胃液接觸時(shí)對(duì)其成活力產(chǎn)生不利的影響。目前優(yōu)選的口服微膠囊化乳芽孢桿菌的方式是膠囊。因此，需要注意的是，用膠囊例如明膠膠囊作微膠囊化的乳芽孢桿菌容器被看作是本說(shuō)明書(shū)“可藥用賦形劑”的意圖，因?yàn)樗糜卺尫趴诜摹盎钚猿煞帧保次⒛z囊化的乳芽孢桿菌。其他可藥用賦形劑是本領(lǐng)域已知的制備片劑或粉末的物質(zhì)，例如淀粉、微晶纖維素、緩沖劑和矯味劑。在下面有關(guān)局部(皮膚)和陰道內(nèi)應(yīng)用的給藥載體的敘述中描述了其他賦形劑。盡管不是優(yōu)選的實(shí)施方案，但是微膠囊化的乳芽孢桿菌也可以與抗菌素或其他給患者施用的藥物結(jié)合制成口服劑型。
通過(guò)下列臨床實(shí)驗(yàn)證明口服微膠囊化的乳芽孢桿菌顯著減輕或消除抗菌素的腹瀉副作用的功效。
口服的臨床實(shí)驗(yàn)為了進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)，給5位有經(jīng)常發(fā)生抗菌素引起的腹瀉病史的患者口服膠囊化的乳芽孢桿菌以防止因抗菌素引起的腹瀉。在抗菌素治療開(kāi)始時(shí)，每天4次口服微膠囊化的乳芽孢桿菌，并持續(xù)到停止抗菌素治療后3天。所有這些患者針對(duì)適當(dāng)?shù)尼t(yī)療癥狀服用抗菌素，這與該項(xiàng)研究完全獨(dú)立。經(jīng)得患者口頭同意并詳細(xì)說(shuō)明該研究的潛在危險(xiǎn)和益處。用每一劑量106個(gè)膠囊化的乳芽孢桿菌(按照膠囊化方法B制備的)治療患者，其中含有口服安全的聚賴氨酸基質(zhì)。所服用的制劑是裝有如上所述劑量膠囊化微生物的明膠膠囊(每粒膠囊約106個(gè)活菌)。
表1患有抗菌素引起的腹瀉患者的情況患者以往抗菌素引起的編號(hào) 性別 年齡 腹瀉持續(xù)的時(shí)間 抗菌素抗菌素的劑量1 女 29 6-7天氯林可霉素 300毫克q.i.d.2 女 33 4-5天氯林可霉素 300毫克q.i.d.3 女 42 4-5天氨芐青霉素 500毫克q.i.d.4 女 45 3-4天氨芐青霉素 500毫克q.i.d.5 男 40 4-5天四環(huán)素 500毫克q.i.d.
“q.i.d.”是每天4次用膠囊化乳芽孢桿菌口服治療的結(jié)果在所有這些患者中均未出現(xiàn)腹瀉或其他腸部變化或癥狀。在這組患者中，沒(méi)有因該治療引起任何形式的不適當(dāng)?shù)淖饔?。在這組人群中取得的這一成功的治療結(jié)果僅僅可以歸因?yàn)橛媚z囊化的乳芽孢桿菌的口服治療?？诜景l(fā)明微膠囊化的乳芽孢桿菌不僅適用于治療人，也適用于治療其他哺乳動(dòng)物。
局部施用微膠囊化的乳芽孢桿菌以預(yù)防皮膚感染的臨床實(shí)驗(yàn)為了進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)，給5位有經(jīng)常發(fā)生皮膚感染史的患者局部施用膠囊化的乳芽孢桿菌以防止皮膚感染。選擇這些患者是因?yàn)樗鼈兘?jīng)常易患慢性皮膚感染。經(jīng)得所有患者口頭同意并詳細(xì)說(shuō)明該研究的潛在危險(xiǎn)和益處。每天3次將局部微膠囊乳芽孢桿菌施用在被感染的皮膚上，持續(xù)6個(gè)月。每次施用的乳芽孢桿菌的量為含有106個(gè)膠囊化的生物體(按照膠囊化方法D制備的)。將膠囊化的生物體與滑石混合，得到均勻的粉末，并施用在使用部位。施用在皮膚上的制劑中的活菌濃度為每克約106個(gè)細(xì)菌，根據(jù)治療面積使用大約0.5-1克。
表2局部使用膠囊化乳芽孢桿菌以阻止皮膚感染患者 性別與 分離出的直編號(hào) 年齡易感因素 人種 感染部位菌1 31 組成代謝類固醇濫用 白種男性 腹股溝 T.r.，T.v.2 33 組成代謝類固醇濫用 黑種男性 腹股溝 T.r.，T.v.3 27 組成代謝類固醇濫用 白種男性 腹股溝 T.r.，T.m.4 59 病態(tài)肥胖，糖尿病白種女性 腹血管翳C.a.5 39糖尿病白種女性 腹血管翳C.a.
C.a.是白色假絲酵母，T.r.是深紅色發(fā)癬菌，T.v.是疣狀發(fā)癬菌，T.m.是須發(fā)癬菌。
局部施用膠囊化乳芽孢桿菌的結(jié)果在此研究中，在每天三次局部施用微膠囊化的乳芽孢桿菌的任何患者中，在整個(gè)研究期間，均未觀察到酵母感染。而且，在這些患者中沒(méi)有任何形式的不適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)。因此應(yīng)該理解，局部施用本發(fā)明微膠囊化的乳芽孢桿菌不僅限于上述實(shí)驗(yàn)中5位患者接受治療的皮膚部位。本發(fā)明的藥物組合物實(shí)際上適用于治療或預(yù)防人以及哺乳動(dòng)物任何皮膚部位的感染。
陰道內(nèi)施用微膠囊化的乳芽孢桿菌以降低感染危險(xiǎn)的臨床實(shí)驗(yàn)正常的陰道菌叢必需含有適當(dāng)?shù)娜檠挎邨U菌作為主要的菌種為當(dāng)代醫(yī)學(xué)和科學(xué)思想所認(rèn)同，并且在大量科學(xué)文獻(xiàn)中有所反映。另外，合乎需要的是，菌叢的乳芽孢桿菌能夠產(chǎn)生過(guò)氧化氫和殺菌素。為了證明局部陰道施用微膠囊化的乳芽孢桿菌可用于防止陰道感染，選擇有在一年中多于六次經(jīng)常發(fā)生陰道感染歷史并對(duì)陰道感染有易感因素的5位患者，用微膠囊化的乳芽孢桿菌進(jìn)行局部陰道治療。經(jīng)得所有這些患者口頭同意并詳細(xì)說(shuō)明該研究的潛在危險(xiǎn)和益處。每天在晚上就寢時(shí)局部施用微膠囊化的乳芽孢桿菌，持續(xù)6個(gè)月。出于倫理道德方面的原因，該研究不設(shè)“安慰劑組”，而以患者以前的歷史作為“對(duì)照”。在該實(shí)驗(yàn)中，所有這些患者在該研究開(kāi)始之前一周于就寢時(shí)用克霉唑(商品名Mycelex-G500，每粒栓劑500毫克)進(jìn)行治療。這一治療是必須的，因?yàn)樗羞@些患者都有被如下面表3中所示的真菌感染的癥狀，在此實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前必須將這些真菌根除。用每一劑量106個(gè)膠囊化的乳芽孢桿菌(按照膠囊化方法C制備的，其中含有纖維素基質(zhì))治療患者。膠囊化方法C的產(chǎn)物可以在模中制成固體或半固體的栓劑，以便于容易地插入陰道內(nèi)。在該栓劑中可以加入或不加入纖維素或乳糖或其他常規(guī)成分。
因此，需要注意的是，一般來(lái)說(shuō)，對(duì)于局部應(yīng)用和陰道內(nèi)應(yīng)用，可以使用本領(lǐng)域已知的多種載體(制劑)。例如，可以將微膠囊化的乳芽孢桿菌與玉米淀粉、滑石或其他合適的粉末物質(zhì)混合?？梢灾瞥扇楦?、泡沫和油膏以及常規(guī)栓劑，其中除了活性成分微膠囊化的乳芽孢桿菌之外，可以使用填料例如微晶纖維素、羥丙基甲基纖維素、硬脂酸鎂、二氧化硅和乳糖。在栓劑、或乳膏、泡沫、油膏、粉末或本發(fā)明其他制劑中可以包括的其他可有可無(wú)的成分是香料、薄荷醇、桉葉油、水楊酸甲酯或其他用作局部冷卻劑的相關(guān)的水楊酸酯；用作抗炎劑的氫化可的松或相關(guān)抗炎類固醇(每粒栓劑1-500毫克)；用作潤(rùn)濕劑和溫和殺菌劑的EDTA；作為潤(rùn)濕劑和用于“使其具有結(jié)構(gòu)特征”的丙二醇或其他可藥用二元醇、對(duì)羥基苯甲酸甲酯或有關(guān)的對(duì)羥基苯甲酸酯衍生物；用作殺精子劑和溫和殺菌劑的對(duì)二異丁基苯氧基聚乙氧基乙醇、壬苯聚醇-9或十二烷二醇月桂酸-酯；用作殺精子劑、溫和殺菌劑和潤(rùn)濕劑的tritions和苯聚醇。
表3陰道內(nèi)使用膠囊化乳芽孢桿菌以阻止陰道感染治療前每 治療前分離 治療后分離出患者編號(hào)年陰道感 出的主要微 的主要微生物和年齡 易感因素染次數(shù)生物1糖尿病，肥胖 9C.a. L.a.，L.r.33歲2糖尿病，肥胖 10 C.a. L.a.，L.r.45歲3肥胖，細(xì)胞毒素治療 8C.g. L.a.，L.r.29歲4糖尿病，肥胖，細(xì)胞毒 11 C.a.，C.p. L.a.，L.r.41歲 素治療，自免疫疾病5糖尿病，肥胖，細(xì)胞毒 10 C.t. L.a.，L.r.37歲 素治療C.a.是白色假絲酵母，C.g.是團(tuán)假絲酵母，C.t.是熱帶假絲酵母，C.p.是近平滑假絲酵母，L.a.是嗜酸乳芽孢桿菌，L.r.是鼠李糖乳芽孢桿菌。
陰道施用膠囊化乳芽孢桿菌的結(jié)果在就寢時(shí)使用局部、陰道內(nèi)施用的微膠囊化的乳芽孢桿菌的患者的研究中，整個(gè)研究期間，均未觀察到酵母感染。而且，在這些患者中沒(méi)有任何形式的不適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)，并且實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在治療后，陰道菌叢的主要生物體是嗜酸乳芽孢桿菌或鼠李糖乳芽孢桿菌。
權(quán)利要求
1.藥物組合物，該組合物在單位劑量中含有至少約103個(gè)活乳芽孢桿菌，所述乳芽孢桿菌是微膠囊化的，因此可以在組合物的貯存過(guò)程中保持存活，用作乳芽孢桿菌膠囊化包衣的物質(zhì)在與水分或其他因素延長(zhǎng)接觸時(shí)間時(shí)釋放出乳芽孢桿菌，以及可藥用的微膠囊化乳芽孢桿菌的給藥載體，所述給藥載體包括可藥用賦形劑。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物，該組合物在單位劑量中含有至少約105個(gè)活嗜酸乳芽孢桿菌或其鼠李糖乳芽孢桿菌變種。
3.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述細(xì)菌是鼠李糖乳芽孢桿菌變種。
4.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中給藥載體是適于給人類患者口服微膠囊化乳芽孢桿菌的載體。
5.權(quán)利要求4的藥物組合物，其中給藥載體包括明膠膠囊。
6.權(quán)利要求5的藥物組合物，該組合物在一粒膠囊中含有至少約105個(gè)活嗜酸乳芽孢桿菌或其鼠李糖乳芽孢桿菌變種。
7.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中給藥載體是適于對(duì)人類患者皮膚局部釋放微膠囊化乳芽孢桿菌的載體。
8.權(quán)利要求7的藥物組合物，其中每1克和1毫升該組合物含有至少約106個(gè)活嗜酸乳芽孢桿菌或其鼠李糖乳芽孢桿菌變種。
9.權(quán)利要求8的藥物組合物，其中可藥用賦形劑是粉劑。
10.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中給藥載體是適于給人類患者陰道內(nèi)釋放微膠囊化乳芽孢桿菌的載體。
11.權(quán)利要求10的藥物組合物，包括陰道栓劑。
12.權(quán)利要求11的藥物組合物，其中每粒栓劑含有至少約106個(gè)活嗜酸乳芽孢桿菌或其鼠李糖乳芽孢桿菌變種。
13.適于給人類患者口服給藥的藥物組合物，該組合物在單位劑量中含有至少約103個(gè)活乳芽孢桿菌，所述乳芽孢桿菌是微膠囊化的，因此可以在組合物的貯存過(guò)程中保持存活，用作乳芽孢桿菌膠囊化包衣的物質(zhì)在與水分延長(zhǎng)接觸時(shí)間時(shí)釋放出乳芽孢桿菌。
14.權(quán)利要求13的藥物組合物，其中組合物的單位劑量是明膠膠囊。
15.權(quán)利要求14的藥物組合物，其中明膠膠囊含有至少約105個(gè)活嗜酸乳芽孢桿菌或其鼠李糖乳芽孢桿菌變種。
16.適于對(duì)人類患者的皮膚局部給藥的藥物組合物，該組合物在單位劑量中含有至少約103個(gè)活乳芽孢桿菌，所述乳芽孢桿菌是微膠囊化的，因此可以在組合物的貯存過(guò)程中保持存活，用作乳芽孢桿菌膠囊化包衣的物質(zhì)在與水分延長(zhǎng)接觸時(shí)間時(shí)釋放出乳芽孢桿菌。
17.權(quán)利要求16的藥物組合物，其中每1克和1毫升該組合物含有至少約106個(gè)活嗜酸乳芽孢桿菌或其鼠李糖乳芽孢桿菌變種。
18.適于給人類患者陰道內(nèi)給藥的藥物組合物，該組合物在單位劑量中含有至少約103個(gè)活乳芽孢桿菌，所述乳芽孢桿菌是微膠囊化的，因此可以在組合物的貯存過(guò)程中保持存活，用作乳芽孢桿菌膠囊化包衣的物質(zhì)在與水分延長(zhǎng)接觸時(shí)間時(shí)釋放出乳芽孢桿菌。
19.權(quán)利要求18的藥物組合物，為陰道栓劑。
20.權(quán)利要求19的藥物組合物，其中每粒栓劑含有至少約103個(gè)活嗜酸乳芽孢桿菌或其鼠李糖乳芽孢桿菌變種。
21.通過(guò)給哺乳動(dòng)物、包括人口服藥物組合物治療或預(yù)防所述哺乳動(dòng)物與抗菌素有關(guān)的腹瀉或其他急性或慢性腹瀉的方法，所述藥物組合物在單位劑量中含有至少約103個(gè)活乳芽孢桿菌，所述乳芽孢桿菌是微膠囊化的，因此可以在組合物的貯存過(guò)程中保持存活，用作乳芽孢桿菌膠囊化包衣的物質(zhì)在經(jīng)哺乳動(dòng)物攝入后主要在下部腸中釋放出乳芽孢桿菌。
22.權(quán)利要求21的方法，其中哺乳動(dòng)物是人，并且其中每天給人服用至少約4×103個(gè)活嗜酸乳芽孢桿菌或其鼠李糖乳芽孢桿菌變種。
23.權(quán)利要求21的方法，其中以明膠膠囊的形式給人口服活微膠囊化的乳芽孢桿菌。
24.權(quán)利要求23的方法，其中每粒膠囊含有至少約105個(gè)微膠囊化的活嗜酸乳芽孢桿菌或其鼠李糖乳芽孢桿菌變種，并且其中每天給人服用約4粒膠囊。
25.通過(guò)在哺乳動(dòng)物、包括人的經(jīng)常發(fā)生皮膚感染的皮膚上局部施用藥物組合物治療或預(yù)防所述哺乳動(dòng)物皮膚感染的方法，所述藥物組合物在單位劑量中含有至少約103個(gè)活乳芽孢桿菌，所述乳芽孢桿菌是微膠囊化的，因此可以在組合物的貯存過(guò)程中保持存活，用作乳芽孢桿菌膠囊化包衣的物質(zhì)在與水分延長(zhǎng)接觸時(shí)間時(shí)釋放出乳芽孢桿菌。
26.權(quán)利要求25的方法，其中哺乳動(dòng)物是人，并且其中單位劑量的所述組合物含有至少約105個(gè)活嗜酸乳芽孢桿菌或其鼠李糖乳芽孢桿菌變種。
27.權(quán)利要求27的方法，其中所述組合物包括粉劑。
28.通過(guò)給雌性哺乳動(dòng)物、包括女性人類患者陰道內(nèi)施用藥物組合物治療或預(yù)防所述哺乳動(dòng)物酵母感染的方法，所述藥物組合物在單位劑量中含有至少約103個(gè)活乳芽孢桿菌，所述乳芽孢桿菌是微膠囊化的，因此可以在組合物的貯存過(guò)程中保持存活，用作乳芽孢桿菌膠囊化包衣的物質(zhì)在與陰道內(nèi)水分延長(zhǎng)接觸時(shí)間時(shí)釋放出乳芽孢桿菌。
29.權(quán)利要求28的方法，其中藥物組合物是陰道栓劑，并且該栓劑含有至少約105個(gè)活嗜酸乳芽孢桿菌或其鼠李糖乳芽孢桿菌變種。
30.微膠囊化的乳芽孢桿菌，其中含有至少約103個(gè)活乳芽孢桿菌以及膠囊化包衣，用作乳芽孢桿菌膠囊化包衣的物質(zhì)在與水分延長(zhǎng)接觸時(shí)間時(shí)釋放出乳芽孢桿菌。
31.權(quán)利要求30的微膠囊化的乳芽孢桿菌，其中所述乳芽孢桿菌是嗜酸乳芽孢桿菌或其鼠李糖乳芽孢桿菌變種。
全文摘要
給哺乳動(dòng)物、包括人口服微膠囊化的乳芽孢桿菌以治療或預(yù)防與抗菌素有關(guān)的腹瀉或其他急性或慢性腹瀉。在皮膚上局部施用微膠囊化的乳芽孢桿菌以治療或預(yù)防經(jīng)常發(fā)生的皮膚感染,以及陰道內(nèi)施用微膠囊化的乳芽孢桿菌以治療或預(yù)防陰道酵母感染。
文檔編號(hào)A61K9/02GK1192151SQ96194393
公開(kāi)日1998年9月2日 申請(qǐng)日期1996年5月31日 優(yōu)先權(quán)日1995年6月2日
發(fā)明者拉里·C·福特 申請(qǐng)人:萊弗實(shí)驗(yàn)有限公司