專利名稱：治療具有輕微疾病性乙型肝炎攜帶者的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療由乙型肝炎病毒(“HBV”)感染引起的疾病。更確切地講，本發(fā)明涉及使用胸腺素α-1或其生物活性片段或其類似物治療輕微疾病性乙型肝炎攜帶者。
乙型肝炎病毒引起的感染導(dǎo)致多種疾病狀態(tài)，并且，HBV感染是世界范圍內(nèi)第二位最常見的感染性疾病。乙型肝炎病毒(“HBV”)是DNA病毒。已經(jīng)了解到HBV通過輸血、污染的皮下針頭、性接觸以及母嬰途徑(垂直傳播)傳播。許多人通過未知途徑感染。
有關(guān)乙型肝炎病毒、其傳播方式及與HVB感染有關(guān)的疾病狀態(tài)的描述可見于如F文獻(xiàn)J.H.Hoofnagle(1990),NewEnglandJour,Med,Vol,323,PP,337-39;J.H.Hoofnagle(1990a),Vaccine,Vol.8Suppl;H.Poopperetal.(1987),Hepatology,Vol,7.pp.764-72;ZakimandBoyer,eds.(1990),Hepatology,aTextbookofLiverDisease,W.B.SaudersCo,2ded;F.B.Hollingeretal,eds.(1991),ViralHepatitis,RavenPress,2ded。
大約5%感染了HBV的成人發(fā)展為長(zhǎng)程感染，亦即他們成為病毒“攜帶者”。在產(chǎn)期被感染的人群中，絕大部分(可能90%)成為攜帶者，這種產(chǎn)期的感染占世界范圍內(nèi)乙型肝炎感染的大多數(shù)。大約5%的世界人口是HBV攜帶者，且大部分?jǐn)y帶者是有傳染性的，這就是說，他們能夠通過性接觸、血液或血液制品或垂直途徑(出生時(shí))傳播給他人。
感染了乙型肝炎病毒的個(gè)體或表現(xiàn)為多種臨床上可區(qū)分的疾病狀態(tài)，包括慢性肝炎和輕微疾病性肝炎(minimaldiseasehep-atitis)。大約50%感染了HBV的人表現(xiàn)出肝臟的慢性炎癥性改變，其中有約50%的人發(fā)生能導(dǎo)致肝纖維化并最終導(dǎo)致肝硬化和進(jìn)行性肝衰竭的組織病理學(xué)改變(稱為慢性活動(dòng)性肝炎)。
肝臟未出現(xiàn)慢性炎性改變的HBV攜帶者可以發(fā)展成為慢性活動(dòng)性肝炎，約10-30%感染HBV的人發(fā)展成為肝癌患者。據(jù)估計(jì)，每年約有4百萬(wàn)乙型肝炎病毒攜帶者死于肝癌或肝硬化。
見于患慢性肝炎個(gè)體的持續(xù)性感染是由于缺陷的或生理上發(fā)育不全的免疫反應(yīng)，它導(dǎo)致清除病毒的能力受損。盡管引起肝臟損害的機(jī)理還不甚了解，但認(rèn)為在大多數(shù)個(gè)體中這種損害是機(jī)體的免疫系統(tǒng)攻擊被感染的肝細(xì)胞的結(jié)果，而不是HBV對(duì)肝臟的破壞。細(xì)胞毒性T細(xì)胞似乎在免疫介導(dǎo)的肝損害中起作用。在慢性乙型肝炎中，抑制抗正常組織的免疫系統(tǒng)活性與所設(shè)置的抗病毒免疫反應(yīng)之間的平衡也似乎被破壞。已描述了慢性肝炎存在的許多特異性免疫缺陷，包括由HBV感染的肝細(xì)胞生成α-干擾素的缺陷和抑制細(xì)胞毒性T細(xì)胞反應(yīng)的缺陷(參見綜述M.Petersetal,1991,5,Hepatolgy(UnitedStates),Vol.13no.5,p977-94)。
患有嚴(yán)重慢性活動(dòng)性肝炎的病人只是肝活檢標(biāo)本表現(xiàn)為慢性活動(dòng)性肝炎的總?cè)巳褐械囊恍〔糠帧?br> 大約40%乙型肝炎攜帶者表現(xiàn)為“輕微疾病”狀態(tài)，有時(shí)稱為“無(wú)癥狀”肝炎。輕微疾病攜者是其血清中具有可檢測(cè)的乙型肝炎抗原或病毒DNA的個(gè)體，并且臨床上還沒有出現(xiàn)肝損害的明顯癥狀，或者至多只有相當(dāng)輕微的肝損害的臨床癥狀。輕微疾病攜帶者可發(fā)展成為慢性活動(dòng)性肝炎，后者如上所述會(huì)導(dǎo)致具有肝衰竭的肝硬化。無(wú)癥狀肝炎的臨床進(jìn)程很緩慢，但目前仍不清楚影響起初為輕微疾病攜帶者的病人發(fā)展成活動(dòng)性疾病的一種或多種因素。
至今還不了解為什么有些受HBV感染的個(gè)體不出現(xiàn)炎癥或肝損害，而有些人卻有。這些似乎代表了兩種不同的疾病狀況，處于輕微疾病狀態(tài)時(shí)，攜帶者不表現(xiàn)明顯的免疫不平衡癥狀，正如由缺乏易于觀察的肝組織破壞所證實(shí)的那樣。
目前還沒有治療輕微疾病攜帶者的有效方法，但非常需要一種在這種攜帶者表現(xiàn)出更嚴(yán)重的疾病形式之前或在他們傳染他人之前對(duì)他們進(jìn)行治療的方法。此外，因?yàn)橥ㄟ^檢測(cè)血中的乙型肝炎抗原或HBVDNA能夠診斷攜帶者狀態(tài)，所以無(wú)需借助肝活檢輕微疾病攜帶者就有資格得到治療。盡管可以利用預(yù)防乙型肝炎的疫苗，但疫苗未在大規(guī)?；A(chǔ)上應(yīng)用，并且沒有在現(xiàn)存攜帶者中減輕疾病。因此，即使大規(guī)模地應(yīng)用現(xiàn)有的疫苗，對(duì)患有乙型肝炎病毒感染的個(gè)體進(jìn)行有效治療的需求將持續(xù)至少數(shù)十年，因?yàn)橛写罅康臄y帶者存在以及疾病有高度的傳染性。
胸腺素α-1是一種28個(gè)氨基酸的肽。該肽最初從小牛胸腺胸腺素餾分5中分離出來，它存在于胸腺素餾分5中參與胸腺依賴性淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞)的調(diào)節(jié)、分化和活動(dòng)(functicn)的數(shù)種多肽之一。有關(guān)胸腺素α-1的分離、特征和應(yīng)用在如US4，079，127中有描述。
盡管還不清楚胸腺素α-1是通過何種機(jī)理介導(dǎo)其作用的，但證據(jù)表明胸腺素α-1可以通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)發(fā)揮功能。已經(jīng)證明胸腺素α-1驅(qū)動(dòng)淋巴細(xì)胞中的成熟過程、擴(kuò)增T細(xì)胞功能和促進(jìn)免疫缺陷的重建(T.L.K.Lowetal.1984,Thymus,Vol.6,p409-15)M.G.Mutchnick等人(1991)也描述了胸腺素α-1在治療慢性活動(dòng)性肝炎(即活檢中發(fā)現(xiàn)有肝損害證據(jù)的病人)中的應(yīng)用。使用該肽治療的病人從血清中清除了乙型肝炎病毒DNA，并在治療停止后其血清HBVDNA持續(xù)檢測(cè)陰性。在該研究中不包括無(wú)肝損害組織病理學(xué)證據(jù)的無(wú)癥狀攜帶者。
我們發(fā)現(xiàn)胸腺素α-1及其生物活性片段或其類似物能用于治療輕微疾病性乙型肝炎感染。即給患輕微疾病性乙型肝炎的患者施用適量的胸腺素α-1能引起患者的輕微疾病性乙型肝炎感染的特征性指標(biāo)的降低。
本發(fā)明提供了治療輕微疾病性乙型肝炎感染的方法。更確切地說，本發(fā)明提供了胸腺素α-1(和其生物活性類似物及片段)的組合物在治療輕微疾病性乙型肝炎上的用途，即用于治療其血清HB5Ag和/或HBR DNA檢測(cè)陽(yáng)性但無(wú)癥狀且未表現(xiàn)出肝臟疾病的生化或組織病理學(xué)證據(jù)(或僅表現(xiàn)出輕度肝臟疾病的生化或組織病理學(xué)證據(jù))的病人。對(duì)這類乙型肝炎病毒輕微疾病攜帶者進(jìn)行治療能導(dǎo)致HBV從感染體內(nèi)清除(如由HBV DNA從血清中消失所證實(shí))，并因而使得感染體不再有發(fā)展成活動(dòng)性肝炎或肝癌或?qū)BV傳播給他人的危險(xiǎn)性。
因此，在本文的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的特征是給感染者施用包括至少一種選自胸腺素α-1、其生物活性片段和其生物活性類似物的肽和藥用可接受載體的治療有效量的組合物治療患者的輕微疾病性乙型肝炎感染。
在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所說的肽是胸腺素α-1，而組合物是經(jīng)皮下給藥。
鑒于本文公開的內(nèi)容，本發(fā)明的上述及其它實(shí)施方案對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言將是顯而易見的。
除非有其它說明，實(shí)施本發(fā)明將應(yīng)用本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)的蛋白質(zhì)化學(xué)、分子生物學(xué)、微生物學(xué)和重組DNA技術(shù)的常規(guī)技術(shù)。在有關(guān)文獻(xiàn)中對(duì)這類技術(shù)有詳盡全面地說明，例如參見Scopes,R.K,ProteinPurificationPrinciplesandPractice，2nded，(SpringerVerlag1987);MethodsinEnzymology(S.ColowickandN.Kaplaneds，AcademicPress，Inc);Sambrook，F(xiàn)ritsch&Maniatis，MolecularCloning;AlaboratoryManual，2nded，(ColdSpringHarborLaboratoryPress1989);QligonucleotideSynthesis(M.J.Gaited.1984);andHandbookofExperimentalImmunology，Vols，I-IV(D.M.weirandC.C.Blackwelleds，1986,BlackwellScientificPublications。
本文在上文或下文中提及的所有專利、專利申請(qǐng)和出版物均以其整體引入本文作為參考。
在描述本發(fā)明時(shí)，下面的術(shù)語(yǔ)將被使用并定義如下“輕微疾病性乙型肝炎”意指存在于乙型肝炎攜帶者中的一種疾病狀態(tài)，所說的攜帶者被確定為有乙型肝炎血清抗原或在血清中有HBVDNA，但具有正?；蜉p度升高的血清酶水平，并且沒有或者只有輕度的肝臟疾病的生化或組織病理學(xué)證據(jù)。輕微疾病狀態(tài)很容易被技術(shù)人員理解和鑒別。
本文所用的“胸腺素α-1”是指下文描述的有或無(wú)N-乙?；鶊F(tuán)的28聚體，并意味著包括該序列的生物活性片段和生物性類似物(即缺失、替代和加入實(shí)變體)，它們?cè)诒举|(zhì)上與如下所示的肽順序同源。
與胸腺素α-1“本質(zhì)上同源”的肽是其中至少有約30%、優(yōu)選至少約85-90%和最優(yōu)選約至少約95%的氨基酸與下述序列在一個(gè)確定的分子長(zhǎng)度范圍內(nèi)相配(match)的肽。
胸腺素α-1的“生物活性”片段或類似物是保持了天然分子活性的重要價(jià)值(significantamount)的胸腺素α-1的片段或類似物，即如下文進(jìn)一步描述的那樣，它們能夠減少血清HBVDNA和/或乙型肝炎表面抗原。
本文所用的“治療”或者指(ⅰ)預(yù)防感染或再感染(預(yù)防)，或者指(ⅱ)減少或消除輕微疾病性乙型肝炎的癥狀(治療)。
胸腺素α-1的“治療有效量”是指能夠改變肝炎感染可測(cè)指標(biāo)的肽量。因?yàn)榘ㄔ谳p微疾病這一類的病人具有正常的肝臟酶生化，將被正常監(jiān)測(cè)的指標(biāo)是血清乙型肝炎包膜抗原(HBeAg)和血清病毒DNA(HBV DNA)。疾病的好轉(zhuǎn)被確定為上述任一指標(biāo)的顯著降低。能夠引發(fā)疾病好轉(zhuǎn)的肽量被認(rèn)為是“治療有效量”。用點(diǎn)雜交測(cè)定能監(jiān)測(cè)HBV DNA(M.G.Mutchnick et al.1991,Hepatology,Vol. 14，p 409-15;H. M. Lieberman et al.1983,Hepatology,Vol.3，p 285-91)。另外，可以用標(biāo)準(zhǔn)PCR技術(shù)檢測(cè)HBV DNA在血清中的存在(參見如US4，683，202和US4，683，194，這兩篇專利的全文引入本文作為參考)。利用如標(biāo)準(zhǔn)的RIAs(如在M.G.Mutchnick,M.G.et al,1991,Hepatology,Vol.14,p 409-15中描述的)或用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA，能夠監(jiān)測(cè)血清HBeAg水平。
本發(fā)明涉及胸腺素α-1在治療輕微疾病性乙型肝炎感染上的用途。胸腺素α-1是存在于來自胸腺素餾分5中的數(shù)種肽之一。天然分子是一個(gè)28聚體，具有下列氨基酸序列Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Hle-Thr-Thr-Lys-Asp-Ieu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH。
利用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的肽合成標(biāo)準(zhǔn)方法很容易合成胸腺素α-1以及其片段和類似物。US4，148，788和US4，844，407分別描述了胸腺素α-1的溶液相和固相合成法，所說文獻(xiàn)全文引入本文作為參考。有關(guān)固相肽合成法及溶液肽合成法也可以參見J.D.Young,SolidPhasePeptideSyuthesis,2ded.(PierceChemicalCompany1984);andG.Baranyetal,ThePeptides:Analysis,Synthesis,Biology,Vol.2(E.GrossandJ.Meienhofer,eds,AcademicPress1980),andM.Bodansky,PrinciplesofPeptideSynthesis(SpringerVerlag1984);andE.Gross,E.andJ.Meienhofer,eds,ThePeptides:Analysis,Synthesis,Biology,Vol.1(AcademicPress1980)。
還可以利用本領(lǐng)域公知的技術(shù)從表達(dá)胸腺素α-1的合適組織中直接分離胸腺素α-1。一般完成這一分離過程首先是制備缺乏細(xì)胞成分的粗組織提取物和數(shù)種外來蛋白。然后利用如柱層析、HPLC、免疫吸附技術(shù)或本領(lǐng)域熟知的其它常規(guī)技術(shù)進(jìn)一步純化胸腺素α-1。US4，079，127公開了從小牛胸腺素α-1的方法，該文獻(xiàn)全文并入本文作為參考。
最后，可利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法以重組制備胸腺素α-1及其片段或類似物。參見如Sambrook,Fritsch&Maniatis,MolecularCloning;ALaboratoryManual,2ded.(ColdSpringHarborLaboratoryPress1989);M.J.Gait,ed.1984Oligo-nucleotideSynthesis。
可將胸腺素α-1或其活性片段或其類似物用于被診斷為或疑為有輕微疾病性乙型肝炎感染的個(gè)體。胸腺素α-1可以單獨(dú)或與藥用可接受載體或賦形劑混合施用。
一般情況下，可將胸腺素α-1組合物制備成為或者是液體溶液或者是懸浮液狀的可注射形式，也可制備成適于在注射前溶解于液相載體或懸浮于液相載體中的固態(tài)形式。還可以使制劑乳化或者用脂質(zhì)體載體使活性成分形成微囊。如上所述，活性成分通常與含有藥用可接受并與活性成分相容的賦形劑的載體相混合。適宜的載體例如有水、鹽、葡萄糖和甘油等及其組合。此外，如果需要的話，載體可含有小量的輔劑物質(zhì)如濕潤(rùn)劑或增乳劑或PH緩沖劑。本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員已知或者將容易了解到制備這類劑型的實(shí)際方法。參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company,Easton,Penn-sylvania,15thedition,1975)。將被施用的組合物或配方在任何情況下都含有數(shù)量足以從接受治療的個(gè)體血清中減少或消除HBV DNA和/或HB5Ag的肽。
可注射的組合物最好是通過皮下途徑給藥；也可采用肌肉注射或靜脈注射?？勺⑸渑浞綉?yīng)在載體中含有有效量的活性成分，而本領(lǐng)域的技術(shù)人員很容易確定所說的確切含量。活性成分的典型范圍可以是組合物重量的約1%-約95%(W/W)，或者如果合適的話甚至可以更高或更低。用量有賴于諸如接受治療者的年齡、體重和健康狀況的這些因素。就本發(fā)明的配方而言，有效量是約400-3000μg/m2體表面積或約600-1500Mg/m2體表面積或約900-1200μg/m2體表面積。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通過常規(guī)試驗(yàn)建立劑量反應(yīng)曲線很容易確定其它的有效劑量。
適合以其它方法給藥的其它配方包括栓劑和在某些情況下的氣溶膠、鼻內(nèi)和口服配方和持續(xù)釋放配方。對(duì)于栓劑，載體組合物包括傳統(tǒng)的粘合劑和載體，如聚二醇或甘油三酯?？梢杂珊屑s0.5-10%(W/W)、優(yōu)選約1-2%的活性成分的組合物制成所說的栓劑。口服載體包括通常應(yīng)用的賦形劑，如藥用級(jí)的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、纖維素糖精鈉、碳酸鎂等。這些口服組合物可采用溶液、懸液、片劑、丸劑、膠囊劑、持續(xù)釋放配方或粉劑的形式，并含有約10-95%、優(yōu)選約25-70%的活性成分。
鼻內(nèi)配方通常包括既不刺激鼻粘膜也不引起纖毛功能明顯紊亂的載體。能夠用于本主題發(fā)明的稀釋劑如水、鹽水或其它已知物質(zhì)。鼻用配方可以含有防腐劑，例如但不限于氯代丁醇和benzalkoniumchloride?？梢源嬖诒砻婊钚詣┮栽鰪?qiáng)鼻粘膜對(duì)本發(fā)明蛋白質(zhì)的吸附作用。
制得可控的或持續(xù)釋放的配方可以通過將本發(fā)明的肽滲入到載體中，如脂質(zhì)體、不可再吸收的不透水的聚合物如乙烯酸乙烯酯聚合物和Hytrel 聚合物、可溶脹聚合物如水凝膠或可再吸收聚合物如膠原和某些聚酸或聚酯(如那些可用于制備可再吸收縫線的)。所說的肽也可以用現(xiàn)有技術(shù)熟知的植入微泵(implanted minipupms)存在。
而且，所說肽可以以其天然形式或其鹽形式配制成組合物。藥物用接受鹽包括酸加成鹽(與活性肽的游離氨基形成)，并且，它們是與無(wú)機(jī)酸如鹽酸或磷酸、或有機(jī)酸如乙酸、草酸、灑石酸和扁桃酸等形成的。由游離羧基形成的鹽也可衍生于無(wú)機(jī)堿如氫氧化鈉、鉀、鈣或鐵，以及有機(jī)堿如異丙胺、三甲胺、2-乙胺醇、組胺和普魯卡因等。
受試者通過至少給予一劑胸腺素α-1肽或其片段或其類似物進(jìn)行治療。胸腺素α-1最好每周給藥1至數(shù)次，共持續(xù)數(shù)周至數(shù)月。更優(yōu)選的是，組合物每周用1-7次，最優(yōu)選的是每周2次，持續(xù)至少約3至約12個(gè)月，最優(yōu)選的是至少約6個(gè)月。在頭幾周可以更頻繁地給予組合物，后來可以間隔時(shí)間長(zhǎng)一些(例如頭兩周可每天給藥，然后是兩周一次)。如上所述，利用檢測(cè)HBVDNA和/或HBeAg的存在能夠監(jiān)測(cè)治療進(jìn)程。
以下是實(shí)施本發(fā)明的具體實(shí)施方案的例證。實(shí)施例僅用于說明目的，并非意在以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1本實(shí)施例提供了能夠用于臨床試驗(yàn)胸腺素α-1或其任何生物活性類似物或片段在治療輕微疾病性乙型肝炎中的功效的說明性方案。試驗(yàn)中的三個(gè)組每組有33名患者。
篩選用于試驗(yàn)的受試者的標(biāo)準(zhǔn)作為試驗(yàn)的候選人是在試驗(yàn)開始時(shí)年齡在18-64歲之間的男性和女性。利用為了最大限度保證安全和為了保證在受試者疾病狀態(tài)與治療體制之間建立良好關(guān)系所設(shè)計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)篩選入圍的受試者。
對(duì)于入選試驗(yàn)的候選人存在幾種限制條件。
所包括的受試者在試驗(yàn)開始前至少6個(gè)月已是乙型肝炎表面抗原(“HBsAg”)血清陽(yáng)性；他們的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(“ALT”)水平不超過正常上限水平的2倍(如下文進(jìn)一步描述所測(cè)定的)；他們是“HBeAg”血清陽(yáng)性，并在血清中存在HBVDNA(如下文進(jìn)一步描述所測(cè)定的)。
所包括的受試者血細(xì)胞比為(hematocrit)≥30%，血小板計(jì)數(shù)≥80×109/升，白細(xì)胞計(jì)數(shù)≥3×109/升，多形核白細(xì)胞計(jì)數(shù)≥1.5×109/升。腎功能處于至少如血清肌酸酐≤180μmol/L所表明的適當(dāng)良好狀態(tài)。凝血酶原時(shí)間在對(duì)照期間短于5秒，血清白蛋白≥30克/升，膽紅素≤68μmol/L；所包括的受試者沒有肝性腦病或食管靜脈曲張出血的病史。所包括的受試者肝活檢表明或者是“輕微病變”或者是“慢性持續(xù)性肝炎”。
如果候選人具有幾種指證中的任何一個(gè)，那么他們將被排除在試驗(yàn)之外。
如果在研究開始前由新近檢測(cè)的血清HBVDNA水平低于以前測(cè)定值的50%所表明的候選人的血清HBVDNA水平是進(jìn)行性下降，那么他或她也不包括在試驗(yàn)中。如果根據(jù)至少一個(gè)月后的進(jìn)一步檢測(cè)表明其血清HBVDNA水平已經(jīng)穩(wěn)定，那么這類候選人可以進(jìn)入試驗(yàn)。
如果在研究開始前一年內(nèi)候選人已采用干擾素或任何其它類似的免疫療法進(jìn)行治療，或者在研究開始的前6個(gè)月內(nèi)已用類腎上腺皮質(zhì)的類固醇治療，他或她也不包括在試驗(yàn)中。如果有下列情況，候選人也不能入選如果有證據(jù)表明患有毒性肝炎、酒精性肝病、Wilson病、原發(fā)肝汁性肝硬化、丙型肝炎或存在抗任一丙型肝炎病毒(“HCV”)的抗體、△肝炎(hepatitisdelta)、血色素沉著或自身免疫性肝炎；或者由HIV血清陽(yáng)性診斷并由Western印漬(blot)證實(shí)有HIV感染；或者是伴隨或先有除有效治療的皮膚癌或外科治療的子宮頸原位癌之外的惡性腫癌史；或者是具有除了HBV外不是非自限性疾病的任何活動(dòng)性感染過程，如結(jié)核“TB”或獲得性免疫缺陷綜合癥“AIDS”；或者是有類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或其它自身免疫性疾病或血清ANA＞1∶40。如果候選人在試驗(yàn)開始前5年有濫用靜脈內(nèi)藥物或同時(shí)使用了任何已知的肝毒性藥，那么他或她不包括在試驗(yàn)中。如果女性候選人由尿妊娠試驗(yàn)記載已經(jīng)受孕，那么她將排除在試驗(yàn)之外，而且，所包括的女性受試者必須同意在研究期間實(shí)行節(jié)育。如果候選人有不良的醫(yī)療或精神病的危險(xiǎn)；或者有按照研究者的觀點(diǎn)使得其不可能完成試驗(yàn)計(jì)劃的任何非惡性全身性疾病；或者有按照研究者的觀點(diǎn)遵守試驗(yàn)方案規(guī)定條件的指征，他或她也將排除在試驗(yàn)之外。
篩選期征集進(jìn)行試驗(yàn)的受試者最好是根據(jù)如下的安排篩選大量的候選人。
總的說來，確定為適于根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行治療的候選人是借助于用于輕微疾病性乙型肝炎的標(biāo)準(zhǔn)模式篩選的。具體地說，優(yōu)選的篩選方案包括相隔4周至2月的第一和第二次篩選調(diào)查，以及對(duì)于在前二次調(diào)查中不能明確滿足入選標(biāo)準(zhǔn)的情況又在第二次調(diào)查后4周至2月間進(jìn)行的第三次篩選調(diào)查。進(jìn)行治療的候選人需符合的標(biāo)準(zhǔn)已在上文列出。
有關(guān)用于受試者資格的血清ALT，最好是在第一次和第二次的篩選調(diào)查時(shí)每次的血清ALT水平不超過正常上限的2倍；或者也可以是三次篩選調(diào)查時(shí)的血清ALT平均值不高于正常上限2倍。
有關(guān)用于受試者資格的HBeAg和HBVDNA，在頭二次的篩選調(diào)查時(shí)每次測(cè)定都必須是陽(yáng)性；如果第二次調(diào)查HBVDNA水平低于第一次調(diào)查水平的50%，那么第三次的測(cè)定水平必須至少是第一次測(cè)定水平的50%，以使候選人有資格入選。
最好根據(jù)所謂的Knodell等級(jí)(knodelletal.,1981,Hepatologg,Vol.4,no.5,p343etseq.中描述)評(píng)估肝活檢。對(duì)于如上所確定為患輕微疾病性乙型肝炎的大部分試驗(yàn)受試者而言，總的Knodell得分(“HAI”或“組織學(xué)活性指數(shù)”)將＜4，更優(yōu)選的是≤3或≤2。如本文的表述所意味的那樣，HAI為4或更大的候選人不能被恰當(dāng)?shù)胤诸悶檩p微疾病性乙型肝炎。
治療為了進(jìn)行試驗(yàn)，每位受試者被分配到三個(gè)組中之一，第一組受試者接受6個(gè)月的胸腺素α-1治療，接著觀察6個(gè)月。第二組受試者接受12個(gè)月的胸腺素α-1治療，接著觀察6個(gè)月。第三組受試者不接受治療，并將被觀察12個(gè)月。
繼觀察期之后，檢測(cè)第三組受試者的HBVDNA狀況，并且將HBVDNA仍為陽(yáng)性的受試者隨機(jī)分配進(jìn)行6個(gè)月或12個(gè)月的治療。這就是說，在頭12個(gè)月的觀察期后，第三組的受試者被重新分配到三組之一中，3A組受試者(在12個(gè)月HBVDNA陰性)不接受治療。3B組受試者接受6個(gè)月的胸腺素α-1治療，繼而觀察6個(gè)月。3C組受試者接受12個(gè)月的胸腺素α-1治療，斷而觀察6個(gè)月。
在治療期間的每月和觀察期間的每三個(gè)月檢測(cè)受試者的肝功能和乙型肝炎標(biāo)志。最好是在治療末期每位受試者做一次肝活檢。
劑量方案為了進(jìn)行試驗(yàn)，對(duì)于所有的治療病人每周經(jīng)皮下注射胸腺素α-1兩次，每次注射1.6μg。能夠預(yù)料，每次注射1.45-1.75mg是安全有效的。
功效病毒反應(yīng)在優(yōu)選試驗(yàn)中，功效的主要量度是受試者的病毒反應(yīng)。可以應(yīng)用三個(gè)病毒反應(yīng)指標(biāo)，即1、利用標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定如AbbottHBVDNA試劑盒時(shí)HBV變得不可檢測(cè)(陰性)；2、HBeAg從血清中消失(如EIA所檢測(cè)的)；3、HBsAg從血清中消失。
受試者的反應(yīng)可以分類為1、完全血清HBVDNA轉(zhuǎn)陰并在研究的末期維持陰性，伴隨HBeAg的消失；在試驗(yàn)?zāi)┢诳梢源嬖诨虿淮嬖贖BsAg；2、部分血清HBeAg消失，血清HBVDNA減少50%或更多，但不是陰性;
3、未反應(yīng)者在試驗(yàn)?zāi)┢谘錒BVDNA的減少小于50%；4、復(fù)活血清HBVDNA和HBeAg消失后在試驗(yàn)?zāi)┢谟种匦鲁霈F(xiàn)；5、不確定的從試驗(yàn)開始到結(jié)束HBeAg持續(xù)存在，伴隨研究末期的血清HBVDNA減少至少50%。
臨床反應(yīng)因?yàn)檩p微疾病性HBV攜帶者通常無(wú)癥狀或只有對(duì)其攜帶狀態(tài)具特異性的輕度癥狀，所以臨床反應(yīng)不是對(duì)治療反應(yīng)的重要檢測(cè)。然而，受試者在臨床癥狀學(xué)中(不適、疲倦、厭食、每天的精力)表現(xiàn)出改善或未改善。
組織學(xué)反應(yīng)在檢測(cè)中，按照利用knodell等人的HAI指數(shù)的方法，如果肝活檢標(biāo)本的組織學(xué)分級(jí)存在至少25%的改善，并且在肝組織或最后的活檢中可復(fù)制的HBVDNA形式消失或乙型肝炎核心抗原消失，則受試者根據(jù)組織學(xué)反應(yīng)分為反應(yīng)者類；如果組織學(xué)得分無(wú)明顯改善或者更糟，則分類為未反應(yīng)者類。
實(shí)放例2本實(shí)施例說明另一種試驗(yàn)方式。
這是一個(gè)隨機(jī)的開放性試驗(yàn)，總樣本數(shù)為40位病人，治療開始時(shí)每人至少18歲。在治療前至少6個(gè)月，入選試驗(yàn)的候選人已有乙型肝炎表面抗原(“HBsAg”)血清陽(yáng)性，并在治療前至少3個(gè)月，血清中有HBVDNA(如由PCR或任何其它標(biāo)準(zhǔn)DNA檢測(cè)技術(shù)所檢測(cè))，僅僅是患有輕微疾病的病人包括在試驗(yàn)中；這些病人將具有正常的血清肝酶水平，并且如果進(jìn)行了肝活檢的話，結(jié)果表明最小的或無(wú)炎性改變，尤其是未表現(xiàn)出瘢痕形成或硬化的證據(jù)。
在一年內(nèi)接受過干擾素治療的受試者、由Western印漬證實(shí)伴有HIV血清陽(yáng)性的HIV感染者、具有丙型肝炎病毒(“HCV”)抗體血清陽(yáng)性的人或在前5年中有靜脈內(nèi)藥物濫用史的人不包括在試驗(yàn)中。孕婦也將排除在外。
在實(shí)施治療計(jì)劃前至少3個(gè)月，病人每月進(jìn)行治療前檢查。檢查包括1、包括具有可鑒別計(jì)數(shù)的FBC的血液分析、凝血酶原時(shí)間[“PT”]、葡萄糖、肌酸酐和電解質(zhì)、肝功能試驗(yàn)[“LFT”]、α-胎蛋白[“AFP”]、HIV抗體、HCV抗體、△肝炎抗體、HB標(biāo)志(HBeAg和HBVDNA)和胸腺素α-1水平。
2、肝活檢和肝HBVDNA分析。
3、常規(guī)尿樣分析。
4、育齡婦女的妊娠試驗(yàn)。
被篩選的病人隨機(jī)分成兩組。第一組病人接受胸腺素α-1治療，而第二組病人接受安慰劑。第一組病人以1600μg/注射的劑量經(jīng)皮下注射途徑給予胸腺素α-1，每周二次，共6個(gè)月。第二組病人在同樣的方案下接受安慰劑注射。所有的病人在開始治療的第二和第四周進(jìn)行觀察，以后在治療的6個(gè)月內(nèi)每月進(jìn)行觀察。在完成治療后，每月對(duì)病人監(jiān)測(cè)，持續(xù)6個(gè)月至2年。
通過血清HBVDNA或血清HBeAg的消失確定對(duì)治療的反應(yīng)。反應(yīng)者是指在進(jìn)行研究的12月中達(dá)到并維持降低的血清HBVDNA或HBeAg水平的病人。末反應(yīng)者是指在進(jìn)行研究的12個(gè)月中或者未反映出血清HBVDNA改變或者未反映出血清HBeAg改變的病人。復(fù)發(fā)狀態(tài)是指病人在開始時(shí)其血清中HBVDNA消失但在研究過程中又重新出現(xiàn)。
用Student的雙側(cè)t檢驗(yàn)比較組均值。用Stydent的雙側(cè)配對(duì)t檢驗(yàn)或Wilcoxon配對(duì)樣本檢驗(yàn)比較包含值與后續(xù)的時(shí)間點(diǎn)之間在檢測(cè)中的變化。
監(jiān)測(cè)病人由治療引起的任何明顯付作用或過敏表現(xiàn)。
實(shí)施例3為了治療輕微疾病性乙型肝炎，將要檢測(cè)待治療人群的血清中HBsAg和/或HBVDNA的存在。在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候可以對(duì)表明HBV感染的血清陽(yáng)性病人作進(jìn)一步的檢查，以確定所進(jìn)行的治療不會(huì)造成不可接受的醫(yī)原性損害的高度危險(xiǎn)性和病人實(shí)際上為輕微疾病性乙型肝炎攜帶者。肝活檢可以成為或不必為進(jìn)一步檢查的一部分。而進(jìn)一步的血液化學(xué)(如對(duì)于ALT或其它酶類的分析)也可以或不必構(gòu)成進(jìn)一步檢查的一部分。
按照本發(fā)明利用適合于具體病人和所用特定胸腺素α-1或類似物或片段的劑量及劑量體制對(duì)被診斷為輕微疾病性乙型肝炎攜帶者進(jìn)行治療。
其它實(shí)施方案本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案已得以詳盡地描述?？梢岳斫庠诓幻撾x由所附權(quán)利要求所確定的本發(fā)明的精神和范圍的情況下能作出明顯的改變。
其它的實(shí)施方案在所附權(quán)利要求之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.在患者中治療輕微疾病性乙型肝炎感染的方法，包括給患者施用在藥用可接受載體中的至少一種選自胸腺素α-1、其生物活性片段和其生物活性類似物的治療有效量的肽。
2.如權(quán)利要求1的方法，其中所說的肽是胸腺素α-1。
3.如權(quán)利要求1的方法，其中所說的肽是胸腺素α-1的生物活性片段。
4.如權(quán)利要求1的方法，其中所說的肽是胸腺素α-1的生物活性類似物。
5.如權(quán)利要求1的方法，所說的施用是通過皮下途徑。
6.如權(quán)利要求1的方法，其中所施用肽量從約600至約3000μg/m2體表面積。
7.如權(quán)利要求1的方法，其中所施用肽量從約600至約1500μg/m2體表面積。
8.如權(quán)利要求1的方法，其中所施用肽量從約900至約1200μg/m2體表面積。
9.如權(quán)利要求6-8中任何一個(gè)權(quán)利要求的方法，其中所說的肽被每周施用2次。
全文摘要
本發(fā)明涉及施用胸腺素α—1、或其生物活性片段或類似物治療輕微疾病性乙型肝炎感染的方法。
文檔編號(hào)A61P1/16GK1102124SQ9312072
公開日1995年5月3日 申請(qǐng)日期1993年10月29日 優(yōu)先權(quán)日1992年2月6日
發(fā)明者布魯斯·沙爾施密特, 約翰·D·巴克斯特, 戴維·L·霍維茨 申請(qǐng)人:塞克隆藥品公司