專利名稱：一種鎖陽(yáng)提取物在制備治療女性更年期綜合癥藥物的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥，特別是一種鎖陽(yáng)提取物在制備治療女性更年期綜合癥藥物的新用途。
背景技術(shù)：
1 ! (Cynomorium songaricum Rupr.)是鎖 1 禾斗(Cynomoriaceae)鎖 1 屬白勺單禾斗單屬單種植物，多寄生于蒺藜科(Zygophyllaceae)白刺屬(Nitraria L.)植物根部，是全寄生種子植物。中醫(yī)把植物鎖陽(yáng)的去花序干燥莖用做中藥鎖陽(yáng)，又名“不老藥”、“金不換” 和“沙漠人參”等。性溫，味甘，歸脾、腎、大腸經(jīng)。具有補(bǔ)腎陽(yáng)、益精血、潤(rùn)腸通便、養(yǎng)筋之功效，常用于治療腎陽(yáng)不足、精血虧虛、不孕、腰膝痿弱、腸燥便秘、神經(jīng)衰弱等癥狀?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)鎖陽(yáng)具有增強(qiáng)人體性功能、增強(qiáng)動(dòng)物免疫功能、清除自由基、抗氧化及抗衰老、耐缺氧、抗應(yīng)激、抗疲勞、對(duì)糖皮質(zhì)激素具有雙向調(diào)節(jié)作用、抗血小板聚集、潤(rùn)腸通便、抗腫瘤、 抗胃潰瘍作用及抑制艾滋病病毒的增殖等多種藥理作用。鎖陽(yáng)的主要成分是鎖陽(yáng)總黃酮、 鎖陽(yáng)多糖等，鎖陽(yáng)總黃酮的藥理作用有清除自由基、抗氧化及抗衰老、耐缺氧、抗應(yīng)激、抗疲勞和增強(qiáng)動(dòng)物免疫功能等。鎖陽(yáng)性溫味甘，補(bǔ)腎但其性溫而不燥，其效補(bǔ)而不峻，且鎖陽(yáng)為滋陰補(bǔ)腎，助陽(yáng)而不傷陰，能平衡陰陽(yáng)，無(wú)論是陽(yáng)虛還是陰虛皆可用之。臨床有報(bào)道將鎖陽(yáng)入復(fù)方治療女性更年期綜合征，療效確切，如澀精止遺類中成藥“鎖陽(yáng)固精丸”，以鎖陽(yáng)為主藥，臨床驗(yàn)證其可用于治療更年期綜合征。更年期綜合征臨床表現(xiàn)常有月經(jīng)紊亂、烘熱汗出、記憶力減退、眩暈耳鳴、心悸失眠、腰背酸困、皮膚蟻行感、情緒不寧等，多屬于中醫(yī)所講得“熱證”。更年期綜合征(Climacteric Syndrome，CS)，是婦女常見(jiàn)病和多發(fā)病之一。主要是由于卵巢功能逐漸衰退，引起機(jī)體內(nèi)分泌失調(diào)、免疫力低下和植物神經(jīng)紊亂的癥候群，導(dǎo)致全身多個(gè)系統(tǒng)出現(xiàn)功能以及病理病變。卵巢功能衰退是CS的核心病機(jī)和病理基礎(chǔ)。目前中老年女性中更年期綜合癥患病率約為70%，其中約有40%需要治療，已成為嚴(yán)重影響中老年女性生活質(zhì)量的主要疾患之一?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為婦女更年期綜合征是由于年齡增長(zhǎng)、操勞、產(chǎn)育、體弱多病、卵巢切除或放射治療等因素，因雌激素水平過(guò)度降低引起下丘腦-垂體-卵巢軸或腎上腺功能紊亂所致的神經(jīng)遞質(zhì)、激素、細(xì)胞因子等失衡是更年期發(fā)病的主要原因。故神經(jīng)內(nèi)分泌免疫與更年期綜合征的關(guān)系最為密切。更年期綜合征患者，卵巢功能衰退，卵巢中的卵泡群明顯減少，雌激素水平明顯降低。內(nèi)分泌平衡狀況發(fā)生變化，可導(dǎo)致下丘腦及植物神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)，特別是因植物神經(jīng)系統(tǒng)功能變化而產(chǎn)生不同程度的臨床癥狀，一般認(rèn)為癥狀的出現(xiàn)與雌激素分泌減少的速度和程度相一致。西醫(yī)常采用激素替代療法(Hormon Replacement Therapy，HRT)，臨床上常用尼爾雌醇、谷維素雙維B片、谷維素注射液、復(fù)方炔雌醇甲羥孕酮膠囊、復(fù)方鹽酸普魯卡因膠囊、 戊酸雌二醇、氯烯雌醚滴丸等，HRT雖有很好的療效，但臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)期使用雌激素可增加子宮內(nèi)膜癌和乳腺癌的發(fā)病率。2002年7月，美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院心臟、肺和血液研究所宣布，婦女健康初始行動(dòng)(WHI)在健康絕經(jīng)后婦女中使用雌激素加孕激素的臨床試驗(yàn)，由于乳腺癌發(fā)病相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)增加沈％，且并無(wú)總體益處予以提前終止。除了生殖系統(tǒng)增殖性病變外，近期所發(fā)現(xiàn)HRT可增加心腦血管危險(xiǎn)性等嚴(yán)重副作用的發(fā)生，更是明顯限制了此法的臨床應(yīng)用。中醫(yī)學(xué)對(duì)本病的認(rèn)識(shí)已有數(shù)千年的歷史?！端貑?wèn)·上古天真論》曰“女子七七，任脈虛，太沖脈衰少，天癸竭，地道不通，故形壞而無(wú)子也?！迸赃M(jìn)入更年期會(huì)發(fā)生一系列的生理、病理變化。腎氣虧虛，天癸將竭，任沖脈衰，月經(jīng)出現(xiàn)紊亂，以至絕經(jīng)。同時(shí)，也出現(xiàn)一系列因腎精虧虛而導(dǎo)致的腎水不足，虛火內(nèi)生的證候。如潮熱、汗出、五心煩熱、失眠多夢(mèng)、 腰膝酸軟等。從中醫(yī)的觀點(diǎn)來(lái)看，“腎氣衰”是其主要內(nèi)因，因此補(bǔ)腎就是治療本病最基本的法則，至今用鎖陽(yáng)提取物治療更年期綜合癥未見(jiàn)有公開(kāi)報(bào)導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種鎖陽(yáng)提取物在制備治療女性更年期綜合癥藥物的新用途，可有效解決制備治療更年期綜合癥的藥物， 以用于更年期綜合癥的用藥治療的問(wèn)題。本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，取鎖陽(yáng)藥材，粉碎成粉，用乙醇浸泡，回流提取二次，合并提取液，濾去藥渣，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，用水分散(稀釋)提取液，得藥液，調(diào)節(jié)藥液的PH為4. 5，過(guò)大孔樹(shù)脂柱，上樣量與樹(shù)脂體積的比例為1 10(樹(shù)脂柱徑高比為1 12)， 先用水洗脫，繼用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至干，即得鎖陽(yáng)提取物， 提取物中總黃酮質(zhì)量含量按蘆丁(C27H3tlO16)計(jì)為彡71%。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單，易制備，所得鎖陽(yáng)提取物總黃酮，有效用于治療更年期綜合癥作用的藥物，是鎖陽(yáng)提取物的新用途，開(kāi)拓了鎖陽(yáng)的藥用價(jià)值，是中藥上的創(chuàng)新。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體情況對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式作詳細(xì)說(shuō)明。本發(fā)明在具體實(shí)施時(shí)，取鎖陽(yáng)藥材，粉碎成粉，加入藥材重量10倍的質(zhì)量濃度為 70%的乙醇(又稱為70%乙醇，以下同)，浸泡半小時(shí)，回流提取兩次，第一次1.5h，第二次lh，合并兩次提取液，濾去藥渣，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，用水分散(稀釋)提取液的濃度為0. 3g/mL ；調(diào)節(jié)藥液的pH為4. 5，過(guò)D-101型大孔樹(shù)脂柱，上樣量與樹(shù)脂體積的比例為 1 10(樹(shù)脂柱徑高比為1 12)，先用10倍柱體積水洗脫，繼用6倍柱體積10%乙醇洗脫，然后用30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至干，即得鎖陽(yáng)提取物，提取物中總黃酮質(zhì)量含量按蘆丁(C27H3tlO16)計(jì)為彡71%。本發(fā)明提取物總黃酮具有治療更年期綜合癥作用，可有效用于制備治療更年期綜合癥作用的藥物，并經(jīng)試驗(yàn)得到了充分的證明，有關(guān)試驗(yàn)資料如下鎖陽(yáng)總黃酮對(duì)小鼠更年期模型的影響1實(shí)驗(yàn)材料1. 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)小鼠，昆明種，雌性，27 30g，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào) 1004053。
1.2實(shí)驗(yàn)藥物本發(fā)明鎖陽(yáng)提取物總黃酮(簡(jiǎn)稱為鎖陽(yáng)總黃酮)。更年安膠囊，長(zhǎng)春英平藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，成份地黃、熟地黃、澤瀉、麥冬、玄參、 牡丹皮、茯苓、珍珠母、仙茅、五味子、磁石、首烏藤、鉤藤、浮小麥、制何首烏，功能主治滋陰潛陽(yáng)，除煩安神，用于更年期潮熱汗出，眩暈耳鳴，煩躁失眠，規(guī)格每粒裝0. 3g，用法用量 口服，一次3粒，一日3次，批號(hào)2010020104。大豆異黃酮軟膠囊，康樂(lè)福(美國(guó))健康事業(yè)投資公司生產(chǎn)，成份每粒含大豆異黃酮50mg、濃縮大豆蛋白粉25mg、維生素D3、乳酸鈣、大豆磷脂、大豆油、乳化劑、明膠、甘油、著色劑，規(guī)格每粒500mg，用法用量口服，一次1粒， 一日2次，批號(hào)00683209。1.3實(shí)驗(yàn)試劑水合氯醛，天津市科密歐化學(xué)制劑開(kāi)發(fā)中心生產(chǎn)，批號(hào)20071018 ；甲醛，天津市科密歐化學(xué)制劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20080110 ；氯化鈉注射液，鄭州永和制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)100923033 ；注射用頭孢唑林鈉，珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司中山分公司生產(chǎn)， 批號(hào)90801302 ；血清雌二醇放射免疫分析藥盒，北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20100423 ；血清促黃體生成激素放射免疫分析藥盒，北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20100423 ；血清促卵泡生成激素放射免疫分析藥盒，北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20100423。1.4實(shí)驗(yàn)與儀器電子分析天平，奧豪斯(上海)公司生產(chǎn)，型號(hào)AR1140/C;高速臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)，型號(hào)TGL-168 ；小鼠自主活動(dòng)測(cè)試儀，成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)， 型號(hào)以-6 ；小鼠避暗儀，成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)，型號(hào)BA-200 ；電熱恒溫水浴鍋，上海一恒科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)，型號(hào)HWS12 ；可調(diào)式移液器，Thermo Scientific ；智能放免γ 測(cè)量?jī)x，上海原子核研究所四環(huán)儀器一廠生產(chǎn)，型號(hào)Sn-895B。2實(shí)驗(yàn)方法2. 1造模與給藥造模方法取昆明種小鼠84只，雌性，25 ^g，隨機(jī)選出10只為空白組，其他小鼠進(jìn)行造模腹腔注射10%水合氯醛(0. 033mL/10g)麻醉后腹位固定，然后從小鼠背部最末肋骨下，在腋中線和距脊柱外側(cè)約Icm交叉處剪毛，消毒后切開(kāi)皮膚和背肌約0. 5 lcm， 切口視野中可見(jiàn)一乳白色發(fā)亮的脂肪團(tuán)，卵巢即包埋其中。用小鑷子輕輕夾住脂肪團(tuán)拉出切口外，分離脂肪團(tuán)，即可見(jiàn)到一團(tuán)細(xì)線狀不規(guī)則呈黃紅色的卵巢。剪取時(shí)先將卵巢下輸卵管(包括脂肪)用細(xì)線結(jié)扎，再摘除卵巢，術(shù)后順勢(shì)將子宮角放回腹腔中，縫合肌肉及皮膚，同法摘除雙側(cè)卵巢。術(shù)后精心飼養(yǎng)，肌肉注射注射用頭孢唑林鈉(20萬(wàn)單位/mL，每只 0. ImL)以防感染，連續(xù)3d，每天1次。手術(shù)5d后開(kāi)始逐只進(jìn)行小鼠陰道涂片檢查，每天1 次，連續(xù)5d，以確定卵巢是否完全切除。涂片呈現(xiàn)動(dòng)情反應(yīng)的小鼠棄去不用，選擇60只去勢(shì)完全的小鼠隨機(jī)均勻分為6組供實(shí)驗(yàn)用，分別為模型組，更年安膠囊組，大豆異黃酮軟膠囊組，高、中、低劑量鎖陽(yáng)總黃酮組。給藥方法將以下各藥物混懸于蒸餾水中。于手術(shù)后第5天給予相應(yīng)藥物。取高、中、低劑量鎖陽(yáng)總黃酮:20mg · HiL-1UOmg · mlA—g · mL—1，按 400mg · kg—1、 200mg ^kg-1UOOmg .kg—1灌胃(相當(dāng)于生藥臨床用量的30倍，15倍，7. 5倍)；更年安膠囊33.751^*111171，按6751^*1^-1灌胃(相當(dāng)于臨床用量的15倍)；大豆異黃酮軟膠囊 12. 5mg · πι Λ按250mg · kg—1灌胃(相當(dāng)于臨床用量的15倍)；模型組和空白組給予同體積的蒸餾水，給藥體積為0. 2mL/10g，每天1次，連續(xù)21d。2. 2觀察項(xiàng)目及檢測(cè)方法各組小鼠于給藥19天時(shí)測(cè)定5min內(nèi)自主活動(dòng)次數(shù)，于給藥20_21天時(shí)測(cè)定小鼠首次進(jìn)入暗室的潛伏期及5min內(nèi)進(jìn)入暗室遭電擊的次數(shù)。于末次灌胃后2h(禁食15小時(shí))，摘眼球取血，分離血清，采用放射免疫法測(cè)定血清中E2、LH、FSH的含量；解剖小鼠，摘除胸腺、脾臟、子宮組織，稱量其濕重并計(jì)算臟器指數(shù)(臟器指數(shù)=臟器濕重mg/小鼠體重 g)，然后取腦；將胸腺、脾臟、子宮、腦組織固定于10%甲醛溶液中，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察各組的組織形態(tài)學(xué)變化。2. 2. 1自主活動(dòng)次數(shù)測(cè)試將各組小鼠放入自主活動(dòng)儀中，先適應(yīng)環(huán)境lmin，然后測(cè)定5min內(nèi)自主活動(dòng)次數(shù)。2. 2. 2避暗法測(cè)試將各組小鼠尾部對(duì)著進(jìn)入暗室的小口放入測(cè)定盒中，進(jìn)行訓(xùn)練，24h后重新測(cè)定小鼠首次進(jìn)入暗室的潛伏期及5min內(nèi)進(jìn)入暗室遭電擊的次數(shù)。2. 2. 3雌二醇的測(cè)定方法測(cè)定原理本實(shí)驗(yàn)采用放射免疫分析方法。先將校準(zhǔn)品或樣品、標(biāo)記物和抗體按程序規(guī)定依次加入試管中，使標(biāo)記和非標(biāo)記抗原與有限量抗體互相競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，待反應(yīng)平衡后， 加入分離劑，離心沉淀，使游離抗原與抗原抗體復(fù)合物分離，測(cè)量沉淀物的放射性強(qiáng)度。隨 E2含量增加，其放射性強(qiáng)度則相應(yīng)降低。藥盒組成1. 125I-E2，溶液，1瓶，直接使用；2. E2抗體，溶液，1瓶，直接使用；3. E2 校準(zhǔn)品，溶液，7 瓶，濃度為 0、5、20、80、320、1280、4000pg/mL ；4.免疫分離劑(第二抗體)，1瓶；5.質(zhì)控血清，溶液，2瓶，含低、高兩個(gè)劑量。操作步驟將圓底聚苯乙烯試管編號(hào)(按復(fù)管操作)，按下表程序操作E2RIA操作步驟體積單位μ L
權(quán)利要求
1. 一種鎖陽(yáng)提取物在制備治療更年期綜合癥藥物中的應(yīng)用，所述的鎖陽(yáng)提取物是，取鎖陽(yáng)藥材，粉碎成粉，加入藥材重量10倍的70%乙醇，浸泡半小時(shí)，回流提取兩次，第一次 1.證，第二次lh，合并兩次提取液，濾去藥渣，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，用水分散提取液的濃度為0. 3g/mL,調(diào)節(jié)藥液的pH為4. 5，過(guò)D-101型大孔樹(shù)脂柱，上樣量與樹(shù)脂體積的比例為 1 10，先用10倍柱體積水洗脫，繼用6倍柱體積10%乙醇洗脫，然后用30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至干，即得鎖陽(yáng)提取物，提取物中總黃酮質(zhì)量含量按蘆丁計(jì)為>71%。
全文摘要
本發(fā)明涉及鎖陽(yáng)提取物在制備治療女性更年期綜合癥藥物的新用途，可有效解決制備治療更年期綜合癥的藥物，以用于更年期綜合癥的用藥治療的問(wèn)題，其解決的技術(shù)方案是，取鎖陽(yáng)藥材，粉碎成粉，用乙醇浸泡，回流提取二次，合并提取液，濾去藥渣，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，用水分散提取液，得藥液，調(diào)節(jié)藥液的pH為4.5，過(guò)大孔樹(shù)脂柱，上樣量與樹(shù)脂體積的比例為1∶10，先用水洗脫，繼用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至干，即得鎖陽(yáng)提取物，提取物中總黃酮質(zhì)量含量按蘆丁計(jì)為≥71％，本發(fā)明方法簡(jiǎn)單，易制備，所得鎖陽(yáng)提取物總黃酮，有效用于治療更年期綜合癥作用的藥物，是鎖陽(yáng)提取物的新用途，開(kāi)拓了鎖陽(yáng)的藥用價(jià)值，是中藥上的創(chuàng)新。
文檔編號(hào)A61K36/185GK102258549SQ20111025314
公開(kāi)日2011年11月30日 申請(qǐng)日期2011年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月30日
發(fā)明者張穎, 王燦, 苗明三 申請(qǐng)人:河南中醫(yī)學(xué)院