專(zhuān)利名稱(chēng)：FcγRIIB(CD32B)和CD20特異性抗體的組合應(yīng)用的制作方法
FcyRI IB(CD32B)和CD20特異性抗體的組合應(yīng)用
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及防止抗體Fe結(jié)構(gòu)域和細(xì)胞表面Fe Y RIIb之間結(jié)合的試劑(agent)。本發(fā)明還涉及包含所述試劑的組合物，所述組合物用于治療具有諸如使用基于抗體的組合物治療的癌細(xì)胞的靶細(xì)胞的患者。另外，本發(fā)明還涉及預(yù)測(cè)靶細(xì)胞對(duì)于基于抗體的治療的響應(yīng)的方法，特別是在抗體配體對(duì)Fe y RIIb介導(dǎo)的內(nèi)化敏感的情況下預(yù)測(cè)靶細(xì)胞對(duì)于基于抗體的治療的響應(yīng)的方法，特別涉及Fe y RIIb表達(dá)水平和/或治療性抗體通過(guò)Fe y RIIb介導(dǎo)的內(nèi)化作為靶細(xì)胞對(duì)于所述治療的響應(yīng)的預(yù)后標(biāo)志物的用途。單克隆抗體(mAb)可產(chǎn)生治療效果的機(jī)制是通過(guò)招募諸如細(xì)胞毒性細(xì)胞(例如巨噬細(xì)胞)和酶(例如補(bǔ)體)的天然效應(yīng)系統(tǒng)，然后所述效應(yīng)系統(tǒng)靶向HiAb結(jié)合的細(xì)胞，而刺激除去癌細(xì)胞和其他不 想要的細(xì)胞。例如，I型抗⑶20mAb (例如當(dāng)前的市場(chǎng)主導(dǎo)藥利妥昔單抗)通過(guò)經(jīng)mAb的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合B細(xì)胞表面上的CD20分子并清除這些靶B細(xì)胞而發(fā)揮作用。它們通過(guò)招募和激活通過(guò)在效應(yīng)細(xì)胞的表面表達(dá)的Fe y受體(Fe Y R)而與mAb的Fe結(jié)構(gòu)域相互作用的這些效應(yīng)細(xì)胞來(lái)實(shí)現(xiàn)這點(diǎn)?？耿?0單克隆抗體(mAb)利妥昔單抗改善了患有濾泡(FL)性淋巴瘤和彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)的患者的總體存活率(OS) (1-4)。在外套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)中，僅觀察到輕度響應(yīng)(5)，而在慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)中，起始單劑利妥昔單抗試驗(yàn)所產(chǎn)生的響應(yīng)沒(méi)有在其他非何杰金淋巴瘤(NHL)中所產(chǎn)生的響應(yīng)顯著((6)中綜述)。一部分淋巴瘤顯示對(duì)利妥昔單抗具有原發(fā)抗性，或者最終對(duì)含有利妥昔單抗的聯(lián)合治療產(chǎn)生抗性(7)。該治療抗性及所觀察到的不同NHL亞型對(duì)利妥昔單抗治療的敏感性背后的分子基礎(chǔ)當(dāng)前尚未知，但可能包括⑶20表達(dá)水平(8-10)、補(bǔ)體防御分子(⑶55和⑶59)的高表達(dá)(11、12)、凋亡抗性的形成(13)以及由于低親和力等位基因表達(dá)導(dǎo)致的次佳的Fe Y受體(FcyR)相互作用(14)。非常期望在治療不佳或抗性明顯的情況下提高這些抗體的有效性。通常認(rèn)為Fe:Fe Y R相互作用對(duì)于抗⑶_20mAb的功效至關(guān)重要(15_18)。與此相一致，在Fe Y RIIIa中攜帶較高親和力的158V等位基因的淋巴瘤患者要比具有低親和力的158F異型的淋巴瘤患者更好地響應(yīng)利妥昔單抗(14)，導(dǎo)致許多研究者都集中于提高mAb與Fe y RIIIa的相互作用，例如通過(guò)去巖藻糖基化(19)。相比之下，對(duì)于抑制性Fe y RIIb則給予較少關(guān)注，F(xiàn)e y RIIb用作諸如B細(xì)胞抗原受體(BCR)和激活性Fe Y R的攜帶ITAM的受體接收的刺激性活動(dòng)的負(fù)調(diào)節(jié)劑。在B細(xì)胞中，該相互作用用于限制免疫復(fù)合物結(jié)合之后的B細(xì)胞增殖，而在巨噬細(xì)胞中，F(xiàn)cyRIIb的參與引起細(xì)胞毒性活性的抑制(15)。在B細(xì)胞惡性腫瘤中，F(xiàn)e Y RIIb表達(dá)于CLL/SLL、MCL以及FL上，后者尤其在轉(zhuǎn)化過(guò)程中有表達(dá)。在DLBCL中，F(xiàn)yRIIb表達(dá)較弱，由此解釋了在其表達(dá)和對(duì)于利妥昔單抗-CHOP (R-CHOP)化療之間未顯示相關(guān)性的原因(20，21)。關(guān)于激活性Fe Y R，還發(fā)現(xiàn)影響Fe y RIIb活性的多形性，2321等位基因比232T等位基因更有效地抑制BCR介導(dǎo)的鈣流(22，23)。然而，Weng和Levy未能在FL患者中確定這些多形性和對(duì)利妥昔單抗治療的響應(yīng)之間的相關(guān)性?？捎糜谂R床研究的抗⑶_20mAb數(shù)量越來(lái)越多。根據(jù)這些不同抗⑶20mAb在質(zhì)膜中再分布CD20的能力及其在不同效應(yīng)細(xì)胞測(cè)定中的活性將其分類(lèi)為I型(例如，利妥昔單抗(rituximab)，奧法木單抗(ofatumumab))或 II 型(例如，托西莫單抗(tositumomab) (BI),GAlOl，11B8) (25-27)。發(fā)明人及其他人已經(jīng)證明II型mAb在許多模型系統(tǒng)中均更高效地清除B細(xì)胞靶(18，19)。例如，在其中II型mAb引發(fā)溶酶體細(xì)胞死亡的較高能力不明顯的人正常B細(xì)胞消耗的CD20轉(zhuǎn)基因(Tg)模型(25，27)中，發(fā)明人證明了該效能與其對(duì)內(nèi)化的抗性相關(guān)(28)。這與諸如利妥昔單抗的I型mAb形成對(duì)比，I型mAb在具有能量和溫度依賴性并涉及肌動(dòng)蛋白再分布的過(guò)程中與CD20—起從細(xì)胞表面快速內(nèi)化(28)。在來(lái)自不同來(lái)源的細(xì)胞上的調(diào)變(modulation)速率顯著不同(原發(fā)腫瘤對(duì)細(xì)胞系，CLL對(duì)FL)，但這點(diǎn)的分子基礎(chǔ)仍未得到解釋。WO 2008/002933描述了 Fe Y RIIb (CD32B)和CD20特異性抗體及使用這兩種抗體的組合來(lái)治療B細(xì)胞相關(guān)疾病或病癥的方法。然而，沒(méi)有識(shí)別和/或治療患者亞組的教導(dǎo)或暗示，所述患者亞組即靶細(xì)胞Fe y RIIb表達(dá)水平升高的那些患者，或其抗體類(lèi)型適于和Fe y RIIb抗體聯(lián)合治療的患者。出人意料地，發(fā)明人證明不管細(xì)胞亞型如何調(diào)變都與Fe y RIIb表面表達(dá)顯著相關(guān)，過(guò)表達(dá)能夠?qū)amos細(xì)胞由慢調(diào)變細(xì)胞轉(zhuǎn)化為快調(diào)變細(xì)胞。FcyRIIb的內(nèi)化與⑶20 —起發(fā)生，并在其激活之前發(fā)生。所有這些數(shù)據(jù)為先前在不同NHL亞型內(nèi)和不同NHL亞型之間觀察到的調(diào)變速率的異質(zhì)性提供了明確的分子理論。因此，發(fā)明人證明，決定抗體對(duì)諸如CD20的抗原的有效性的關(guān)鍵因素是與同一細(xì)胞表面的抑制性 Fe y RIIb (還已知為且包括 CD32、CD32B、CD32B1、CD32B2、FcRI1、Fe y RII或FcRIIB)的相互作用，這令人驚訝。該相互作用導(dǎo)致靶細(xì)胞對(duì)抗體的內(nèi)化，由此去除其與效應(yīng)細(xì)胞Fe受體相互作用的能力。發(fā)明人進(jìn)一步證明,諸如抗CD32mAb的試劑能夠阻斷這種內(nèi)化。發(fā)明人還證明這樣的試劑可與抗體(例如利妥昔單抗)聯(lián)合用于靶向細(xì)胞表面抗原并改善其體內(nèi)清除正常B細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞的活性。本發(fā)明提供了一種組合物，所述組合物包含:(i)特異性結(jié)合靶細(xì)胞的細(xì)胞表面抗原的抗體分子，所述抗體分子具有能夠結(jié)合Fe y RIIb的Fe結(jié)構(gòu)域;和(ii)抑制或減少Fe y RIIb與所述抗體分子的Fe結(jié)構(gòu)域結(jié)合的試劑，其特征在于，所述組合物用于治療具有Fe YRIIb表達(dá)水平升高的靶細(xì)胞的患者。根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供了抑制或減少抗體分子的Fe結(jié)構(gòu)域與靶細(xì)胞上的Fe Y RIIb之間結(jié)合的試劑的用途，其中所述抗體分子特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面抗原，其特征在于，所述用途為在制備用于治療具有Fe YRIIb表達(dá)水平升高的靶細(xì)胞的患者的藥物中的用途。根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供了一種治療具有表達(dá)Fe Y RIIb的靶細(xì)胞的患者的方法，所述方法包括聯(lián)合施用:(i)特異性結(jié)合所述靶細(xì)胞的表面抗原的抗體分子，所述抗體分子具有能夠結(jié)合Fe y RIIb 的Fe結(jié)構(gòu)域；和(ii)抑制或減少所述抗體分子的Fe結(jié)構(gòu)域和Fe y RIIb之間結(jié)合的試劑，其特征在于，所述患者是基于靶細(xì)胞Fe y RIIb表達(dá)水平升高選擇的。在本發(fā)明組合物、用途或方法的某些實(shí)施方式中，所述試劑抑制或減少靶細(xì)胞上存在的Fe y RIIb與所述抗體分子的Fe結(jié)構(gòu)域的結(jié)合。根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供靶細(xì)胞上的Fe YRIIb表達(dá)作為所述靶細(xì)胞對(duì)于使用特異性結(jié)合所述靶細(xì)胞表面抗原的抗體分子治療的響應(yīng)的預(yù)后標(biāo)志物的用途，所述抗體分子具有能夠結(jié)合Fe y RIIb的Fe結(jié)構(gòu)域，由此Fe y RIIb水平升高提示對(duì)使用所述抗體分子治療的響應(yīng)減少或不響應(yīng)。在一種實(shí)施方式中，靶細(xì)胞上的Fe Y RIIb表達(dá)作為預(yù)后標(biāo)志物的用途不需要將靶細(xì)胞上的Fe y RIIc表達(dá)用作預(yù)后標(biāo)志物。根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供了一種用于預(yù)測(cè)患者靶細(xì)胞對(duì)于使用特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面抗原并具有能夠結(jié)合Fe YRIIb的Fe結(jié)構(gòu)域的抗體分子治療的響應(yīng)的方法，其特征在于，所述方法包括測(cè)定靶細(xì)胞上的Fe y RIIb表達(dá)水平，由此Fe Y RIIb水平升高預(yù)示對(duì)使用所述抗體分子治療的響應(yīng)減少或不響應(yīng)。在一種實(shí)施方式中，用于預(yù)測(cè)患者靶細(xì)胞響應(yīng)的方法包括測(cè)定所述靶細(xì)胞上的Fe y RIIb表達(dá)水平，且不另外包括測(cè)定所述靶細(xì)胞上的Fe y RIIc表達(dá)水平。已經(jīng)證明，盡管所有 抗體都具有Fe結(jié)合抗體恒定結(jié)構(gòu)域和已知的Fe y受體結(jié)合能力，但并非所有抗體均以Fe YRIIb依賴性方式被內(nèi)化，這使得合適抗體的鑒定對(duì)包含F(xiàn)e Y RIIb功能調(diào)變劑的聯(lián)合治療的治療成功以及避免無(wú)益于患者的治療至關(guān)重要。在本發(fā)明組合物、用途或方法的某些實(shí)施方式中，特異性結(jié)合靶細(xì)胞的細(xì)胞表面抗原的抗體分子也能夠以Fe YRIIb依賴性方式被內(nèi)化至所述細(xì)胞中，其中所述抗體具有能夠結(jié)合Fe y RIIb的Fe結(jié)構(gòu)域。在本發(fā)明組合物、用途或方法的某些實(shí)施方式中，抑制或減少Fe YRIIb結(jié)合所述抗體分子的Fe結(jié)構(gòu)域的試劑還抑制或減少所述抗體分子被進(jìn)一步內(nèi)化至所述細(xì)胞中。在本發(fā)明組合物、用途或方法的某些實(shí)施方式中，所述靶細(xì)胞是癌細(xì)胞。方便地，所述IE細(xì)胞是B細(xì)胞。有利地，根據(jù)本發(fā)明，其中所述靶細(xì)胞上的Fe YRIIb表達(dá)升高是相對(duì)于對(duì)照或參照而定的。優(yōu)選地，所述對(duì)照是與靶細(xì)胞相同類(lèi)型的細(xì)胞中Fe y RIIb的正常表達(dá)水平?！癋e Y RIIb表達(dá)水平升高”在下文的“定義”中有定義。Fe Y RIIb表達(dá)水平可計(jì)算為Fe Y RIIb的幾何平均熒光強(qiáng)度(幾何MFI或Geo MFI)與同種型對(duì)照之比?？蛇x地，F(xiàn)e y RIIb表達(dá)水平可通過(guò)腫瘤活組織檢查的免疫組織化學(xué)來(lái)計(jì)算。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，有多種用于測(cè)定Fe YRIIb表達(dá)水平的技術(shù)和方法。本發(fā)明還教導(dǎo)了如何鑒定適于與Fe Y RIIb抗體聯(lián)合治療的抗體，所述抗體即以FcYRIIb依賴性方式被靶細(xì)胞表面內(nèi)化的那些抗體。本發(fā)明還提供了鑒定適于與Fe y RIIb抗體聯(lián)合治療的患者亞組。在另一方面，本發(fā)明提供了用于鑒定減少或抑制針對(duì)靶細(xì)胞表面抗原的抗體Fe結(jié)構(gòu)域和靶細(xì)胞上的Fe YRIIb之間結(jié)合的試劑的測(cè)定方法，所述測(cè)定方法包括測(cè)定在存在和不存在試驗(yàn)試劑的情況下Fe結(jié)構(gòu)域和Fe y RIIb之間的結(jié)合程度。如果試驗(yàn)試劑減少或抑制了 Fe結(jié)構(gòu)域與Fe YRIIb的結(jié)合，則鑒定為有用的試劑。這樣的測(cè)定方法還可用于鑒定何種試劑(例如抗體分子)適于與抗Fe Y RIIb抗體的聯(lián)合治療。在另一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，鑒定可用于本發(fā)明用途和方法實(shí)踐中的試劑的測(cè)定方法包括篩選阻斷Fe y RIIb刺激/信號(hào)傳導(dǎo)的試劑，如通過(guò)蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ITIM基序中酪氨酸-293的磷酸化所提示的阻斷Fe y RIIb刺激/信號(hào)傳導(dǎo)的試劑。例如，在對(duì)磷酸化Fe y RIIb進(jìn)行免疫印跡之前，在存在或不存在抗Fe y RIIb測(cè)試試劑的情況下，將Raji細(xì)胞與針對(duì)細(xì)胞表面抗原的抗體(例如，抗CD20mAb利妥昔單抗)一起溫育。磷酸化Fe y RIIb的量在利妥昔單抗刺激的細(xì)胞中升高，并且，與圖4A中所示使用ATlO作為阻斷劑相似，應(yīng)被添加試驗(yàn)試劑所抑制。另外，根據(jù)

圖1A中所示的淬滅實(shí)驗(yàn)，這些試劑還應(yīng)優(yōu)選阻斷利妥昔單抗的內(nèi)化。圖2B顯示抗Fe Y RIIb阻斷物(在此情況下為AT10)阻斷的典型實(shí)例。這些測(cè)定方法還可用于鑒定何種試劑(例如抗體分子)適于與抗Fe Y RIIb抗體聯(lián)合治療。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，用于鑒定適于與Fe Y RIIb抗體聯(lián)合治療的試劑的測(cè)定方法計(jì)算了內(nèi)化至表達(dá)Fe YRIIb的細(xì)胞中的試劑(例如，抗體分子)的百分率。該測(cè)定方法的特征在于，所述方法包括測(cè)定在表達(dá)試劑(例如，抗體分子)靶和表達(dá)Fe Y RIIb的細(xì)胞一起溫育之后保留于細(xì)胞表面上的試劑(例如，抗體分子)的百分?jǐn)?shù)，由此，細(xì)胞表面可及的試劑(例如，抗體分子)減少的百分?jǐn)?shù)可預(yù)示對(duì)使用所述抗體分子的治療的響應(yīng)。通過(guò)引用并入本文的Neubig et al (2003)Pharmacol.Rev.55, 597-606 描述了可被篩選以鑒定本發(fā)明抑制或減少Fe Y RIIb與抗體分子Fe結(jié)構(gòu)域結(jié)合的試劑的多種類(lèi)型的配體。上述配體可為小的有機(jī)或無(wú)機(jī)物，但優(yōu)選它們?yōu)殡幕蚨嚯?。通常，?dāng)配體為小的有機(jī)或無(wú)機(jī)物時(shí)，其相對(duì)分子量(Mr)為50至2000，例如，100至1000，例如100至500。通常，配體以mM至pM的Kd結(jié)合Fe Y Rllb，例如在ii M(微摩爾)至nM范圍。通常，優(yōu)選具有最低Kd的配體。

所述配體可為擬肽、核酸、肽核酸(PNA)或適體。其還可為脂質(zhì)或碳水化合物。所述配體可為結(jié)合Fe y RIIb的多肽。這樣的多肽(包括寡肽)通常為Mr 500至Mr 50，000，但可以更大。所述多肽還可為基于模塊框架(modular framework)的結(jié)合蛋白，例如錨肽重復(fù)序列蛋白、猶餘(armadillo)重復(fù)序列蛋白、富亮氨酸蛋白、三十四肽(tetartriopeptide)重復(fù)序列蛋白或設(shè)計(jì)的錨肽重復(fù)序列蛋白(DARPins)或基于脂質(zhì)運(yùn)載蛋白或纖連蛋白結(jié)構(gòu)域或Affilin支架的蛋白。便利地，所述測(cè)試試劑為測(cè)試化合物文庫(kù)，并且優(yōu)選地，該文庫(kù)為任何肽文庫(kù)、蛋白文庫(kù)、抗體文庫(kù)、重組組合抗體文庫(kù)或scFV或Fab噬菌體展示文庫(kù)。優(yōu)選地，在本發(fā)明的組合物、用途或方法中，所述試劑(ii)是特異性結(jié)合FcyRIIb的一種或多種抗體分子。便利地，所述一種或多種抗體分子不包括能夠招募效應(yīng)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)域。便利地，所述一種或多種抗體分子為一種或多種單克隆抗體分子。優(yōu)選地，所述試劑抑制或減少Fe YRIIb信號(hào)傳導(dǎo)。甚至更優(yōu)選地，所述試劑抑制或減少祀細(xì)胞對(duì)所述抗體分子的內(nèi)化。在下列實(shí)施方式中，SEQ ID NO是指在下文克隆1_13中所示的序列。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)知道，在免疫球蛋白的重鏈和輕鏈可變區(qū)上存在三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。本文所述的氨基酸至各CDR的分配與Kabat EA et al.1991，" Sequences ofProteins of Immulogical Interest"，第 5 版，NIH 公布號(hào) 91-3242，第 xv_xvii 頁(yè)中的定義相一致。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)知道，還有其他用于將氨基酸分配至各⑶R中的方法。例如，International ImMunoGeneTics 信息系統(tǒng)(IMGT (r；) (http:// www.1mgt.0rg/和 AcademicPress, 2001 出版的 Lefranc “The Immunoglobulin FactsBook”)。在一種實(shí)施方式中，所述試劑包含含有下列⑶R的重鏈可變區(qū)(VH):(i)SEQ ID N0:29 和 SEQ ID N0:30 和 SEQ ID N0:31 ;或(ii)SEQ ID N0:35 和 SEQ ID N0:36 和 SEQ ID N0:37;或(iii)SEQ ID NO:41和 SEQ ID NO:42 和 SEQ ID NO:43 ;或(iv) SEQ ID N0:47 和 SEQ ID N0:48 和 SEQ ID NO:49 ;或(v)SEQ ID NO:53 和 SEQ ID NO:54 和 SEQ ID NO: 55 ;或(vi)SEQ ID N0:59 和 SEQ ID N0:60 和 SEQ ID N0:61 ;或(vii)SEQ ID N0:65 和 SEQ ID N0:66 和 SEQ ID N0:67 ;或(viii)SEQ ID NO:71 和 SEQ ID NO:72 和 SEQ ID NO:73;或(ix)SEQ ID N0:77 和 SEQ ID N0:78 和 SEQ ID N0:79;或(x)SEQ ID NO:83 和 SEQ ID NO:84 和 SEQ ID NO:85 ;或(xi)SEQ ID N0:89 和 SEQ ID N0:90 和 SEQ ID N0:91 ;或(xii)SEQ ID N0:95 和 SEQ ID N0:96 和 SEQ ID N0:97 ;或(xiii)SEQ ID NO:101和 SEQ ID NO:102 和 SEQ ID NO:103。優(yōu)選地，所述試劑包含含有下列⑶R的輕鏈可變區(qū)(VL):(i)SEQ ID N0:32 和 SEQ ID N0:33 和 SEQ ID N0:34;或(ii)SEQ ID N0:38 和 SEQ ID N0:39 和 SEQ ID NO:40 ;或(iii)SEQ ID N0:44 和 SEQ ID N0:45 和 SEQ ID NO:46 ;或(iv) SEQ ID NO: 50 和 SEQ ID NO: 51 和 SEQ ID NO: 52 ;或(v)SEQ ID NO:56 和 SEQ ID NO:57 和 SEQ ID NO:58 ;或(vi)SEQ ID N0:62 和 SEQ ID N0:63 和 SEQ ID NO:64 ;或(vii)SEQ ID N0:68 和 SEQ ID N0:69 和 SEQ ID N0:70;或(viii)SEQ ID N0:74 和 SEQ ID N0:75 和 SEQ ID N0:76;或(ix)SEQ ID N0:80 和 SEQ ID N0:81和 SEQ ID N0:82 ;或(x)SEQ ID N0:86 和 SEQ ID N0:87 和 SEQ ID NO:88 ;或(xi)SEQ ID N0:92 和 SEQ ID N0:93 和 SEQ ID NO:94 ;或

(xii)SEQ ID N0:98 和 SEQ ID N0:99 和 SEQ ID N0:100;或(xiii)SEQ ID NO:104 和 SEQ ID NO:105 和 SEQ ID NO:106。任選地，所述試劑包含選自以下氨基酸序列組成的組的重鏈可變區(qū)(VH)氨基酸序列:SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:5,SEQ ID N0:6、SEQ ID NO:7,SEQ ID N0:8、SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和 SEQ ID NO:15。
權(quán)利要求
1.組合物，所述組合物包含: (i)抗體分子，所述抗體分子特異性結(jié)合靶細(xì)胞的細(xì)胞表面抗原，且具有能夠結(jié)合Fe y RIIb的Fe結(jié)構(gòu)域;和 (ii)試劑，所述試劑抑制或減少Fey RIIb與所述抗體分子的Fe結(jié)構(gòu)域結(jié)合， 其特征在于，所述組合物用于治療具有FcyRIIb表達(dá)水平升高的靶細(xì)胞的患者。
2.抑制或減少抗體分子Fe的結(jié)構(gòu)域與靶細(xì)胞上的Fey RIIb之間結(jié)合的試劑的用途，其中所述抗體分子特異性結(jié)合所述靶細(xì)胞的表面抗原，并且其特征在于，所述用途為在制備用于治療具有Fe y RIIb表達(dá)水平升高的靶細(xì)胞的患者的藥物中的用途。
3.治療具有表達(dá)FeY RIIb的靶細(xì)胞的患者的方法，所述方法包括聯(lián)合施用:(i)特異性結(jié)合所述靶細(xì)胞的表面抗原的抗體分子，所述抗體分子具有能夠結(jié)合Fe y RIIb的Fe結(jié)構(gòu)域；和Qi)抑制或減少所述抗體分子的Fe結(jié)構(gòu)域和Fe y RIIb之間結(jié)合的試劑,其特征在于，所述患者是基于其靶細(xì)胞的Fe YRIIb表達(dá)水平升高來(lái)選擇的。
4.靶細(xì)胞上的Fey RIIb表達(dá)作為所述靶細(xì)胞對(duì)于使用抗體分子治療的響應(yīng)的預(yù)后標(biāo)志物的用途，所述抗體分子特異性結(jié)合所述靶細(xì)胞的表面抗原，且所述抗體分子具有能夠結(jié)合Fe y RIIb的Fe結(jié)構(gòu)域，由此Fe y RIIb水平升高表明對(duì)使用所述抗體分子治療的響應(yīng)減少或不響應(yīng)。
5.用于預(yù)測(cè)患者靶細(xì)胞對(duì)于使用抗體分子治療的響應(yīng)的方法，所述抗體分子特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面抗原并具有能夠結(jié)合Fe Y RIIb的Fe結(jié)構(gòu)域，其特征在于，所述方法包括測(cè)定所述靶細(xì)胞上的Fe y RIIb表達(dá)水平，由此Fe y RIIb水平升高預(yù)示對(duì)使用所述抗體分子治療的響應(yīng)減少或不響應(yīng)。
6.根據(jù)權(quán)利要 求1-3任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑抑制或減少所述革G細(xì)胞上的Fe y RIIb與所述抗體分子的Fe結(jié)構(gòu)域結(jié)合。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面抗原且具有能夠結(jié)合Fe y RIIb的Fe結(jié)構(gòu)域的所述抗體分子能夠以Fe y RIIb依賴性方式被內(nèi)化至所述靶細(xì)胞中。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-3和6-7任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述抑制或減少Fe y RIIb與所述抗體分子Fe結(jié)構(gòu)域的結(jié)合的試劑還抑制或減少所述抗體分子內(nèi)化至所述靶細(xì)胞中。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述靶細(xì)胞是癌細(xì)胞。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述靶細(xì)胞是B細(xì)胞。
11.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中待治療的所述患者為癌癥患者，所述治療為癌癥治療。
12.根據(jù)權(quán)利要求9-11任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述癌癥選自非何杰金淋巴瘤，例如濾泡性淋巴瘤、彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤、外套細(xì)胞淋巴瘤或慢性淋巴細(xì)胞性白血病。
13.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑為下述任一者:多肽；anticalin ;肽；抗體；嵌合抗體；單鏈抗體；適體；darpin ;Fab、F(ab ' )2、Fv、ScFv或dAb抗體片段；小分子；天然產(chǎn)物；親和體；擬肽；核酸；肽核酸分子；脂質(zhì)；碳水化合物；基于模塊框架的蛋白，包括錨蛋白重復(fù)序列蛋白、犰狳重復(fù)序列蛋白、富亮氨酸蛋白、三十四肽重復(fù)序列蛋白或設(shè)計(jì)的錨蛋白重復(fù)序列蛋白(DARPins)。
14.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑為特異性結(jié)合Fe y RIIb的一種或多種抗體分子。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的組合物、用途或方法，其中所述一種或多種抗體分子不包含能夠招募效應(yīng)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)域。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的組合物、用途或方法，其中所述一種或多種抗體分子為單克隆抗體分子。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-3和6-16任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑包含含有下列⑶R的重鏈可變區(qū)(VH):(i)SEQID NO:29 和 SEQ ID NO:30 和 SEQ ID NO:31 ;或 (ii)SEQID NO:35 和 SEQ ID NO:36 和 SEQ ID NO:37;或(iii)SEQID NO:41 和 SEQ ID NO:42 和 SEQ ID NO:43 ;或(iv)SEQID NO:47 和 SEQ ID N0:48 和 SEQ ID N0:49 ;或(v)SEQID NO:53 和 SEQ ID NO:54 和 SEQ ID NO:55;或(vi)SEQID NO:59 和 SEQ ID NO:60 和 SEQ ID NO:61 ;或(vii)SEQID NO:65 和 SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO:67 ;或(viii)SEQID NO:71 和 SEQ ID NO:72 和 SEQ ID NO:73;或(ix)SEQID NO:77 和 SEQ ID NO:78 和 SEQ ID NO:79;或(x)SEQID NO:83 和 SEQ ID NO:84 和 SEQ ID NO:85 ;或(xi)SEQID NO:89 和 SEQ ID NO:90 和 SEQ ID NO:91 ;或(xii)SEQID NO:95 和 SEQ ID NO:96 和 SEQ ID NO:97 ;或(xiii)SEQID NO:101 和 SEQ ID NO:102 和 SEQ ID NO:103。
18.根據(jù)權(quán)利要求1-3和6-17任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑包含含有下列CDR的輕鏈可變區(qū)(VL):(i)SEQID NO:32 和 SEQ ID NO:33 和 SEQ ID NO:34;或(ii)SEQID NO:38 和 SEQ ID NO:39 和 SEQ ID NO:40 ;或(iii)SEQID NO:44 和 SEQ ID NO:45 和 SEQ ID NO:46 ;或(iv)SEQ ID NO: 50 和 SEQ ID NO: 51 和 SEQ ID NO: 52;或(v)SEQID NO:56 和 SEQ ID NO:57 和 SEQ ID NO:58;或(vi)SEQID NO:62 和 SEQ ID NO:63 和 SEQ ID NO:64 ;或(vii)SEQID NO:68 和 SEQ ID NO:69 和 SEQ ID NO:70;或(viii)SEQID NO:74 和 SEQ ID NO:75 和 SEQ ID NO:76;或(ix)SEQID NO:80 和 SEQ ID NO:81 和 SEQ ID NO:82 ;或(x)SEQID NO:86 和 SEQ ID NO:87 和 SEQ ID NO:88 ;或(xi)SEQID NO:92 和 SEQ ID NO:93 和 SEQ ID NO:94 ;或(xii)SEQID NO:98 和 SEQ ID NO:99 和 SEQ ID NO: 100;或(xiii)SEQID NO:104 和 SEQ ID NO:105 和 SEQ ID NO:106。
19.根據(jù)權(quán)利要求1-3和6-18任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑包含選自以下氨基酸序列組成的組的重鏈可變區(qū)(VH)氨基酸序列:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14 和 SEQ ID NO:15。
20.根據(jù)權(quán)利要求1-3和6-19任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑包含選自以下氨基酸序列組成的組的輕鏈可變區(qū)(VL)氨基酸序列:SEQ ID NO: 16,SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27 和 SEQ ID NO:28。
21.根據(jù)權(quán)利要求1-3和6-20任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑包含以下⑶R氨基酸序列:(i)SEQID NO: 29 和 SEQ ID NO: 30和 SEQ ID NO: 31 和 SEQ ID NO: 32和 SEQ ID NO: 33和 SEQ ID NO:34 ;或(ii)SEQID NO:35和SEQ ID NO:36和SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:39和 SEQ ID NO:40 ;或(iii)SEQID NO:41 和 SEQ ID NO:42 和 SEQ ID NO:43 和 SEQ ID NO:44 和 SEQ IDNO:45 和 SEQ ID NO:46 ;或(iv)SEQID NO:47和SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51和 SEQ ID NO:52 ;或(v)SEQID NO: 53 和 SEQ ID NO: 54 和 SEQ ID NO: 55 和 SEQ ID NO: 56 和 SEQ ID NO: 57和 SEQ ID NO:58 ;或(vi)SEQID NO:59和SEQ ID NO:60和SEQ ID NO:61 和SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63和 SEQ ID NO:64 ;或 (vii)SEQID NO:65 和 SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO:67 和 SEQ ID NO:68 和 SEQ IDNO:69 和 SEQ ID NO:70 ;或(viii)SEQID NO:71 和 SEQ ID NO:72 和 SEQ ID NO:73 和 SEQ ID NO:74 和 SEQ IDNO:75 和 SEQ ID NO:76 ;或(ix)SEQID NO:77和SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:79和SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81和 SEQ ID NO:82 ;或(x)SEQID NO:83 和 SEQ ID NO:84和 SEQ ID NO:85 和 SEQ ID NO:86和 SEQ ID NO:87和 SEQ ID NO:88 ;或(xi)SEQID NO:89和SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:91 和SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93和 SEQ ID NO:94 ;或(xii)SEQID NO:95 和 SEQ ID NO:96 和 SEQ ID NO:97 和 SEQ ID NO:98 和 SEQ IDNO:99 和 SEQ ID NO: 100 ;或(xiii)SEQID NO:101 和 SEQ ID NO:102 和 SEQ ID NO:103 和 SEQ ID NO:104 和 SEQID NO:105 和 SEQ ID NO:106。
22.根據(jù)權(quán)利要求1-3和6-21任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑包含以下氨基酸序列:(i)SEQID NO:3 和 SEQ ID NO: 16;或(ii)SEQIS NO:4 和 SEQ ID NO: 17;或(iii)SEQIS NO:5 和 SEQ ID NO: 18;或(iv)SEQ ID NO: 6 和 SEQ ID NO: 19;或(v)SEQID NO:7 和 SEQ ID NO:20;或(vi)SEQID NO:8 和 SEQ ID NO:21 ;或(vii)SEQID NO:9 和 SEQ ID NO:22;或(viii)SEQID NO: 10 和 SEQ ID NO:23;或(ix)SEQID NO: 11 和 SEQ ID NO:24;或(x)SEQID NO: 12 和 SEQ ID NO:25;或(xi)SEQID NO: 13 和 SEQ ID NO:26;或(xii)SEQID NO: 14 和 SEQ ID NO:27;或(xiii)SEQID NO:15 和 SEQ ID NO:28。
23.根據(jù)權(quán)利要求1-3和6-16任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑能夠與權(quán)利要求17-22所述的試劑競(jìng)爭(zhēng)，從而用于抑制或減少Fe y RIIb與所述抗體分子的Fe結(jié)構(gòu)域的結(jié)合。
24.根據(jù)權(quán)利要求1-3和6-23任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑抑制或減少Fe Y RIIb信號(hào)傳導(dǎo)。
25.根據(jù)權(quán)利要求1-3和6-24任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑抑制或減少所述抗體分子被 所述靶細(xì)胞內(nèi)化。
26.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述細(xì)胞表面抗原選自CD19、CD20 或 CD40。
27.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述特異性結(jié)合細(xì)胞表面抗原的抗體分子為CD20抗體。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的組合物、用途或方法，其中所述CD20抗體為I型CD20抗體。
29.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述細(xì)胞表面抗原為CD20，所述特異性結(jié)合細(xì)胞表面抗原的抗體分子為I型抗體。
30.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的組合物、用途或方法，其中所述靶細(xì)胞上的Fe y RIIb表達(dá)升高是相對(duì)于對(duì)照而確定的，優(yōu)選地，所述對(duì)照是Fe y RIIb在與所述靶細(xì)胞相同類(lèi)型的細(xì)胞中的正常表達(dá)水平。
31.組合物，其基本上如本文說(shuō)明書(shū)和附圖所述。
32.用途，其基本上如本文說(shuō)明書(shū)和附圖所述。
33.方法，其基本上如本文說(shuō)明書(shū)和附圖所述。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療具有表達(dá)FcγRIIb的靶細(xì)胞的患者的方法，所述方法包括聯(lián)合施用(i)特異性結(jié)合所述靶細(xì)胞的表面抗原的抗體分子，所述抗體分子具有能夠結(jié)合FcγRIIb的Fc結(jié)構(gòu)域；和(ii)抑制或減少所述抗體分子的Fc結(jié)構(gòu)域和FcγRIIb之間結(jié)合的試劑，其特征在于，所述患者是基于其靶細(xì)胞的FcγRIIb表達(dá)水平升高來(lái)選擇的。
文檔編號(hào)A61P35/02GK103080131SQ201180040351
公開(kāi)日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2011年8月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月20日
發(fā)明者馬克·克拉格, M·格蘭尼, 阿里·魯加尼安, 斯蒂芬·貝爾斯, P·約翰遜, 肖恩·林, 比約恩·弗倫多斯, 英格麗德·泰格 申請(qǐng)人:南安普敦大學(xué)