專利名稱：：用作抗癌劑的萜類衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及現(xiàn)有技術(shù)(HelveticaChimicaActaVol.70，1987，2019-2027和HelveticaChimicaActaVol.71，1988，964-976)中稱作Sarcodictyins的萜類衍生物，它能用作治療劑。以前沒有報道過本發(fā)明所提到的Sarcodictyins的治療用途。根據(jù)本發(fā)明，特別是就Sarcodictyins的細胞毒素活性來說，它能夠在人或動物的癌癥治療中用作抗腫瘤治療劑。所以，本發(fā)明涉及一種選自于下組中的用作治療劑的化合物(E)-3-(1-甲基-1H-咪唑-4基)丙烯酸(-)-(4R，4aR，7R，10S，11S，12aS，1Z，5E，8Z)-7，10-環(huán)氧-3，4，4a，7，10，11，12，12a-八氫-7-羥基-6-(甲氧基羰基)-1，10-二甲基-4-(1-甲基乙基)苯并環(huán)十-11-基酯(SarcodictyinsA)；(E)-3-(1-甲基-1H-咪唑-4基)丙烯酸(-)-(4R，4aR，7R，10S，11S，12aS，1Z，5E，8Z)-7，10-環(huán)氧-6-(乙氧基羰基)-3，4，4a，7，10，11，12，12a-八氫-7-羥基-1，10-二甲基-4-(1-甲基乙基)苯并環(huán)十-11-基酯(SarcodictyinsB)；(E)-3-(1-甲基-1H-咪唑-4基)丙烯酸(-)-(3R，4S，4aR，7S，10R，11R，12aS，1Z，5E，8Z)-7，10-環(huán)氧-3，4，4a，7，10，11，12，12a-八氫-3，7-二羥基-6-(甲氧基羰基)-1，10-二甲基-4-(1-甲基乙基)苯并環(huán)十-11-基酯(SarcodictyinsC)；(E)-3-(1-甲基-1H-咪唑-4基)丙烯酸(-)-(3R，4S，4aR，7S，10R，11R，12aS，1Z，5E，8Z)-3-乙酰氧基-7，10-環(huán)氧-3，4，4a，7，10，11，12，12a-八氫-7-羥基-6-(甲氧基羰基)-1，10-二甲基-4-(1-甲基乙基)苯并環(huán)十-11-基酯(SarcodictyinsD)；(Z)-3-(1-甲基-1H-咪唑-4基)丙烯酸(+)-(3R，4S，4aR，7S，10R，11R，12aS，1Z，5E，8Z)-7，10-環(huán)氧-3，4，4a，7，10，11，12，12a-八氫-3，7-二羥基-6-(甲氧基羰基)-1，10-二甲基-4-(1-甲基乙基)苯并環(huán)十-11-基酯(SarcodictyinsE)；和(E)-3-(1-甲基-1H-咪唑-4基)丙烯酸(+)-(1R，4R，4aR，7R，10S，11S，12aS，2Z，5E，8Z)-7，10-環(huán)氧-1，4，4a，7，10，11，12，12a-八氫-1，7-二羥基-6-(甲氧基羰基)-1，10-二甲基-4-(1-甲基乙基)苯并環(huán)十-11-基酯(SarcodictyinsF)。參照下列通式，在表1中報道了上述列化合物的結(jié)構(gòu)式在上述通式中，符號*表示手性中心。表1\SarcodictyinC(A1)MeOH(E)uSarcodictyinD(A1)MeOAC(E)uSarcodictyinE(A1)MeOH(Z)uSarcodictyinF(A2)MeOH(E)u</table></tables>在上述表1中符號Me是指甲基；符號Et是指乙基；符號OAc是指OCOCH3。符號(E)u和(Z)u分別是指下列通式的(E)和(Z)咪唑丙烯?；鶊F(E)咪唑丙烯?；?Z)咪唑丙烯?；貏e是上述所提到的SarcodictyinA到F可因其細胞毒性即抗腫瘤活性而在人或動物的癌癥治療中作為治療劑。所說的癌癥可選自于肉瘤、癌、淋巴瘤、成神經(jīng)細胞瘤、黑素瘤、骨髓瘤、維爾姆斯瘤、白血病和腺癌中。按照HelveticaChimicaActaVol.70，1987，第2025頁中所述的方法，本發(fā)明的Sarcodictyin可從地中海Stoloniferan的珊瑚“SarcodictyonRoseum”(Rolandiarosea)(Forbes1847)中分離得到。通過(a)“體外”試驗評價它們在促進微管蛋白合成中的活性和(b)“體外”試驗評價它們對L1210細胞和耐阿霉素的L1210細胞(L1210/Dx)的細胞毒性來證實本發(fā)明的Sarcodictyin的生物活性。例如，按照試驗(a)和(b)中所述的方法評價SarcodictyinA(內(nèi)部編碼FCE29123)和SarcodictyinC(內(nèi)部編碼FCE29119)的活性。(a)微管蛋白的合成試驗用合成-分散兩步循環(huán)法制備小牛的腦微管蛋白(ShelanskiM.L.，GaskinF.和CantorC.R.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.70，765-768，1973)并在液氮下存放在MAB(0.1MMES，2.5mMEGTA，0.5mMMgSO4，0.1mMEDTA，0.1mMDTT，pH6.4)中。全部試驗都是在存放少于4周的蛋白質(zhì)上進行的。在每次試驗前，把微管蛋白在4℃下保存30分鐘。用Gaskin等的方法(GaskinF.，CantorC.R.和ShelanskiM.L.，J.Molec.Biol.89，737-758，1974)監(jiān)控合成。把含有微管蛋白(1mg/ml)和1mMGTP的比色杯移至37℃下并在裝有一部自動記錄儀和恒溫調(diào)節(jié)的樣品室的Perkin-elmer557的雙波長雙束分光光度計連續(xù)進行混濁度的測定。30分鐘后，加入4mMCaCl2并測定10分鐘的解聚作用作為降低的混濁度。在15分鐘的固定間隔，加入等分劑量的試驗化合物并監(jiān)控混濁度的變化。數(shù)據(jù)表示了試驗化合物誘發(fā)的再聚合百分比。表2顯示了所得到的試驗結(jié)果。表2上述表中的數(shù)據(jù)清除地表明即使有通常抑制微管蛋白合成的CaCl2的存在試驗的Sarcodictyin也能夠促進微管蛋白的再聚合。正如現(xiàn)有技術(shù)所熟知的，微管是在抗癌化療中最重要的亞細胞靶(Rowinsky等，Review，Vol.82，No.15，1990年8月1號)。不象能夠誘發(fā)解聚微管的傳統(tǒng)抗微管劑如秋水仙堿和長春花屬的生物堿，Sarcodictyin似乎具有類似于一種從天然產(chǎn)物中篩選出的最有益的抗癌劑紫杉醇的作用機理即誘發(fā)細管聚合并形成非常穩(wěn)定和無功能性的微管。所以，就Sarcodictyin能夠促進微管快速形成和穩(wěn)定從而引起腫瘤細胞中的細胞分裂的暫停的能力而言，它能夠在人或動物的癌癥治療中用作抗腫瘤治療劑。(b)細胞培養(yǎng)和藥物敏感性的試驗在RPMI1640培養(yǎng)基(GIBCO，Grandisland，NY)中L1210和L1210/DX(抗阿霉素)鼠白血病細胞系體外生長從而作為穩(wěn)定的懸浮培養(yǎng)物，其中的RPMI1640培養(yǎng)基含有10％胎小牛血清(Flow，Irwine，UK)，2mML-谷氨酰胺(GibcoEurope，Glasgow，UK)，10uM巰基乙醇，100個單位/ml青霉素和100ug/ml鏈霉素。在12孔/平皿(Costar，Cambridge，MA)上接種指數(shù)增長的細胞(1×105個細胞/毫升)并在接種后馬上加入各種濃度的試驗化合物。在37℃潮濕的5％CO2大氣中把該平皿溫育48小時。在一臺ZBICoulter計數(shù)器(Hialeah，F(xiàn)L)計數(shù)存活細胞數(shù)來評價對細胞生長的抑制。在導(dǎo)出的濃度-反應(yīng)曲線上計算50％的抑制濃度(IC50)。對每種試驗化合物濃度來說，使用雙份培養(yǎng)物。表3報道了所得到的結(jié)果。表3*治療48小時R.I.＝耐藥指數(shù)＝ID50L1210/DXID50L1210正如上述表中的數(shù)據(jù)所證實的，Sarcodictyin對L1210和抗阿霉素的L1210細胞(L1210/DX)二者都具有良好的體外細胞毒活性。就Sarcodictyin對L1210/DX細胞的功效而言，它能夠用于耐化學(xué)治療劑如蒽環(huán)(anthracycline)糖甙特別是阿霉素的腫瘤治療中。用這樣一種方法能夠治療人或動物，即該方法包括將藥物有效量的選自于SarcodictyinA，SarcodictyinB，SarcodictyinC，SarcodictyinD，SarcodictyinE和SarcodictyinF中的一種化合物給藥于患者。因此，改善了該人或動物的癥狀。本發(fā)明的Sarcodictyin能夠以各種劑型給藥，如以片劑、膠囊、糖或膜包衣的片劑、液體溶液或懸浮液的形式口服給藥；以栓劑的形式直腸給藥；腸胃外給藥如肌肉內(nèi)給藥或靜脈注射或輸液給藥。劑量取決于患者的年齡、體重和身體條件和給藥途徑；例如，給成人口服如本發(fā)明的代表化合物FCE29213(SarcodictyinA)所采用的劑量可以在每天大約0.01g到大約1g的范圍內(nèi)。本發(fā)明還包括藥物組合物，它含有本發(fā)明的Sarcodictyin作活性成分以及藥物可接受的賦型劑(可是載體或稀釋劑)。含有本發(fā)明化合物的該藥物組合物一般是按照常規(guī)的方法制備的并可以藥物的適當(dāng)形式給藥。例如，固體口服形式可含有活性化合物及稀釋劑如乳糖、左旋糖、蔗糖、纖維素、玉米淀粉或馬鈴薯淀粉；潤滑劑如二氧化硅、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂或鈣，和/或聚乙二醇；粘合劑如淀粉、阿拉伯膠、明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；崩解劑如淀粉、藻酸、藻酸鹽或羥乙酸淀粉鈉；發(fā)泡混合物；染料；矯味劑；濕潤劑如卵磷脂、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯、月桂醇硫酸酯；和藥物制劑中所用的一般的無毒和藥效非活性物質(zhì)。該藥物制劑可以用熟知的方法生產(chǎn)，例如，混合、制粒、壓片、包衣或膜包衣的工藝方法?？诜囊后w分散液可以是如糖漿、乳液和懸浮液。糖漿可以包括例如蔗糖或含有甘油的蔗糖和/或甘露醇和/或山梨醇作載體。懸浮液和乳液可以包括例如天然膠、瓊脂、藻酸鈉、果膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯醇。用于肌肉內(nèi)注射的懸浮液或溶液可含有活性成分及藥用載體例如，無菌水、橄欖油、油酸乙酯、乙二醇類如聚乙二醇和如果需要，定量的鹽酸利多卡因。用于靜脈注射或輸液的溶液可以包括例如，無菌水或優(yōu)選無菌、含水和等滲的鹽水溶液形式作載體。栓劑可含活性化合物及藥用載體例如，可可脂、聚乙二醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯表面活性劑或卵磷脂。權(quán)利要求1.一種選自于下組的用作治療劑的化合物(E)-3-(1-甲基-1H-咪唑-4基)丙烯酸(-)-(4R，4aR，7R，10S，11S，12aS，1Z，5E，8Z)-7，10-環(huán)氧-3，4，4a，7，10，11，12，12a-八氫-7-羥基-6-(甲氧基羰基)-1，10-二甲基-4-(1-甲基乙基)苯并環(huán)十-11-基酯(SarcodictyinsA)；(E)-3-(1-基甲基-1H-咪唑-4基)丙烯酸(-)-(4R，4aR，7R，10S，11S，12aS，1Z，5E，8Z)-7，10-環(huán)氧-6-(乙氧基羰基)-3，4，4a，7，10，11，12，12a-八氫-7-羥基-1，10-二甲基-4-(1-甲基乙基)苯并環(huán)十-11-基酯(SarcodictyinsB)；(E)-3-(1-甲基-1H-咪唑-4基)丙烯酸(-)-(3R，4S，4aR，7S，10R，11R，12aS，1Z，5E，8Z)-7，10-環(huán)氧-3，4，4a，7，10，11，12，12a-八氫-3，7-二羥基-6-(甲氧基羰基)-1，10-二甲基-4-(1-甲基乙基)苯并環(huán)十-11-基酯(SarcodictyinsC)；(E)-3-(1-甲基-1H-咪唑-4基)丙烯酸(-)-(3R，4S，4aR，7S，10R，11R，12aS，1Z，5E，8Z)-3-乙酰氧基-7，10-環(huán)氧-3，4，4a，7，10，11，12，12a-八氫-7-羥基-6-(甲氧基羰基)-1，10-二甲基-4-(1-甲基乙基)苯并環(huán)十-11-基酯(SarcodictyinsD)；(Z)-3-(1-甲基-1H-咪唑-4基)丙烯酸(+)-(3R，4S，4aR，7S，10R，11R，12aS，1Z，5E，8Z)-7，10-環(huán)氧-3，4，4a，7，10，11，12，12a-八氫-3，7-二羥基-6-(甲氧基羰基)-1，10-二甲基-4-(1-甲基乙基)苯并環(huán)十-11-基酯(SarcodictyinsE)；和(E)-3-(1-甲基-1H-咪唑-4基)丙烯酸(+)-(1R，4R，4aR，7R，10S，11S，12aS，2Z，5E，8Z)-7，10-環(huán)氧-1，4，4a，7，10，11，12，12a-八氫-1，7-二羥基-6-(甲氧基羰基)-1，10-二甲基-4-(1-甲基乙基)苯并環(huán)十-11-基酯(SarcodictyinsF)。2.權(quán)利要求1所述的化合物，其用作微管蛋白合成的促進劑，它能夠引起腫瘤細胞中的細胞分裂暫停。3.權(quán)利要求1所述的化合物，其用作抗腫瘤劑。4.權(quán)利要求1所述的化合物，其用于治療抗化學(xué)治療劑的腫瘤。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的化合物，其中的化學(xué)治療劑是蒽環(huán)糖甙。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物，其中的蒽環(huán)糖甙是阿霉素。7.權(quán)利要求1所述的化合物在制備用作人或動物的癌癥治療中抗腫瘤治療劑的藥劑的用途。8.一種藥物組合物，它含有權(quán)利要求1所述的化合物作為活性成分和藥用載體和/或稀釋劑。9.權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其用作微管蛋白合成的促進劑，它能夠引起腫瘤細胞中的細胞分裂暫停。10.權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其用作人或動物的癌癥治療中的抗腫瘤治療劑。11.權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其用于治療抗化學(xué)治療劑的腫瘤。12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的藥物組合物，其中的化學(xué)治療劑是一種蒽環(huán)糖甙。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的藥物組合物，其中的蒽環(huán)糖甙是阿霉素。全文摘要本發(fā)明涉及現(xiàn)有技術(shù)中稱作Sarcodictyins的萜類衍生物用作治療劑，和含有它的藥物組合物。尤其是Sarcodictyins能夠在人或動物的癌癥治療中用作抗腫瘤治療劑。文檔編號A61K31/415GK1155839SQ96190508公開日1997年7月30日申請日期1996年4月23日優(yōu)先權(quán)日1996年4月23日發(fā)明者C·巴蒂斯蒂尼,M·西奧梅,F·皮特拉,M·丹布羅西奧,A·格爾里洛申請人:法瑪西雅厄普約翰公司