專利名稱：烏骨雞黑色素提取物在制備防治抑郁癥的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及烏骨雞黑色素提取物的醫(yī)藥用途，特別涉及烏骨雞黑色素提取物在制備防治抑郁癥的藥物中的新用途。
背景技術(shù)：
抑郁癥是一種情感障礙性精神疾病，主要表現(xiàn)為情緒低落、思維遲緩以及運(yùn)動(dòng)抑制，常伴有睡眠障礙、消化功能減弱、軀體不適、自責(zé)自罪，嚴(yán)重的甚至出現(xiàn)自殘、自殺觀念及行為。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展、生活節(jié)奏加快以及生活壓力增加，抑郁癥已成為現(xiàn)代社會(huì)危害全人類身心健康的常見病，其發(fā)病率逐年攀升。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WTO)最新統(tǒng)計(jì)分析，抑郁癥是危害人類健康最嚴(yán)重的十大疾病之一，預(yù)計(jì)到2020年，可能成為僅次于心血管病的第二大疾病。抑郁癥的高發(fā)病率、致死率、致殘率和疾病負(fù)擔(dān)已引起社會(huì)的廣泛重視。目前對(duì)抑郁癥的確切發(fā)病機(jī)制尚不清楚，因此其臨床治療效果尚不令人滿意，用于防治抑郁癥的化學(xué)合成藥物目前主要有三環(huán)類抗抑郁劑、單胺氧化酶抑制劑和5-羥色胺重吸收抑制劑等，雖然它們具有一定療效，但存在藥物依賴、毒副作用大、易復(fù)發(fā)等缺陷， 從而限制其廣泛使用。因此，尋求高效、低毒副作用的防治抑郁癥的天然來源藥物成為該領(lǐng)域新的研究方向。烏骨雞黑色素是從烏骨雞提取的一種以吲哚環(huán)為主體的含硫異聚物，屬于動(dòng)物源性真黑色素?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，烏骨雞黑色素具有抗紫外線、螯合重金屬離子、抗腫瘤以及提高機(jī)體免疫力等功能。迄今為止，烏骨雞黑色素或其提取物在制備防治抑郁癥的藥物方面的用途尚無報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了烏骨雞黑色素提取物在制備防治抑郁癥的藥物中的用途，其中，所述烏骨雞黑色素提取物作為所述藥物的活性成分。根據(jù)本發(fā)明所述的烏骨雞黑色素提取物的用途，其中，所述藥物還包含藥學(xué)上可接受的載體。根據(jù)本發(fā)明所述的烏骨雞黑色素提取物的用途，其中，所述藥物的劑型包括膠囊齊U、片劑、顆粒劑、膏劑、散劑、口服液以及注射劑。本發(fā)明中烏骨雞黑色素提取物可采用如下的提取方法獲得，該方法包括如下步驟1).制備烏骨雞肉泥；2).雙酶水解采用木瓜蛋白酶和風(fēng)味酶消化步驟1)制得的烏骨雞肉泥；3).采用堿液除蛋白。作為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，上述提取方法中，步驟2)包括如下步驟A.向步驟1)制得的烏骨雞肉泥中添加重量比為1 1至1 3的蒸餾水，加熱至 90°C至100°C并保溫10分鐘至20分鐘，然后冷卻至60°C至70°C，調(diào)節(jié)pH為5. 0至6. 0，然后向其中加入終濃度為3. 0%至4. 0%的木瓜蛋白酶，在60°C至70°C條件下消化2小時(shí)至 4小時(shí)；B.將步驟A所得的混合物冷卻至50°C至60°C，調(diào)節(jié)pH為5. 5至6. 5，向所述混合物中加入終濃度為0. 4%至0. 7%的風(fēng)味酶，在50°C至60°C條件下消化5小時(shí)至7小時(shí)；C.將步驟B所得的混合物加熱至90°C至100°C并保溫20分鐘至40分鐘；靜置分層，收集上層黑色素懸浮層；在3500Xg至4500Xg條件下離心10分鐘至20分鐘。作為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，上述提取方法中，步驟3)的操作方法如下以1 8至1 15(按體積計(jì))的比例向所述步驟2)所得的物質(zhì)中添加pH為8 至10的NaOH溶液，加熱至55°C至75°C并保溫1小時(shí)至2小時(shí)，然后，在3500 X g至4500 X g 條件下離心5分鐘至10分鐘，收集沉淀。作為本發(fā)明的更加優(yōu)選的實(shí)施方式，上述提取方法中，步驟2)包括如下步驟A.向步驟1)制得的烏骨雞肉泥中添加重量比為1 1的蒸餾水，加熱至100°C并保溫15分鐘，然后冷卻至65°C，調(diào)節(jié)pH至5. 5，然后向其中加入終濃度為3. 8%的木瓜蛋白酶，在65°C下消化2小時(shí)；B.將步驟A所得的混合物冷卻至55°C，調(diào)節(jié)pH至6. 0，加入終濃度為0. 6%的風(fēng)味酶，在55°C下消化6小時(shí)；C.將步驟B所得的混合物加熱至100°C并保溫30分鐘；靜置分層，收集上層黑色素懸浮層；在4000Xg條件下離心15分鐘。作為本發(fā)明的更加優(yōu)選的實(shí)施方式，上述提取方法中，步驟3)的操作方法如下以1 10 (按體積計(jì))的比例向所述步驟2)所得的物質(zhì)中添加pH為10的NaOH 溶液，加熱至60°C并保溫1. 5小時(shí)，然后，在4000Xg條件下離心5分鐘，收集沉淀。根據(jù)本發(fā)明所述的烏骨雞黑色素提取物的用途，其中，可將所述烏骨雞黑色素提取物懸浮于生理鹽水中使用。本發(fā)明經(jīng)過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了烏骨雞黑色素提取物具有防治抑郁癥的作用，可用于制備防治抑郁癥的藥物。


圖Ia是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間基礎(chǔ)測(cè)試值的統(tǒng)計(jì)分析圖。圖Ib是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間正式測(cè)試值的統(tǒng)計(jì)分析圖。圖2是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例2小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間測(cè)試值的統(tǒng)計(jì)分析圖。
具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合附圖和實(shí)施例來進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明。在本發(fā)明的實(shí)施例中，分別利用小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)和小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)來評(píng)價(jià)烏骨雞黑色素提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物抑郁癥模型的保護(hù)作用。實(shí)施例中的試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用GraphPad Prism 5. 0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析并繪制分析圖，組間數(shù)據(jù)差異用單因素方差分析(ANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并繼之以Tukey氏事后檢驗(yàn)法進(jìn)行檢驗(yàn)。1、實(shí)驗(yàn)材料烏骨雞黑色素提取物
烏骨雞黑色素的提取可以采用本領(lǐng)域已知的方法，本發(fā)明采用了雙酶水解法并結(jié)合堿液除蛋白來提取烏骨雞黑色素，其中，分別使用木瓜蛋白酶和風(fēng)味酶(也可使用復(fù)合蛋白酶)進(jìn)行第一步和第二步的酶解。具體操作步驟如下1).制備烏骨雞肉泥將市售的烏骨雞屠宰，去毛，去內(nèi)臟，去骨，保留骨膜，絞成肉泥，取肉泥IOOOg ；2).雙酶水解A.向步驟1)制得的烏骨雞肉泥中添加蒸餾水，蒸餾水與雞肉泥的重量比為 1 1，攪拌均勻，加熱至100°C并保溫15分鐘，然后冷卻至65°C，調(diào)節(jié)pH至5.5，加入終濃度為3.8%的木瓜蛋白酶(購(gòu)自廣西南寧龐博生物工程有限公司)，攪拌均勻，在65°C下消化2小時(shí)；B.將步驟A所得的混合物冷卻至55°C，調(diào)節(jié)pH至6. 0，然后，向所述混合物中加入終濃度為0. 6%的風(fēng)味酶(購(gòu)自廣西南寧龐博生物工程有限公司)，在55°C下消化6小時(shí)；C.通過將步驟B所得的混合物加熱至100°C并保溫30分鐘，對(duì)酶進(jìn)行滅活；靜置分層，收集上層黑色素懸浮層；在4000Xg條件下離心15分鐘，收集沉淀，得到烏骨雞黑色素粗提品；3).采用堿液除蛋白。以1 10 (按體積計(jì))的比例向步驟3)所得的粗提品中添加pH為10的NaOH溶液，攪拌均勻，加熱至60°C并保溫1. 5小時(shí)，然后，在4000 X g條件下離心5分鐘，收集沉淀；
重復(fù)該過程，共4次。使用蒸餾水洗滌上述方法所得的沉淀3次，真空干燥洗滌后的沉淀物，得到烏骨雞黑色素精提品。由上述步驟1)的IOOOg烏骨雞肉泥獲得了 Ig烏骨雞黑色素精提品。取上述烏骨雞黑色素提取方法制備的烏骨雞黑色素精提品，以0. 2g/ml的濃度將其懸浮于生理鹽水中備用。2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物8周齡C57/B6小鼠(購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司)，雌雄各半。使小鼠自由飲食飲水，12小時(shí)黑暗白晝節(jié)律，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)環(huán)境3天。實(shí)施例1 烏骨雞黑餼素提取物對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)抑郁癥模型的保護(hù)作用1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和篩選在給藥前，測(cè)試小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)測(cè)試值，如下進(jìn)行懸尾實(shí)驗(yàn)用粘性膠帶粘住小鼠尾部末端約2厘米的部位，將小鼠倒懸，固定于水平橫桿上，頭部距桌面約10厘米。在小鼠兩側(cè)用隔板隔開動(dòng)物視線，防止相互影響。使小鼠前后左右均無攀抓的地方，一段時(shí)間后小鼠因失望而活動(dòng)減少。記錄6分鐘內(nèi)后4分鐘的不動(dòng)時(shí)間。淘汰基礎(chǔ)值超出65到130 秒范圍的小鼠，選出20只小鼠作為合格動(dòng)物供實(shí)驗(yàn)用，隨機(jī)分為兩組，每組10只(其基礎(chǔ)測(cè)試值具體數(shù)據(jù)參見下表1)。其中，一組為空白對(duì)照組，每天1次給予200ul生理鹽水腹腔注射；一組為烏雞黑色素提取物組，每天1次給予30mg/Kg烏雞黑色素提取物腹腔注射，兩組均連續(xù)注射7天。表1 小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間基礎(chǔ)測(cè)試值(單位秒)
權(quán)利要求
1.烏骨雞黑色素提取物在制備防治抑郁癥的藥物中的用途，其中，所述烏骨雞黑色素提取物作為所述藥物的活性成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中，所述藥物還包含藥學(xué)上可接受的載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中，所述藥物的劑型包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、膏齊U、散劑、口服液以及注射劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中，所述烏骨雞黑色素提取物的提取方法包括如下步驟1).制備烏骨雞肉泥；2).雙酶水解采用木瓜蛋白酶和風(fēng)味酶消化步驟1)制得的烏骨雞肉泥；3).采用堿液除蛋白。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其中，步驟2)包括如下步驟A.向步驟1)制得的烏骨雞肉泥中添加重量比為1 1至1 3的蒸餾水，加熱至90°C 至100°C并保溫10分鐘至20分鐘，然后冷卻至60°C至70°C，調(diào)節(jié)pH為5. 0至6. 0，然后向其中加入終濃度為3. 0%至4. 0%的木瓜蛋白酶，在60°C至70°C條件下消化2小時(shí)至4小時(shí)；B.將步驟A所得的混合物冷卻至50°C至60°C，調(diào)節(jié)pH為5.5至6. 5，向所述混合物中加入終濃度為0. 4%至0. 7%的風(fēng)味酶，在50°C至60°C條件下消化5小時(shí)至7小時(shí)；C.將步驟B所得的混合物加熱至90°C至10(TC并保溫20分鐘至40分鐘；靜置分層， 收集上層黑色素懸浮層；在3500Xg至4500Xg條件下離心10分鐘至20分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其中，步驟3)的操作方法如下以1 8至1 15(按體積計(jì))的比例向所述步驟2)所得的物質(zhì)中添加pH為8至10 的NaOH溶液，加熱至55°C至75°C并保溫1小時(shí)至2小時(shí)，然后，在3500 X g至4500 X g條件下離心5分鐘至10分鐘，收集沉淀。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其中，步驟2)包括如下步驟A.向步驟1)制得的烏骨雞肉泥中添加重量比為1 1的蒸餾水，加熱至100°C并保溫 15分鐘，然后冷卻至65°C，調(diào)節(jié)pH至5. 5，然后向其中加入終濃度為3. 8%的木瓜蛋白酶， 在65°C下消化2小時(shí)；B.將步驟A所得的混合物冷卻至55°C，調(diào)節(jié)pH至6.0，加入終濃度為0. 6%的風(fēng)味酶， 在55°C下消化6小時(shí)；C.將步驟B所得的混合物加熱至100°C并保溫30分鐘；靜置分層，收集上層黑色素懸浮層；在4000 Xg條件下離心15分鐘。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其中，步驟3)的操作方法如下以1 10(按體積計(jì))的比例向所述步驟2)所得的物質(zhì)中添加pH為10的NaOH溶液， 加熱至60°C并保溫1. 5小時(shí)，然后，在4000 Xg條件下離心5分鐘，收集沉淀。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的用途，其中，將所述烏骨雞黑色素提取物懸浮于生理鹽水中使用。
全文摘要
本發(fā)明公開了烏骨雞黑色素提取物在制備防治抑郁癥的藥物中的用途，其中，所述烏骨雞黑色素提取物作為所述藥物的活性成分。本發(fā)明中烏骨雞黑色素提取物可通過雙酶水解法并結(jié)合堿液除蛋白來制備。根據(jù)本發(fā)明可知，烏骨雞黑色素提取物具有良好的抗抑郁作用，可用于制備防治抑郁癥的藥物。
文檔編號(hào)A61P25/24GK102462696SQ201010535778
公開日2012年5月23日 申請(qǐng)日期2010年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月3日
發(fā)明者李博, 賀毅 申請(qǐng)人:李博, 賀毅