專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種含有紅花黃色素b的復(fù)方制劑及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種由活性成分a):紅花黃色素B,和b):白藜蘆醇或白藜蘆醇苷組成的復(fù)方制劑及其在心腦血管中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：白黎蘆醇(Resveratrol)，化學(xué)名稱(chēng)為芪三酚，屬于多酚類(lèi)化合物。廣泛存在于葡萄、花生和多種藥用植物中，目前至少已經(jīng)在21個(gè)科、31個(gè)屬的72種植物中發(fā)現(xiàn)了白黎蘆醇。對(duì)白黎蘆醇生理功能的認(rèn)識(shí)源于WHO的一項(xiàng)流行病學(xué)調(diào)查，流行病學(xué)調(diào)査資料顯示，法國(guó)人血管疾病的發(fā)病率明顯低于其他國(guó)家，這與其紅葡萄酒的攝入量較高有關(guān)，進(jìn)一步研究證實(shí)，白黎蘆醇是紅葡萄酒中發(fā)揮心血管保護(hù)作用的主要物質(zhì)。白黎蘆醇具有廣泛的生物學(xué)活性，如抗癌、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗凝血、抗氧化、抗菌、免疫調(diào)節(jié)及神經(jīng)保護(hù)等。對(duì)心血管方面的作用，白黎蘆醇主要通過(guò)以下方面加于調(diào)節(jié)(1)減少缺血-再灌注心肌細(xì)胞凋亡，保護(hù)缺血性心肌細(xì)胞免收損傷；(2)減少低密度脂蛋白的氧化，阻斷氧化性低密度脂蛋白引起動(dòng)脈粥樣硬化病變?cè)缙跇?biāo)^中脂質(zhì)條紋的形成，降低人血清脂質(zhì)水平；(3)抑制血栓烷的形成，同時(shí)還可降低由二磷酸腺苷(ADP)、膠原和凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集率；(4)通過(guò)抑制巨噬細(xì)胞中LPS誘導(dǎo)的核因子-kB而減少胞質(zhì)一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的穩(wěn)定狀態(tài)的mRNA水平，以達(dá)到抗氧化作用。紅花黃色素B為紅花中的有效成分之一，對(duì)其深入的研究目前尚且較少，中國(guó)專(zhuān)利CN1765357A公開(kāi)了紅花黃色素B在心血管疾病方面的應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明公開(kāi)了一種由活性成分紅花黃色素B和選自白藜蘆醇或白藜蘆醇苷中的任一種組成的復(fù)方制劑。本發(fā)明中的復(fù)方制劑中，每一個(gè)最小單位制劑中所含紅花黃色素B的劑量為5-300mg，含白藜蘆醇或白藜蘆醇苷的劑量為5-300mg。本發(fā)明中的復(fù)方制劑中，每一個(gè)最小單位制劑中所含紅花黃色素B的劑量?jī)?yōu)選為10-200mg，含白藜蘆醇或白藜蘆醇苷的劑量為10-200mg。本發(fā)明中所提到的"最小單位制劑"是至每種制劑的最小分包裝，如制成膠囊劑是指一個(gè)膠囊，制成片劑是至一片片劑，制成水針是指一支水針，制成粉針是指一支粉針，制成滴丸是指一個(gè)滴丸，其它制劑諸如此類(lèi)推。研究中發(fā)現(xiàn)，將白藜蘆醇或白藜蘆醇苷與紅花黃色素B組合在一起，在治療心腦血管疾病方面具有很強(qiáng)的作用，其效價(jià)強(qiáng)于任何一種單一成分單獨(dú)使用。本發(fā)明復(fù)方制劑中除含有有效成分外，還含有藥學(xué)上可接受的其它輔料，如稀釋劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、潤(rùn)濕劑、助懸劑、乳化劑、防腐劑、助溶劑等。本發(fā)明活性成分所制成的制劑，可以是口服制劑，如口服固體制劑、口服液，也可以是非口服制劑，如注射劑，經(jīng)皮吸收制劑，經(jīng)直腸給藥制劑等。具體實(shí)施例以下從紅花黃色素B同,藜蘆醇或白藜蘆醇苷合用的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)明本發(fā)明復(fù)方在心血管方面的協(xié)同治療作用。1、對(duì)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎誘導(dǎo)大鼠急性心肌缺血的保護(hù)作用50只wistar大鼠，雌雄不限，體重220-250g，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為假手術(shù)組(A組)、對(duì)照組(B組)、紅花黃色素B10mg/kg組(C組)、白藜蘆醇或白藜戸醇苷組15mg/kg(D組)、紅花黃色素B6mg/kg+白藜蘆醇或白藜蘆醇苷9mg/kg組(E組)。大鼠用3%己戊巴比妥30mg/kg腹腔注射麻醉，仰臥位固定，以心電圖機(jī)記錄n導(dǎo)聯(lián)心電圖監(jiān)測(cè)心臟情況，分離一側(cè)股靜脈供給藥用。用血管鉗沿第4肋間，鈍性分離肋問(wèn)肌，開(kāi)胸，撐開(kāi)第4、5肋骨，剪開(kāi)心包膜，暴露心臟。將心臟擠出胸腔。在左心耳與肺動(dòng)脈圓錐之間找到與左冠狀動(dòng)脈伴行的大靜脈并使之充分暴露，在左心耳下方2mm處用3號(hào)絲線(xiàn)穿線(xiàn)，連同心大靜脈一齊結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支。結(jié)扎前于心大靜脈處放一小段細(xì)硅膠管，引線(xiàn)潤(rùn)滑。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈后迅速將心臟放人胸腔，輕擠胸腔排出胸腔氣體及殘留血液。胸部皮膚用血管鉗閉合胸腔,引線(xiàn)尾端留在胸外。穩(wěn)定10min(穩(wěn)定后心電圖不正常者棄去)，缺血10min后從股靜脈緩慢注射給藥，20min后剪斷結(jié)扎線(xiàn)，使前降支再灌注30min。再灌后腹主動(dòng)脈取血，離心取血清，以自動(dòng)生化儀測(cè)定乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸酶活性(CPK)。見(jiàn)表l。結(jié)扎3h后立即取下心臟稱(chēng)重，每組取5只冷凍。在冠脈結(jié)扎線(xiàn)下，平行于冠狀溝，將心室橫切成0.1cm厚的心肌片，生理鹽水沖洗后，置于0.05%氯化硝基四氮唑藍(lán)液(N—BT)37t:恒溫水浴中染色30min，染色過(guò)程中不時(shí)振搖染色液，使之與心肌充分接觸，染色后立即用水沖去多余染料。正常心肌染為暗藍(lán)色，梗死區(qū)不著色。減去梗死心肌稱(chēng)重計(jì)算梗死區(qū)重占全心重的百分比。每組中的另5只將心肌希^成10%組織勻漿，3000r/min離心10min后取上清液-70°(:保存，待測(cè)丙二醛(MDA)和超氧化物岐化酶(SOD)。測(cè)定時(shí)嚴(yán)格按照各試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。表l對(duì)心肌缺血大鼠CPK和LDH的影響G±s)組別劑量(mg/kg)CPK(U/mL)LDH(U/L)A—30.47±7.211617.15±187.64B——54.27±8.076781.47±218.21C1037.38±7.26*5475.39±247.65*D1536.20±7.58*5519.43±281.17*E6+931.47±8.13*5219.671257.37=*=與對(duì)照組相比，*P<0.01從上表中可知，心肌缺血組的CPK和LDH水平明顯高于假手術(shù)組，各治療組的CPK和LDH水平低于對(duì)照組，差別具有顯著意義(PO.01),復(fù)方組與單一成分組相比，在劑量分別低于各自單獨(dú)治療的情況下，其CPK和LDH水平較單一成分組要低，說(shuō)明兩成分能協(xié)調(diào)降低CPK和LDH水平。表2對(duì)心肌缺血大鼠心肌梗死面積的影響(；±s)組別劑量(mg/kg)梗死百分比(°/(0A—0B一41.27±4.58C1034.56±3.47*D1530.24士3，E6+927.59±3.26*與對(duì)照組相比，*P<0.05研究結(jié)果顯示，用TUNEL法染色的陽(yáng)性心肌細(xì)胞具有形態(tài)變圓或不規(guī)則，與周?chē)M織脫離、核固縮、染色質(zhì)濃聚等典型的凋亡細(xì)胞的形態(tài)特征，主要位于心肌梗死區(qū)與非梗死區(qū)交界處，而在心肌梗死區(qū)和非梗死區(qū)僅見(jiàn)極少數(shù)凋亡細(xì)胞。與心肌缺血對(duì)照組相比，預(yù)先給予治療藥物后，凋亡指數(shù)有不同程度的降低，差異有顯著性(P0.05)，其中尤為明顯的是復(fù)方組。表3對(duì)心肌缺血大鼠SOD、MDA活性的影響(；±s)與假手術(shù)組相比，#P<0.01;與模型組相比，*P<0.05，**P<0.01大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后，模型組大鼠血清SOD含量顯著降低，MDA含量顯著升高，與假手術(shù)組相比，具有顯著差異(PO.Ol)，預(yù)先給予藥物處理后，其血清SOD含量較模型組升高，差別有顯著性(P<0.05)，復(fù)方組差異更為明顯(PO.Ol)，血mg/kgSOD(imol/L固AU/mL一268.5±40.3—142.6±37.5#10217.4±39.7*15228.3±41.3*6+9260.8±41.2**5.37±0.5110.14±1.04#8.62±0.81*8.13±0.57*7.06±0.54*且自ABcDE清MDA含量較模型組降低，各組差別均有顯著性。2、對(duì)局灶性永久性腦缺血損傷的保護(hù)作用Wistar大鼠24只，雌雄不限。照文獻(xiàn)(TamuraA，GrahamDI，McCullochJ，etal.Focalcerebralischaemiaintherat;1.Descriptionoftechniqueandearlyneuropathologicalconsequencesfollowingmiddlecerebralarteryocclusion[J].JCerebBloodFlowMetab,1981,1(1)53-60)方法進(jìn)行造局灶性永久腦缺血模型。大鼠以12%水合氯醛麻醉(350mg/kg，ip)，側(cè)臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，沿右外耳道與右眼外眥連線(xiàn)的中點(diǎn)垂直于連線(xiàn)切開(kāi)皮膚約2cm，然后在手術(shù)顯微鏡下沿顳肌中線(xiàn)依次切斷顳肌和咬肌，將這些肌肉向兩側(cè)分開(kāi)，暴露顴骨弓，操作時(shí)注意保護(hù)面神經(jīng)和腮腺。除去顴骨弓，并沿顱骨剪開(kāi)筋膜，暴露出顳前窩。在顴骨和鱗狀骨前聯(lián)合的前下方約2mm處鉆一直徑2mm的顱窗，透過(guò)硬腦膜就可見(jiàn)一條較直且少分支的小血管，即為中動(dòng)脈(MCA)。MCA幾乎垂直經(jīng)過(guò)嗅束上行。用電凝電灼凝固嗅束內(nèi)lmm至大腦下靜脈(inferiorcerebralvein)之間的MCA。電凝時(shí)，用細(xì)分針輕挑起與嗅束交界處的MCA，盡量減少血管內(nèi)血量，避免電凝不完全引起的出血，同時(shí)用濕棉球保護(hù)周?chē)M織避免燒傷。阻斷MCA后，用小塊肌肉組織輕敷于顱窗上，達(dá)到止血作用，術(shù)后同籠詞養(yǎng)。以上過(guò)程均在恒定室溫進(jìn)行。將造好膜的大鼠隨機(jī)分為4組，分別為陰性對(duì)照組(給予給藥組等同體積的生理鹽水)，紅花黃色素B10mg/kg組、白藜蘆醇15mg/kg、紅花黃色素B6mg/kg+白黎蘆醇9mg/kg組，尾靜脈注射給藥。結(jié)果見(jiàn)表4表4對(duì)局灶性永久性腦缺血損傷大鼠的保護(hù)作用(；土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>大鼠局灶性腦缺血給予藥物治療后，與對(duì)照組相比，腦壞死率明顯減少(PO.05),其中復(fù)方組在較低劑量即可達(dá)到白藜蘆醇或紅花黃色素B單獨(dú)治療的效果。3、對(duì)大鼠全腦缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用Wistar大鼠24只，雌雄不限，找文獻(xiàn)(徐叔云，卞如濂，等.藥理實(shí)驗(yàn)方法[M]，北京人民衛(wèi)生出版社，1991,945-947.)采用四動(dòng)脈閉塞法建立模型。大鼠用12%水合氯醛麻醉，在枕后暴露第一頸椎橫突孔，用電凝電灼凝固雙側(cè)椎動(dòng)脈，在顱骨上鉆孔安置皮層腦電極，用牙托粉固定。然后在頸部作一切口分離雙側(cè)頸動(dòng)脈，用l號(hào)絲線(xiàn)縫合傷口。術(shù)后24h、大鼠清醒時(shí)，用帶硅膠管的無(wú)損傷動(dòng)脈夾將雙側(cè)頸動(dòng)脈夾閉，即造成4根動(dòng)脈閉塞引起全腦缺血，lh后松開(kāi)動(dòng)脈夾。缺血期與再灌期時(shí)間均為lh。用生理記錄儀記錄缺血后腦電圖消欠時(shí)間和恢復(fù)再灌注后腦電圖恢復(fù)時(shí)間。凡缺血期內(nèi)腦電圖未消失或未出現(xiàn)嚴(yán)重抑制者一律剔除。對(duì)造模成功的24只大鼠，分組，分組情況及給藥方式同2項(xiàng)。給藥時(shí)間在缺血前l(fā)min。評(píng)價(jià)指標(biāo)及相應(yīng)數(shù)據(jù)見(jiàn)表5表5對(duì)大鼠全腦缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用(；土s)組別劑量mg/kg腦電圖消失時(shí)間/s腦電圖恢復(fù)時(shí)間/s腦含水量/%對(duì)照組(生理鹽水)紅花黃色素B白黎戸醇紅花黃素素B+白藜蘆醇10156+9142±85310±127*267±103*321±131*621±227120土57**143±62**103±51**肌1±1.078.4±0.6*78.7土0.5*78.1±0.6*與對(duì)照組相比，*P<0.05，**P<0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各給藥組與生理鹽水組相比，均能延長(zhǎng)全腦缺血-再灌注大鼠缺血后腦電圖消失時(shí)間，明顯縮短腦電圖恢復(fù)時(shí)間，并能明顯改善大鼠腦水腫情況(P0.05，PO.Ol)，但復(fù)方組較單一成分組作用效果更為明顯。下文提到的是本發(fā)明制劑配方說(shuō)明性而非限定性實(shí)例1)、白黎蘆醇5g紅花黃色素B300g2)、白藜蘆醇300g紅花黃色素B5g3)、白藜蘆醇10g紅花黃色素B200g4)、白藜蘆醇200g紅花黃色素B10g5)、白藜蘆醇100g紅花黃色素B150g6)、白藜蘆醇苷150g紅花黃色素B100g7)、白藜蘆醇苷150g紅花黃色素B150g8)、白藜蘆醇50g紅花黃色素B250g淀粉700g9)、白黎蘆醇10g紅花黃色素B15g甘露醇400g上述組合物通過(guò)適宜的制劑工藝，加上一些適宜的藥用輔料，可制成口服、非腸道、直腸或透皮給藥的固體、半固體、液體、半液體、粉末、顆?；蛑|(zhì)體形式。上述處方為iooo個(gè)制劑單位的原料藥處方。權(quán)利要求1、一種含有紅花黃色素B的復(fù)方制劑，其特征是所述復(fù)方制劑由活性成分a)紅花黃色素B，和；b)白藜蘆醇或白藜蘆醇苷；組成。2、如權(quán)利要求1所述的復(fù)方制劑，其中每一個(gè)最小單位制劑中含紅花黃色素B劑量為5-300mg，含白藜蘆醇或白藜蘆醇苷劑量為5-300mg。3、如權(quán)利要求2所述的復(fù)方制劑，其中每一個(gè)最小單位制劑中含紅花黃色素B劑量為10-200mg，含白藜蘆醇或白藜蘆醇苷劑量?jī)?yōu)選為10-200mg。4、如權(quán)利要求1、2或3所述的復(fù)方制劑在制備具有預(yù)防或治療心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及一種由紅花黃色素B和白藜蘆醇或白藜蘆醇苷組成的復(fù)方制劑，每個(gè)最小單位制劑中，含紅花紅色素B為5-300mg，含白藜蘆醇或白藜蘆醇苷為5-300mg。本發(fā)明復(fù)方制劑具有保護(hù)缺血性心肌細(xì)胞和缺血性腦細(xì)胞免受損傷的作用，可用以制備具有預(yù)防和治療心腦血管疾病的藥物。文檔編號(hào)A61K31/045GK101352430SQ20071011945公開(kāi)日2009年1月28日申請(qǐng)日期2007年7月25日優(yōu)先權(quán)日2007年7月25日發(fā)明者熊?chē)?guó)裕申請(qǐng)人:北京星昊醫(yī)藥股份有限公司