專(zhuān)利名稱(chēng)：烏金片在制備抑制pc-3細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中成藥的新用途，尤其涉及烏金片在制備抑制PC-3細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
前列腺癌就是發(fā)生于男性前列腺組織中的惡性腫瘤，是前列腺腺泡細(xì)胞異常無(wú)序生長(zhǎng)的結(jié)果。前列腺癌的發(fā)病率具有明顯的地理和種族差異。在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家和地區(qū)，它是男性最常見(jiàn)的惡性腫瘤，其死亡率居各種癌癥的第二位；在亞洲，其發(fā)病率低于西方國(guó) 家，但近年來(lái)呈迅速上升趨勢(shì)。烏金片是云南永孜堂制藥有限公司的獨(dú)家產(chǎn)品，目前還沒(méi)有其抑制前列腺癌(PC-3)細(xì)胞增殖的文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于提供烏金片在制備抑制PC-3細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。技術(shù)方案烏金片在制備抑制PC-3細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。烏金片處方為蒲黃、百草霜、益母草、熟地黃、艾葉(炭)、三棱、延胡索、香附、白芍、補(bǔ)骨脂、吳茱萸、川芎、莪術(shù)、木香、當(dāng)歸、小茴香油，調(diào)經(jīng)化瘀，用于氣郁結(jié)滯，胸脅刺痛，產(chǎn)后瘀血，小腹疼痛，五心煩熱，面黃肌瘦，規(guī)格為每片O. 6g，口服，一次4片，一日2次，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其能抑制PC-3細(xì)胞增殖。有益效果烏金片抑制PC-3細(xì)胞增殖，效果良好。
具體實(shí)施例方式烏金片抑制PC-3細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料I實(shí)驗(yàn)材料I. I實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株前列腺癌(PC-3)，來(lái)自本公司實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫(kù)，DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。I. 2實(shí)驗(yàn)藥物研究藥物烏金片，云南永孜堂制藥有限公司，批號(hào)20110423藥液儲(chǔ)液稱(chēng)取IOOmg烏金片粉碎，溶于5ml無(wú)水乙醇中，O. 2 μ m濾器過(guò)濾，500 μ Idoff管分裝，-20°C存儲(chǔ)，同時(shí)O. 2 μ m濾器過(guò)濾無(wú)水乙醇以備對(duì)照組之用。I. 3實(shí)驗(yàn)試劑DMEM (GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061 Lot. No. 758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419) ；NaHC03 (上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat.No. 11810-033Lot. No. 1088387) ;Trypsin (AMRESC0 公司批號(hào)2010/04) ；EDTA (AMRESCO公司批號(hào)2009/10) ；Penicillin G Sodium Salt (AMRESCO 公司批號(hào)2010242)；Streptomycin Sulfate (AMRESCO公司批號(hào)2010382);無(wú)水乙醇(南京化學(xué)試劑有限公司批號(hào):080310182) ;MTT(Biosharp 批號(hào)0793) ;PBS (實(shí)驗(yàn)室自配)；I. 4實(shí)驗(yàn)器材萊卡倒置顯微鏡(德國(guó)Leica型號(hào)DM1L);可見(jiàn)-紫外光微孔板檢測(cè)儀(美國(guó)MD公司型號(hào)SPECTRAMAX 190) ;C02培養(yǎng)箱(FORMA型號(hào)3111);超凈臺(tái)(蘇凈集團(tuán)安泰公司制造型號(hào)SW-CJ-ZFD);純水儀(美國(guó)Spring公司型號(hào)S/N 020579);精密移液器(法國(guó)吉爾森公司型號(hào)P2);電子天平(德國(guó)賽多利斯有限公司型號(hào)BT323S);全自動(dòng)高壓滅菌鍋(日本SANK)公司型號(hào)MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型號(hào)DHG9123A);冰箱(西門(mén)子公司型號(hào)KG18V21TI);液氮罐(CBS型號(hào)2001);低速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠型號(hào)ΚΑ-1000) ;0. 2μπι濾器(MILLIP0RE型號(hào)SLGP033RB) ;10cm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。2實(shí)驗(yàn)方法
I) PC-3細(xì)胞用DMEM+10%FBS于37 °C、5%C02進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)(IOcm培養(yǎng)皿)，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml O. 25%胰蛋白酶-O. 049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，IOOOrpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X 104個(gè)/ml。2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180 μ 1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37 °C，5%C02 )常規(guī)培養(yǎng)。3)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，一般長(zhǎng)至50%_70%，加入烏金片溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 O. 5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490nm處測(cè)量各孔的吸光值。6)同時(shí)設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液)，對(duì)照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。7)結(jié)果以藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率表示細(xì)胞增值抑制率(％)=(對(duì)照孔OD值-給藥孔OD值)/對(duì)照孔OD值X 100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。3統(tǒng)計(jì)處理采用Microsoft Excel 2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以mean+ S. D.表不。4實(shí)驗(yàn)結(jié)果MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí)，對(duì)PC-3細(xì)胞增殖抑制有差異(p〈0. 05)，劑量在10mg/ml時(shí)該差異具有顯著性(P〈0. 01)，當(dāng)劑量達(dá)到15-20mg/ml時(shí)有極顯著性差異(Ρ〈0· 001)。表I烏金片對(duì)PC-3細(xì)胞增殖抑制影響研究(XfSD)纖 11藥狗濃μ): (mg.iiil >|!plvri
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.I2 ■!；'.. H^ ty.注與對(duì)照組比較，*Ρ〈0·01 ;#Ρ〈0· 0015實(shí)驗(yàn)結(jié)論
烏金片可以抑制PC-3細(xì)胞增殖，減少PC-3細(xì)胞的細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)目，該作用呈時(shí)間和劑量依賴(lài)性。
權(quán)利要求
1.烏金片在制備抑制PC-3細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了烏金片在制備抑制PC-3細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，烏金片處方為蒲黃、百草霜、益母草、熟地黃、艾葉(炭)、三棱、延胡索、香附、白芍、補(bǔ)骨脂、吳茱萸、川芎、莪術(shù)、木香、當(dāng)歸、小茴香油，調(diào)經(jīng)化瘀，用于氣郁結(jié)滯，胸脅刺痛，產(chǎn)后瘀血，小腹疼痛，五心煩熱，面黃肌瘦，規(guī)格為每片0.6g，口服，一次4片，一日2次，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其能抑制PC-3細(xì)胞增殖。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102824614SQ201210351540
公開(kāi)日2012年12月19日 申請(qǐng)日期2012年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月20日
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