專利名稱：治療性蛋白抑制劑綜合癥的cd154阻斷治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明總的涉及抑制不需要的免疫反應(yīng)、具體地抑制逆適應(yīng)性T-淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。本發(fā)明具體地涉及預(yù)防、治療、抑制或逆轉(zhuǎn)對外源施用蛋白或其它生物治療試劑的免疫學(xué)抑制。
背景技術(shù)：
血友病A是X連鎖的遺傳缺陷疾病，它影響著每10,000生命中的一個或兩個男性個體。患血友病A的病人在內(nèi)源凝血因子VIII(FVIII)中有部分或完全的功能缺陷，并且必須接受純化或重組FVIII替代治療。Lusher等(1993)，328 N.Engl.Med.453-459。15％患血友病A的病人對其FVIII替代治療發(fā)生高效價抗體反應(yīng)(即＞10BU/mL)。這些個體稱為“高反應(yīng)者”(McMillan等(1988)，71血液344-348。稱為FVIII抑制劑的這些抗體通過與施用的內(nèi)源FVIII結(jié)合阻斷了FVIII替代治療試劑的功能(生物活性)。此逆適應(yīng)性體液免疫反應(yīng)使得高反應(yīng)者中流血癥狀的治療成為難題。較輕的流血癥狀(如hamarthroses)常常用活化的凝血酶原復(fù)合物濃縮物(如Autoplex或FEIBA，F(xiàn)VIII抑制劑阻斷活性)成功地得到治療，但嚴(yán)重流血難以用這些藥劑控制[Brettler(1996)，9臨床血液學(xué)319-329]。大多數(shù)高反應(yīng)者在接受隨后FVIII輸注前有低水平的FVIII抑制抗體，F(xiàn)VIII輸注刺激(加強(qiáng))阻斷抗體的產(chǎn)生。因此，在高反應(yīng)者病人中抑制抗體的再誘導(dǎo)是可預(yù)防的[Brettler(1996)，9臨床血液學(xué)319-329]。用FVIII預(yù)防已證明減少了血友病人中關(guān)節(jié)內(nèi)出血和慢性關(guān)節(jié)病的得病幾率[Liesner等(1996)Br.J.Haematol.92，973-978。然而，因?yàn)楦叻磻?yīng)者中FVIII特異的體液免疫反應(yīng)，這些個體不能接受使用FVIII的預(yù)防治療。
對FVIII有可誘導(dǎo)的、強(qiáng)有力的免疫反應(yīng)的高反應(yīng)者常常在治療方案中用非常高劑量的FVIII常規(guī)輸注治療，此治療方案設(shè)計以誘導(dǎo)對外源FVIII治療的耐受性[Brettler(1996)，9臨床血液學(xué)319-329]。在某些病例中，將免疫調(diào)節(jié)劑[糖皮質(zhì)激素、環(huán)磷酰胺、靜脈內(nèi)免疫球蛋白(IVIg)]加到耐受性治療方案中。耐受性治療在50-80％高反應(yīng)者個體中有效。Mariani等(1994)，72 Thromb.Haemostasis 155-158。每個病人這樣的治療費(fèi)用為200,000美元到將近一百萬美元。因?yàn)樵谀褪苄哉T導(dǎo)過程(常持續(xù)3-8個月)中FVIII輸注在高反應(yīng)者中誘導(dǎo)非常高水平的抑制劑，所以這些個體如果的確有流血也不能用FVIII治療[Bretter(1996)，9臨床血液學(xué)319-329]。
成功的耐受性誘導(dǎo)之后，病人常常維持預(yù)防性FVIII輸注每周二至三次[Bretter(1996)，9臨床血液學(xué)319-329]。用這些方法誘導(dǎo)耐受性的機(jī)理仍不清楚，但是可能涉及抗獨(dú)特型抗體的誘導(dǎo)(Gilles等(1996)97臨床研究雜志1382-1388)或者產(chǎn)生FVIII抑制抗體的B細(xì)胞克隆的直接抑制。另外，IVIg制品含有針對FVIII抑制劑的抗獨(dú)特型抗體，這可以解釋在某些高反應(yīng)者中此治療的效力[Sultan等(1991)，91美國醫(yī)學(xué)雜志5A-35S-5A-39S)]。在必須使用FVIII治療流血的非常嚴(yán)重和威脅生命的病例中，可以通過在抗Ig或蛋白A柱上進(jìn)行體外免疫吸附來除去FVIII抑制劑[Knobl等(1995)，74 Thromb.Haemostasis 1035-1038；Gjorstrup等(1991)，61 Vox Sang 244-250]。這些方法耗費(fèi)時間并且導(dǎo)致血清免疫球蛋白(Ig)總水平50％-75％的降低[Knobl等(1995)，74Thromb.Haemostasis 1035-1038]，由此潛在增加了感染的危險。
蛋白替代治療的相似并發(fā)癥也在其它天先性或獲得性蛋白缺陷病包括其它凝血因子、血或血漿蛋白、生長因子等缺陷的治療中遇到。而且，類似并發(fā)癥也已在其它臨床治療中遇到，例如在治療上施用內(nèi)源稀少或隔離的蛋白的重組合成對應(yīng)物時就會遇到。例如，類似并發(fā)癥已在涉及重組細(xì)胞因子、淋巴因子或酶的施用的治療中遇到。一個例子是施用促血細(xì)胞生成素(EPO)治療盆血。另一例子是施用干擾素β(IFNβ)治療多發(fā)性硬化(MS)。還有一例子是施用人生長激素用于治療以加速生長。在治療上施用微生物蛋白時，例如當(dāng)施用鏈激酶治療中風(fēng)或其它類型血管阻塞時，也遇到類似并發(fā)癥。
因此，需要改進(jìn)的或更有效的用于最小化或抑制與外源施用蛋白結(jié)合或阻斷外源施用蛋白治療活性的抑制抗體發(fā)生的免疫抑制或免疫調(diào)節(jié)治療。特別地，需要無須泛T細(xì)胞免疫抑制的治療法，即不使受治療者對惡性腫瘤或機(jī)會性感染易感的治療法。更應(yīng)指出的是，需要逆轉(zhuǎn)或抑制阻止對需要其的病人施予所需蛋白治療的抑制劑綜合癥。
發(fā)明概述本發(fā)明的一個目的是提供減輕逆適應(yīng)性T細(xì)胞反應(yīng)而不需要泛T細(xì)胞免疫抑制的免疫調(diào)節(jié)劑。另一目的是提供減輕對所需外源蛋白治療的逆適應(yīng)性體液免疫反應(yīng)嚴(yán)重性的免疫調(diào)節(jié)劑。另一目的是提供延遲對所需外源蛋白治療的逆適應(yīng)性體液免疫反應(yīng)發(fā)生的免疫調(diào)節(jié)劑。另一目的是提供抑制或逆轉(zhuǎn)對所需外源蛋白治療的逆適應(yīng)性體液免疫反應(yīng)的免疫調(diào)節(jié)劑。進(jìn)一步的目的是提供阻斷共刺激信號、特別是免疫球蛋白合成的共刺激信號向活化T細(xì)胞傳遞的免疫調(diào)節(jié)劑。具體的目的是提供CD40:CD154結(jié)合阻斷劑如CD154阻斷劑用于治療，尤其是用于減輕、延緩對所需外源蛋白治療試劑如FVIII的逆適應(yīng)性抑制抗體反應(yīng)的發(fā)生或逆轉(zhuǎn)其的治療。
本發(fā)明在于發(fā)現(xiàn)使用CD40:CD154結(jié)合阻斷劑如CD154阻斷劑可減輕、減弱、抑制、防止、延緩或逆轉(zhuǎn)對蛋白抗原的逆適應(yīng)性抑制抗體反應(yīng)而無須廣泛抑制受治療者的免疫系統(tǒng)。更精確地，本發(fā)明在于發(fā)現(xiàn)使用CD154阻斷劑可減輕、減弱、抑制、防止、延緩或逆轉(zhuǎn)不利的抑制體液免疫，此免疫阻斷施用給個體以替代或改進(jìn)內(nèi)源缺陷型蛋白，例如凝血因子如FVIII的蛋白治療的生物活性。
因此本發(fā)明提供用于外源蛋白抑制劑綜合癥的免疫調(diào)節(jié)治療的方法和組合物。第一種方法減輕或減弱外源蛋白抑制劑綜合癥的嚴(yán)重性。第二種方法抑制綜合癥的不利影響。第三種方法防止綜合癥的發(fā)生。第四種方法延遲綜合癥的發(fā)生。第五種方法抑制綜合癥的發(fā)展。第六種方法逆轉(zhuǎn)綜合癥。所有前面的方法包括用CD40:CD154結(jié)合阻斷劑[是指任何阻斷CD40配體(即CD40L，也稱為CD154或5c8抗原，并且有時在本領(lǐng)域中稱為gp39)與其反受治療者或相關(guān)受治療者(本文為CD40)結(jié)合的試劑治療移植受治療者。優(yōu)選地，結(jié)合阻斷劑是CD154(CD40L)阻斷劑，即任何與CD154結(jié)合并阻止或干擾其與反受治療者(例如CD40)結(jié)合的試劑]治療患外源蛋白抑制劑綜合癥(是指逆適應(yīng)性體液免疫反應(yīng))或有此危險的受治療者。CD154阻斷劑的實(shí)例是單克隆抗體(MAb)，具體地是在美國專利5,474,771中公開的具有5c8 MAb抗原特異性結(jié)合特征的單克隆抗體，在此引用該文獻(xiàn)作為參考。
如上所述，可以實(shí)施本發(fā)明以減輕或減弱針對用于替代或改進(jìn)缺陷性天然(內(nèi)源)蛋白的生物活性的外源蛋白產(chǎn)生的綜合癥。也可以實(shí)施本發(fā)明以減輕或減弱針對其它外源蛋白，包括任何用于治療目的外源蛋白的抑制劑綜合癥。例如，可以實(shí)施本發(fā)明以防止、逆轉(zhuǎn)或抑制針對任何重組合成蛋白治療、尤其具有與天然功能性稀少蛋白或天然隔離于特定身體結(jié)構(gòu)或區(qū)室中如骨髓、淋巴結(jié)或中央神經(jīng)系統(tǒng)的天然蛋白的抑制反應(yīng)。相似地，可以實(shí)施本發(fā)明以防止、逆轉(zhuǎn)或抑制對瞬間表達(dá)或僅對特定環(huán)境刺激反應(yīng)或在發(fā)育過程的特定點(diǎn)表達(dá)的天然蛋白重組形式的抑制反應(yīng)。因此，可以實(shí)施本發(fā)明以減輕或減弱針對生長激素、創(chuàng)傷愈合因子(如組織再生因子或分化因子)、細(xì)胞因子或淋巴因子(如集落刺激因子、干細(xì)胞因子、干擾素或白細(xì)胞介素)、酶(如葡糖腦苷脂酶)、凝血因子(如凝血酶、凝血酶原、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI或因子XII)或其它血漿成分(如白蛋白、組織血纖維蛋白溶酶原激活劑)的抑制劑反應(yīng)。另外，可以實(shí)施本發(fā)明以減輕或減弱針對外源蛋白、尤其用于治療目的(如血管阻塞的治療)的細(xì)菌蛋白(如鏈激酶)的抑制劑反應(yīng)。本發(fā)明實(shí)施針對的目標(biāo)是人。具體地，可以實(shí)施本發(fā)明以減輕或減弱血友病人中的凝血因子抑制劑綜合癥。
本發(fā)明前述和其它目的、特征和優(yōu)勢以及本發(fā)明本身將從下面優(yōu)選實(shí)施方案的描述中得到更充分的理解。
發(fā)明詳述
T細(xì)胞活化和依賴其的免疫學(xué)過程既需要T細(xì)胞受治療者(TCR)介導(dǎo)的信號又需要同時傳送的共刺激信號。重要的共刺激信號通過CD40與抗原呈遞細(xì)胞的結(jié)合傳遞，例如B細(xì)胞通過T細(xì)胞上的CD40L(CD154)傳遞。人類CD40是成熟B細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞和活化內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)的50kD細(xì)胞表面蛋白。CD40屬于與編程性細(xì)胞死亡有關(guān)的一類受治療者，包括Fas/CD95和腫瘤壞死因子(TNF)α受治療者。人CD154(CD40L)是具有與瞬間表達(dá)的TNFα的同源性的32KD II型膜糖蛋白，主要在活化T細(xì)胞上瞬間表達(dá)。已經(jīng)證明CD40:CD154結(jié)合是所有T細(xì)胞依賴性抗體反應(yīng)所必需的。特別地，CD40:CD154結(jié)合提供抗編程性細(xì)胞死亡和/或淋巴因子刺激的信號。
在發(fā)現(xiàn)人類X-連鎖的hyper-IgM綜合癥(X-HIGM)是由功能性CD154的遺傳缺陷所導(dǎo)致的表型時，CD40:CD154結(jié)合在促進(jìn)T細(xì)胞依賴性生物學(xué)反應(yīng)方面的重要性得到更充分地理解。患者具有正常或高IgM水平，但不能產(chǎn)生IgG，IgA或IgE抗體，并且患有復(fù)發(fā)的、有時嚴(yán)重的細(xì)菌及寄生蟲感染以及有增加的淋巴瘤和腹部癌癥的得病幾率。類似表型在非人類動物中觀察到，其導(dǎo)致編碼CD154的基因成為零合基因(敲除動物)。CD154無效合子的B細(xì)胞可以在無CD40:CD154結(jié)合時產(chǎn)生IgM，但不能進(jìn)行同型轉(zhuǎn)換或在親和成熟后正常存活。在組織學(xué)上，淋巴結(jié)生發(fā)中心不能正常發(fā)育，并且記憶B細(xì)胞缺乏或發(fā)育不足。在功能上，這些缺陷導(dǎo)致次級(成熟)抗體反應(yīng)的嚴(yán)重減少或缺失。也觀察到細(xì)胞免疫性的缺陷，表現(xiàn)為增加的細(xì)菌和寄生蟲的感染幾率。許多細(xì)胞介導(dǎo)的缺陷可通過施用IL-12或IFN-γ加以逆轉(zhuǎn)。這些觀察結(jié)果證實(shí)了這樣的觀點(diǎn)，即正常的CD40:CD154結(jié)合促進(jìn)I型T-輔助細(xì)胞免疫學(xué)反應(yīng)的形成。
用蛋白抗原阻斷免疫過程中的CD40:CD154相互作用可以特異地阻斷小鼠中對抗原的抗體反應(yīng)[Foy等(1993)，178實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志1567-1576]。例如，抗CD154抗體可以在膠原蛋白誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎中阻斷抗膠原抗體的誘導(dǎo)[Durie等(1993)，261科學(xué)1328-1330]?？笴D154抗體可以降低患自發(fā)狼瘡的小鼠中抗dsDNA和抗核小體的自身抗體[Mohan等(1995)，154免疫學(xué)雜志1470-1480]。另外，抗CD154抗體可以減輕患實(shí)驗(yàn)性自身免疫腦脊髓炎(EAE)的小鼠中(MS模型)的癥狀。也有報道在移植-宿主疾病、氯化汞誘導(dǎo)的腎小球性腎炎和炎性腸疾病的嚙齒動物模型中得到相似結(jié)果。
因此，CD40:CD154阻斷可以提供強(qiáng)有力的治療以減輕或減緩不需要的體液免疫反應(yīng)，具體地自身免疫疾病環(huán)境中的免疫反應(yīng)或者實(shí)際上靶抗原是具治療價值的蛋白而其價值被逆適應(yīng)性免疫反應(yīng)阻礙的情況。然而，盡管有大量有希望的結(jié)果的報道，但是在誘導(dǎo)的逆適應(yīng)性免疫疾病(如自身免疫)嚙齒動物模型中進(jìn)行的研究與在實(shí)際疾病環(huán)境或尤其在大型動物臨床前模型系統(tǒng)(如靈長類)中測試的結(jié)果很少相關(guān)。
在此公開的是在認(rèn)為可預(yù)測治療外源蛋白抑制劑綜合癥的治療效力的臨床前模型中估評優(yōu)選的CD154阻斷劑即具有MAb 5c8抗原特異性結(jié)合特性的人化MAb(Lederman等，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志1751091-1101，1992)的效應(yīng)的方法。具體地，本模型包括減輕或減弱對凝血因子(如FVIII)和淋巴因子(如IFNβ)特異的生物抑制體液反應(yīng)的CD154阻斷治療。這些模型可以適于通過常規(guī)操作以用于評估CD154阻斷治療減輕或減弱針對任何具有治療價值的蛋白產(chǎn)生的抑制體液免疫的效力。
下面的討論描述并且舉例說明可以實(shí)施本發(fā)明以及提供原理上證據(jù)研究結(jié)果的各種內(nèi)容和條件，包括本發(fā)明的特定實(shí)施方案。
受治療者本發(fā)明可用于治療或預(yù)防需要或正在接受蛋白替代治療，實(shí)際上任何蛋白治療的哺乳動物。因此，受治療者患外源蛋白抑制劑綜合癥或有發(fā)生外源蛋白抑制劑綜合癥的危險。例如，用外源FVIII治療的血友病人正處于變?yōu)椤案叻磻?yīng)者”的高度危險之中，之后FVIII失去了其預(yù)期的抑制流血癥狀的效應(yīng)。因此，本發(fā)明特別適用于血友病人。測定血友病人是否已發(fā)生針對治療性施用的FVIII的抑制反應(yīng)和/或變?yōu)楦叻磻?yīng)者的方法眾所周知。見例如血液學(xué)臨床和實(shí)驗(yàn)實(shí)踐，第二卷，Bick編，Mosby-Year Book，Inc.，Publ.(1993)，1544-1548頁。優(yōu)選地，受治療的哺乳動物是靈長類動物，更優(yōu)選地高等靈長類動物，最優(yōu)選地人類。在其它實(shí)施方案中，受治療者可以是患外源蛋白抑制劑綜合癥或有發(fā)生外源蛋白抑制劑綜合癥危險的另一哺乳動物，特別是具有商業(yè)重要性的哺乳動物或?qū)櫸锘蚱渌袃r值動物如瀕危物種的成員。因此，受治療者也包括但不限于綿羊、馬、牛、山羊、豬、狗、貓、兔、豚鼠、倉鼠、沙鼠、大鼠和小鼠。
CD40:CD154結(jié)合阻斷劑的實(shí)例用于實(shí)施本發(fā)明的治療化合物包括任何阻斷細(xì)胞表面CD40(例如位于B細(xì)胞上)與例如活化T細(xì)胞表面上表達(dá)的CD40L(CD154)相互作用的化合物。應(yīng)該特別注意的CD40:CD154結(jié)合阻斷劑化合物如CD154阻斷劑包括單克隆抗體和多克隆抗體(MAbs)以及抗體衍生物如嵌合分子、人化分子、具有降低效應(yīng)物功能的分子、雙特異性分子和抗體的偶聯(lián)物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗體具有與MAb 5c8基本上相同的抗原特異性結(jié)合特征，如美國專利5,474,771中所述，在此引用其公開內(nèi)容作為參考。在目前高度優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗體是人化的5c8(hu5c8)。其它已知的抗CD154的抗體包括抗體ImxM90、ImxM91和ImxM92(由Immunex Corp.，Seattle WA公開)、商業(yè)上可從Ancell得到的抗-CD40L mAb(克隆24-31，目錄號353-020，Bayport，MN)和商業(yè)上可從Genzyme得到的抗-CD40L mAb(Cambridge，MA，目錄號80-3703-01)。同樣商業(yè)上可以得到的有來自PharMingen的抗-CD40L mAb(San Diego，目錄號33580D)。許多其他抗-CD40L抗體也得到制備和鑒定(參見，例如Bristol-Myers Squibb的WO96/23071，在此引用其說明書作為參考)。
本發(fā)明也包括使用從上述或等價MAb衍生或加工得來的CD154阻斷劑如完整Fab片段、F(ab’)2化合物、VH區(qū)、Fv區(qū)、單鏈抗體(參見，例如WO 96/23071)、多肽、多肽融合構(gòu)建體、CD40融合體(如CD40Ig，如在Hollenbaugh等，免疫學(xué)方法1881-7，1995中所述，在此引用作為參考)和小分子化合物如小的半肽化合物或非肽化合物，所有這些均能夠阻斷或阻止CD40:CD154結(jié)合。設(shè)計、篩選和優(yōu)化小分子的方法在1996年6月21日提交的PCT/US96/10664中提供，在此引用其說明書作為參考。
因此，本發(fā)明可以使用用標(biāo)準(zhǔn)重組DNA技術(shù)制備MAb衍生的CD154阻斷劑(Winter和Milstein，自然349293-99，1991)。一類這樣的CD154阻斷劑是通過將編碼具有目的特異性的非人哺乳動物如小鼠或大鼠抗體的抗原結(jié)合區(qū)的核酸與編碼人免疫球蛋白(Ig)恒定區(qū)的核酸連接構(gòu)建的嵌合抗體或融合抗體(Cabilly等，美國專利No.4,816,567；Morrison等，美國國家科學(xué)院院報816851-55，1984)。從這樣的構(gòu)建體表達(dá)的嵌合抗體用于人類治療或預(yù)防時一般具有比嵌合體來源的非人抗體更低的免疫原性。另一類這樣的CD154阻斷劑是重組的“人化”或“靈長類化”的抗體。人化或靈長類化抗體是經(jīng)遺傳加工從具有目的特異性的非人類哺乳動物抗體衍生的抗體，其中用編碼來自人或靈長類動物Ig輕鏈或重鏈相應(yīng)區(qū)域的氨基酸的密碼子替換編碼抗原結(jié)合不需要的氨基酸的部分或所有密碼子。即它們是主要包含人免疫球蛋白序列的嵌合體，其中插入了負(fù)責(zé)特異性抗原結(jié)合的區(qū)域(參見，例如PCT專利申請WO94/04679)。人化抗體在體內(nèi)具有比嵌合抗體更低的免疫原性。目前，具有與MAb5c8(本文中HC15c8)基本上相同的抗原特異性的人化MAb對于實(shí)施本發(fā)明是優(yōu)選的。
用于本發(fā)明的另一類MAb衍生的CD154阻斷劑包括可以在非人動物如其中已整合一種或多種人類免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因動物中制備的人類抗體。這樣的動物可以用作用于制備雜交瘤的脾細(xì)胞的來源，如U.S.5,569,825中所述。
任何前述MAb之一的抗體片段和MAb衍生的治療試劑也可用于本發(fā)明。單價抗體包括與第二種重鏈的Fc(或主干)區(qū)域結(jié)合的重鏈/輕鏈二聚體?！癋ab區(qū)”是指那些與包含重鏈Y分支部分的序列大致相同或相似或在整體上與輕鏈大致相同或相似并且已表明整體上(集合體)表現(xiàn)抗體活性的鏈部分。Fab蛋白包括一條重鏈和一條輕鏈的集合體(常稱為Fab’)以及對應(yīng)于抗體Y 2個分支片段的四聚體(常稱為F(ab)2)，無論上述任何形式是共價或非共價集合體，只要集合體能選擇性與特定抗原或抗原家族反應(yīng)即可。
此外，可用標(biāo)準(zhǔn)重組DNA技術(shù)通過改變抗原結(jié)合位點(diǎn)附近的氨基酸殘基雜改變重組抗體與其抗原的結(jié)合親和性?？筛鶕?jù)分子模型通過誘變來增加人化抗體的抗原結(jié)合親和性(Queen等，美國國家科學(xué)院院報8610029-33，1989；PCT專利申請WO 94/04679)。根據(jù)靶組織類型或預(yù)想的特定治療方案增加或減小抗體對CD154的親和性可能是有利的。這可用噬菌體展示技術(shù)來進(jìn)行(參見，例如Winter等，免疫學(xué)年鑒12433-455，1994和Schier等，分子生物學(xué)雜志.25528-43，1996，在此引用作為參考)。例如，為了半預(yù)防性治療，用恒定水平的具有減小的對CD154的親和性的抗體治療患者是有利的。同樣，具有增加的對CD154的親和性的抗體對于短期治療可能是有利的。
給藥途徑用于本發(fā)明的CD40:CD154結(jié)合阻斷劑，包括CD154阻斷劑可以用醫(yī)學(xué)上可接受的任何方式給藥。根據(jù)具體情況，局部或系統(tǒng)給藥可能是理想的。優(yōu)選地，藥劑通過胃腸外途徑如通過靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、眼眶內(nèi)、心室內(nèi)、腹膜內(nèi)、被膜下、顱內(nèi)、脊髓內(nèi)或鼻內(nèi)注射、輸注或吸入給藥。藥劑也可通過在供體組織移植之前或之后將輸入泵或者可生物相容或可生物降解的緩釋移植物植入受治療者宿主來給藥。選擇性地，本發(fā)明的某些化合物或其制品可適于口腔或腸道給藥。本發(fā)明還有一些化合物將適于體表給藥。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，通過施用編碼阻斷劑的載體或其它可表達(dá)的遺傳物質(zhì)將CD40:CD154結(jié)合阻斷劑間接提供給受治療者。將遺傳物質(zhì)導(dǎo)入受治療者的細(xì)胞或組織并在其中表達(dá)，由此在原位產(chǎn)生阻斷劑。例如，適當(dāng)?shù)暮怂針?gòu)建體將包含編碼一種或多種MAb 5c8免疫球蛋白(Ig)鏈的序列，如U.S.專利5,574,771中公開的。其它適當(dāng)?shù)臉?gòu)建體將包含編碼嵌合或人化版本的MAb 5c8 Ig鏈或其抗原結(jié)合片段。其它適當(dāng)構(gòu)建體將包含編碼部分或全部其它CD154特異性MAb的序列。將構(gòu)建體系統(tǒng)或局部地運(yùn)送到例如鄰近表達(dá)胰島素組織移植部位的位點(diǎn)。
選擇性地，將編碼阻斷劑的載體或其它遺傳物質(zhì)導(dǎo)入適當(dāng)?shù)姆蛛x細(xì)胞種群中以制備產(chǎn)生阻斷劑的宿主細(xì)胞。然后將這些宿主細(xì)胞局部或系統(tǒng)地移植或輸注給受治療者以提供CD40:CD154結(jié)合阻斷劑的原位產(chǎn)生。適當(dāng)宿主細(xì)胞包括培養(yǎng)細(xì)胞如永生化細(xì)胞以及從受治療者獲得的細(xì)胞(例如外周血或淋巴結(jié)細(xì)胞如天然殺傷(NK)細(xì)胞)。
制劑一般來說，將用于實(shí)施本發(fā)明的化合物懸浮、溶解或分散于藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑中。得到的治療組合物對受治療者的體內(nèi)平衡，特別是電解液平衡沒有負(fù)面影響。因此，載體實(shí)例包括正常的生理鹽水(0.15M NaCl，pH7.0到7.4)。另一載體實(shí)例包括50mM磷酸鈉，100mM氯化鈉。許多其它可接受的載體在本領(lǐng)域內(nèi)眾所周知并且描述于例如雷明頓藥物科學(xué)，Gennaro編，Mack出版公司，1990?？山邮艿妮d體可包括可生物相容的、惰性或可生物吸附的鹽、緩沖劑、寡糖或多糖、聚合物、粘性增強(qiáng)劑、防腐劑等。
配制用于實(shí)施本發(fā)明的任何CD40:CD154結(jié)合阻斷劑如CD154阻斷劑以運(yùn)送藥學(xué)上有效的或治療上有效的量或劑量，即足以對受治療者產(chǎn)生可檢測到的、優(yōu)選醫(yī)學(xué)上有利的效應(yīng)的量。醫(yī)學(xué)上有利的效應(yīng)將包括防止、延緩或減輕受治療者醫(yī)療狀態(tài)的惡化或可檢測到地改進(jìn)其醫(yī)療狀態(tài)。例如，對所需外源蛋白治療特異的抑制抗體的效價可以得到抑制或降低。因此，本發(fā)明治療化合物如CD154阻斷劑的有效量是可檢測到地恢復(fù)蛋白治療的治療效果的任何量。有效量是使受治療者基本上不產(chǎn)生引起抑制劑綜合癥的逆適應(yīng)性抗體的量。
治療劑量和頻率用于完成本發(fā)明任何特定化合物給藥的劑量和頻率在本領(lǐng)域普通醫(yī)生如外科醫(yī)生的技術(shù)和臨床判斷能力之內(nèi)?；緞┝亢褪┯梅桨竿ㄟ^臨床前和臨床試驗(yàn)加以確定，試驗(yàn)包括廣泛但常規(guī)的研究以測定所需化合物的有效、例如最佳給藥參數(shù)。即使在完成這些建議之后，臨床醫(yī)生通常將根據(jù)各種因素如受治療者年齡、醫(yī)療狀態(tài)、體重、性別和與其它藥物的共同治療針對不同受治療者宿主改變這些劑量。測定用于本發(fā)明的每種CD40:CD154結(jié)合阻斷劑的有效劑量和給藥方案是藥物和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員的日常事務(wù)。給藥量和療程應(yīng)該足以在受治療者健康狀態(tài)的一個或多個指標(biāo)中產(chǎn)生臨床上有利的改變。療程和劑量方案的實(shí)例列于這里包括的證據(jù)-原理研究中。
為了舉例說明抗CD154化合物的劑量因素，給出下面關(guān)于抗CD154 mAb施用策略的實(shí)例。給藥量可容易地針對其它類型的抗CD154化合物加以調(diào)整。一般地，應(yīng)該考慮約0.05-50mg/kg受治療者體重的單一劑量，1-20mg/kg范圍的劑量最常用。為了在病人無癥狀時開始CD154阻斷治療或?qū)毙约膊∵M(jìn)行緊急治療，MAb的有效劑量范圍是約1mg/kg體重到約20mg/kg體重，每天施用或間隔約2到5天，維持約三周時間。通過此后以約0.1mg/Kg體重到約20mg/kg體重劑量的間歇給藥維持治療。為維持目的，劑量間隔從約1周變化到約3個月。目前，1月的劑量間隔是優(yōu)選的。
如果需要，可以連續(xù)或與常規(guī)免疫抑制劑結(jié)合實(shí)施CD154阻斷治療。為了謹(jǐn)慎，常規(guī)免疫抑制劑(如皮質(zhì)類固醇或鈣調(diào)磷酸酶抑制劑)可以由醫(yī)生在CD154阻斷治療的任何時間點(diǎn)一起施用。選擇性地，CD154阻斷MAb可以與常規(guī)藥物偶聯(lián)。這可以有利地允許常規(guī)藥劑以少于常規(guī)劑量的量施用，例如當(dāng)該藥劑作為單一治療施用時少于常規(guī)劑量的約50％。因此，應(yīng)該避免了許多與該藥劑有關(guān)的副作用發(fā)生。因此，根據(jù)本發(fā)明，CD154阻斷MAb可以與靶向B細(xì)胞的其它藥劑一起使用如抗CD19、抗CD28或抗CD20抗體(未偶聯(lián)或放射標(biāo)記的)、IL-14拮抗劑、LJP394(LaJolla藥物受治療者阻斷劑)、IR-1116(Takeda小分子)和抗Ig獨(dú)特型的單克隆抗體。選擇性地，這些組合可能包括T細(xì)胞/B細(xì)胞靶向藥劑如CTLA4Ig、IL-2拮抗劑、IL-4拮抗劑、IL-6拮抗劑、受治療者拮抗劑、抗CD80/CD86的單克隆抗體、TNF、LFAl/ICAM拮抗劑、VLA4/VCAM拮抗劑、brequinar和IL-2毒素偶聯(lián)物(例如DAB)、脫氫可的松、抗CD3 MAb(OKT3)、mycophenolate mofetil(MMF)、環(huán)磷酰胺以及其它免疫抑制如鈣調(diào)磷酸酶信號阻斷劑，包括但不限于tacrolimus(FK506)。這些組合也可包括T細(xì)胞靶向藥劑如CD4拮抗劑、CD2拮抗劑和IL-12。
為了維持移植物的整合或者在抑制移植排斥急性事件之后的時期內(nèi)，如果必要，單獨(dú)或與常規(guī)抗排斥藥劑結(jié)合施用維持劑量的抗CD40L抗體。隨后，可以降低給藥的劑量或頻率或同時降低這二者。在無移植排斥體癥出現(xiàn)時，治療可以停止，但注意監(jiān)測移植排斥的體癥。在其它情況下，根據(jù)普通醫(yī)生的判定，例如可以以4周或更長間隔施行不定期治療。然而，根據(jù)疾病癥狀的任何復(fù)發(fā)，受治療者宿主可能需要長期的間歇治療。
用于評估CD40:CD154阻斷劑治療方案的臨床前模式系統(tǒng)用于測試CD40:CD154阻斷化合物(例如，抗-CD40L化合物或CD154阻斷劑，如具有MAb 5c8特異性的MAb)效率的目前優(yōu)選模式系統(tǒng)實(shí)例如下所述。在每個系統(tǒng)中，可以進(jìn)行常規(guī)改變或調(diào)整以按照需要修飾公開的技術(shù)從而在動物模型中評估任何目的CD40:CD154阻斷化合物對蛋白抑制效價情況的影響。一些修飾的例子在下面簡述中提及；然而，一些其它適當(dāng)修飾對熟練人員是明顯的，并且也考慮在內(nèi)。
血友病A的敲除小鼠模型最近，美國紅十字會的研究者已建立了產(chǎn)生天然鼠FVIII無效合子(“敲除”)的小鼠育種群體[Bi等(1995)，10 Nature Genetic 119]。這些小鼠表現(xiàn)人血友病A的所有相關(guān)病理學(xué)癥狀。而且，小鼠模型精確地模擬了這些疾病病理學(xué)癥狀的病因?qū)W具生物學(xué)活性的、天然的FVIII的遺傳或先天性缺乏。已報道以相當(dāng)于傳統(tǒng)FVIII替代治療的方式施用的人FVIII的大劑量給藥在小鼠中引發(fā)FVIII抑制劑抗體的產(chǎn)生[Quian等，(1996)，88血液656a(增刊)]。其它施用方式，具體地借助編碼功能性FVIII的腺病毒載體的整合的組成型替代目前看來使蛋白治療處于免疫原性更低的環(huán)境中[Connely等(1998)，91血液3273-3281]。
CD154阻斷劑如抗鼠CD154在上述血友病小鼠群體中對“高反應(yīng)者”發(fā)生的影響可以基本上按下述得到評估抗原(FVIII)可以在實(shí)驗(yàn)日0和14以大劑量(如0.2μg)注射。在實(shí)驗(yàn)日54或附近，抽取血樣并使用常規(guī)ELISA技術(shù)分析FVIII抑制抗體的存在。之后，可以例如在實(shí)驗(yàn)日55和/或57或附近，給測試群體(如5只或更多動物；可以安排相似數(shù)目的動物作為一個或多個適當(dāng)對照群體)提供適當(dāng)劑量的抗鼠CD154(如腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)250μg)。可以在實(shí)驗(yàn)日56或附近給予FVIII的攻擊劑量。之后，可以在適當(dāng)實(shí)驗(yàn)日抽取血樣并分析以監(jiān)測測試群體中抑制抗體對FVIII的繼發(fā)性反應(yīng)的發(fā)生、抑制或逆轉(zhuǎn)。例如，可以在實(shí)驗(yàn)日74、81和96提取血樣。除了測試群體中動物間的一些個體差異，預(yù)期CD154阻斷治療將顯著地阻斷或抑制對FVIII的繼發(fā)性體液免疫。
SCIB-hu嵌合小鼠模型最初由Mosier等(1988)，335自然256-259報道的嵌合小鼠模型是以通過移植正常人外周血白細(xì)胞(PBL)產(chǎn)生穩(wěn)定小鼠-人嵌合體來免疫學(xué)治療(功能重建)嚴(yán)重復(fù)合免疫缺陷(SCID)小鼠為基礎(chǔ)的。此系統(tǒng)已用于對人淋巴細(xì)胞體內(nèi)行為和動態(tài)相互作用的大量研究。重要的是，此系統(tǒng)已用于研究CD40:CD154阻斷劑對正常人淋巴細(xì)胞對鼠紅細(xì)胞(用作模式抗原)的反應(yīng)的影響[Chen等(1995)，155免疫學(xué)雜志2833-2840。在此研究中表明抗CD40和CD154 MAb下調(diào)人總體Ig合成。
此模型系統(tǒng)使得可以評估抗-人CD154如Hu5c8體內(nèi)對人T細(xì)胞的影響，可使用任何目的蛋白作為測試抗原。在一個適當(dāng)修飾方案中，可以通過移植來自血友病受治療者如高反應(yīng)者的人PBL來制備SCID-hu小鼠嵌合體。當(dāng)然，此方法可以采用來自任何患外源蛋白抑制劑綜合癥的病人的PBL進(jìn)行。在從血友病高反應(yīng)者制備SCID-hu小鼠的病例中，適當(dāng)數(shù)目(例如2-5或更多)小鼠可以按下述分成研究組A組(hu5c8和FVIII)；B組(hu5c8單獨(dú))；C組(FVIII單獨(dú))；D組(只有載體)；E組(對照Ig和FVIII)；F組(對照Ig單獨(dú))。所示的測試項(xiàng)和/或?qū)φ赵谝浦矔r與hu PBL混合并在實(shí)驗(yàn)日2和/或4腹膜內(nèi)提供。隨后FVIII抑制反應(yīng)的動力學(xué)可以通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)(ELISA)、使用幾周時期內(nèi)在適當(dāng)間隔抽取的血監(jiān)測。預(yù)期用hu5c8處理可阻斷或消除對FVIII的繼發(fā)性體液免疫。
非人靈長類動物模型AVONEX(IFNβ)模型將彌猴或cynomologus猴按下述分成適當(dāng)研究組，例如每組2-4只動物1組[對照抗原(HAS)；50μg/kg以及hu5c8，5mg/kg]，2組(載體和Hu5c8，5mg/kg)，3組(AVONEX，50μg/Kg和hu5cB，5mg/kg)，4組(AVONEX，50μg/kg以及hu5c8，5mg/kg)，5組(載體和hu5c8，5mg/kg)。1，2和3組在實(shí)驗(yàn)日1開始并在此后大約每隔一日或二日接受hu5c8。4和5組在實(shí)驗(yàn)17開始并在此后大約每隔一日或二日接受hu5c8。所有AVONEX在實(shí)驗(yàn)日3或附近開始接受AVONEX q.o.d。AVONEX抑制抗體的發(fā)生和動力學(xué)使用常規(guī)ELISA技術(shù)監(jiān)測。預(yù)期用hu5c8處理的或未處理的AVONEX組之間有明顯差異。具體地，預(yù)期用hu5c8預(yù)處理可基本上阻斷或消除AVONEX抑制抗體的發(fā)生。預(yù)期用hu5cB延遲處理可基本上抑制或逆轉(zhuǎn)對AVONEX的繼發(fā)性體液免疫的發(fā)展。
上述模型可以經(jīng)常規(guī)改變以適于評估hu5c8或另一CD154阻斷劑對針對其它模式抗原包括外源蛋白治療的初發(fā)和/或繼發(fā)性抑制反應(yīng)的影響。例如可以對此方法和劑量水平進(jìn)行常規(guī)的適當(dāng)修飾以評估提供CD154阻斷治療的預(yù)防或治療方案的靈長類動物中FVIII或另一凝血因子的情況。
等價物本發(fā)明可以體現(xiàn)在其它特定形式中而不背離本發(fā)明精神或基本特征。因此，應(yīng)當(dāng)認(rèn)為前述實(shí)施方案是在此公開的本發(fā)明所有方面的舉例說明而不是對其進(jìn)行限定。因此本發(fā)明的范圍通過附屬的權(quán)利要求而不是前面的描述來說明，并且認(rèn)為在這些權(quán)利要求含義和相同范圍內(nèi)的所有改變也應(yīng)當(dāng)包括在本發(fā)明范圍之內(nèi)。
本發(fā)明還在以下編號的段落中得到說明。
1.一種減輕外源蛋白抑制劑綜合癥嚴(yán)重性的方法，包括給患此綜合癥或有此危險的受治療者施用有效量CD40:CD154結(jié)合阻斷劑的步驟。
2.一種抑制外源蛋白抑制劑綜合癥不利影響的方法，包括給患此綜合癥或有此危險的受治療者施用有效量CD40:CD154結(jié)合阻斷劑的步驟。
3.一種防止外源蛋白抑制劑綜合癥發(fā)展的方法，包括給患此綜合癥或有此危險的受治療者施用有效量CD40:CD154結(jié)合阻斷劑的步驟。
4.一種延遲外源蛋白抑制劑綜合癥發(fā)生的方法，包括給患此綜合癥或有此危險的受治療者施用有效量CD40:CD154結(jié)合阻斷劑的步驟。
5.一種抑制外源蛋白抑制劑綜合癥發(fā)展的方法，包括給患此綜合癥或有此危險的受治療者施用有效量CD40:CD154結(jié)合阻斷劑的步驟。
6.一種逆轉(zhuǎn)外源蛋白抑制劑綜合癥的方法，包括向患此綜合癥或有此危險的受治療者施用有效量CD40:CD154結(jié)合阻斷劑。
7.一種維持外源蛋白治療活性的方法，包括向患此綜合癥或有此危險的受治療者施用有效量CD40:CD154結(jié)合阻斷劑。
8.一種恢復(fù)外源蛋白治療活性的方法，包括向用所述外源蛋白治療并對其產(chǎn)生免疫反應(yīng)的受治療者施用有效量CD40:CD154結(jié)合阻斷劑。
9.根據(jù)段落1、2、3、4、5、6、7或8所述的方法，其中CD40:CD154結(jié)合阻斷劑是CD154(CD40L)阻斷劑。
10.根據(jù)段落9所述的方法，其中CD154阻斷劑是單克隆抗體。
11.根據(jù)段落10所述的方法，其中單克隆抗體具有ATCC保藏號HB10916產(chǎn)生的5c8抗體的抗原特異性結(jié)合特征。
12.根據(jù)段落1、2、3、4、5、6、7或8所述的方法，其中施用外源蛋白以替代內(nèi)源缺陷型蛋白。
13.根據(jù)段落1、2、3、4、5、6、7或8所述的方法，其中外源蛋白具有與相應(yīng)內(nèi)源蛋白基本相同的一級結(jié)構(gòu)并且從帶有編碼所述外源蛋白的可表達(dá)重組核酸的分離宿主細(xì)胞得到制備。
14.根據(jù)段落1、2、3、4、5、6、7或8所述的方法，其中外源蛋白是細(xì)菌來源的蛋白。
15.根據(jù)段落12所述的方法，其中外源蛋白是凝血因子。
16.根據(jù)段落15所述的方法，其中凝血因子是因子VIII或因子IX。
17.根據(jù)段落13所述的方法，其中外源蛋白是生長激素、創(chuàng)傷愈合因子、生長因子、細(xì)胞因子、淋巴因子、酶、凝血因子或血漿成分。
18.根據(jù)段落14所述的方法，其中外源蛋白是鏈激酶。
19.根據(jù)段落1、2、3、4、5或8所述的方法，其中受治療者是人。
20.根據(jù)段落19所述的方法，其中是人是血友病患者。
權(quán)利要求
1.CD40CD154結(jié)合阻斷劑的用途，用于制備在患此綜合癥或有此危險的受治療者中減輕外源蛋白抑制劑綜合癥嚴(yán)重性的藥物。
2.CD40CD154結(jié)合阻斷劑的用途，用于在患此綜合癥或有此危險的受治療者中抑制外源蛋白抑制劑綜合癥不利影響的藥物。
3.CD40CD154結(jié)合阻斷劑的用途，用于制備在患此綜合癥或有此危險的受治療者中防止外源蛋白抑制劑綜合癥發(fā)展的藥物。
4.CD40CD154結(jié)合阻斷劑的用途，用于制備在患此綜合癥或有此危險的受治療者中延遲外源蛋白抑制劑綜合癥發(fā)生的藥物。
5.CD40CD154結(jié)合阻斷劑的用途，用于制備在患此綜合癥或有此危險的受治療者中抑制外源蛋白抑制劑綜合癥發(fā)展的藥物。
6.CD40CD154結(jié)合阻斷劑的用途，用于制備在患此綜合癥或有此危險的受治療者中逆轉(zhuǎn)外源蛋白抑制劑綜合癥的藥物。
7.CD40CD154結(jié)合阻斷劑的用途，用于制備在用所述外源蛋白治療的受治療者中維持外源蛋白治療活性的藥物。
8.CD40CD154結(jié)合阻斷劑的用途，用于制備在用所述外源蛋白治療并對其產(chǎn)生免疫反應(yīng)的受治療者中恢復(fù)外源蛋白治療活性的藥物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4、5、6、7或8所述的用途，其中CD40CD154結(jié)合阻斷劑是(a)CD154(CD40L)阻斷劑；或(b)單克隆抗體；或(c)具有ATCC保藏號HB 10916產(chǎn)生的5c8抗體的抗原特異性結(jié)合特征的單克隆抗體。
10.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4、5、6、7或8所述的用途，其中外源蛋白是(a)內(nèi)源缺陷性蛋白的代用品；或(b)具有與相應(yīng)內(nèi)源蛋白基本相同的一級結(jié)構(gòu)的蛋白；或(c)從帶有編碼所述外源蛋白的可表達(dá)重組核酸的分離宿主細(xì)胞得到制備的蛋白；或(d)細(xì)菌來源的蛋白；或(e)凝血因子，包括因子VIII或因子IX；或(f)生長激素、創(chuàng)傷愈合因子、生長因子、細(xì)胞因子、淋巴因子、酶、凝血因子或血漿成分；或(g)鏈激酶。
11.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4、5、6、7或8所述的用途，其中受治療者是人。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用途，其中人是血友病患者。
全文摘要
本發(fā)明提供減輕或減緩、抑制、防止外源蛋白抑制劑綜合癥的發(fā)生或逆轉(zhuǎn)外源蛋白抑制劑綜合癥的方法和組合物，外源蛋白抑制劑綜合癥以凝血因子(如因子VIII)抑制劑綜合癥為例。所述方法使用CD40CD154結(jié)合阻斷劑如CD154阻斷劑來減輕或改進(jìn)針對具有治療價值的外源蛋白的逆適應(yīng)性生物抑制體液免疫。
文檔編號A61K38/19GK1651071SQ20041009786
公開日2005年8月10日 申請日期1998年6月19日 優(yōu)先權(quán)日1997年6月20日
發(fā)明者B·阿戴爾曼 申請人:拜奧根Idec馬薩諸塞公司