專利名稱：鞣酸苦參堿在制備預(yù)防和治療皮膚黏膜感染藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及鞣酸苦參堿鹽或其組合物在制備抗皮膚黏膜感染藥物中的應(yīng)用。具體來說是涉及鞣酸及其與苦參堿形成的鹽和/或其組合物用于制備治療人和動(dòng)物皮膚黏膜人乳頭瘤病毒感染藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
皮膚黏膜感染細(xì)菌、真菌和病毒是常見病、多發(fā)病，目前多用抗生素治療，但是常常引起耐藥，使皮膚黏膜感染經(jīng)久不愈。同時(shí)能治療細(xì)菌、真菌和病毒皮膚黏膜感染中藥制劑，在市面上和文獻(xiàn)上尚未見到。
尖銳濕疣是由人乳頭瘤病毒(HPV)引起的皮膚黏膜病變。中醫(yī)認(rèn)為尖銳濕疣的病因病機(jī)是由于房事不潔或間接接觸污穢之品，濕熱淫毒從外侵入陰皮膚粘膜，導(dǎo)致肝經(jīng)郁勢(shì)，氣血不和，濕熱毒邪搏結(jié)而成疣。由于濕毒為陰邪，其性粘滯，纏綿難去，容易耗傷正氣，正虛邪戀以致容易復(fù)發(fā)，難以根治。在治療上多采用扶正固本、清熱解毒、活血化瘀、軟堅(jiān)散結(jié)等法。尖銳濕疣以局部病變?yōu)橹?，故外治法在治療中占重要地位。鞣酸已被證明對(duì)艾滋病HIV病毒有抑制作用(Biochem.J 1992；288717-9；J.Nat.Prod.1990；53134-40)。但至今尚無有關(guān)文獻(xiàn)記載單獨(dú)用鞣酸和/或本發(fā)明公開的組合物、和/或其鹽用于制備治療皮膚黏膜病毒感染的藥物。雖然，美國專利US4381296公開了鞣酸用于皰疹病毒HSV感染的治療，但未涉及尖銳濕疣HPV的治療，就如已知的許多藥物抗病毒藥物一樣。在研究確認(rèn)藥物是否對(duì)某種類型病毒有效和藥理學(xué)基礎(chǔ)之前，并不能預(yù)測(cè)其的效果，不同的病毒感染引起不同的疾患，每一種藥物相對(duì)應(yīng)一定的病毒種類，因此，不同的病毒感染，需要針對(duì)該病毒的抗病毒藥物治療才能有效。目前，治療尖銳濕疣的藥物有鬼臼毒素d，屬于化學(xué)療法，優(yōu)點(diǎn)是療程短，但存在刺激性、毒副作用大的問題。具體表現(xiàn)是疼痛、水腫、糜爛等。
市面上現(xiàn)有鞣酸軟膏作為收斂藥，用于新生兒和嬰兒防治臀紅。
鞣酸苦參堿為豆桿植物苦參的根提取的總生物堿與五倍子提取的鞣酸經(jīng)反應(yīng)而得的一種有機(jī)鞣酸弱堿鹽，其中鞣酸苦參堿含量為8-20％，經(jīng)口服后，在胃液的酸性條件下溶解，游離出苦參總生物堿和鞣質(zhì)而發(fā)揮藥理活性，現(xiàn)用于治療腸道感染，腹瀉。
中國專利CN 1327827公開了一種治療皮膚病的外用藥，它是由吲哚美辛，撲爾敏，度米芬，鞣酸苦參堿，甘草組成，用于止癢、消腫、消炎、殺菌、防光和止痛等，用于日光性皮炎、痤瘡、脂溢性皮炎、接觸性皮炎、丘疹性尋麻疹、濕疹、神經(jīng)性皮炎等常見皮膚病。
中國專利CN1058909提供了一種宮頸糜爛栓配方及制造方法，它由五倍子、黃柏、苦參等組成，用于于宮頸炎，宮頸糜爛。
中國專利CN1456194公開了一種抗人乳頭瘤病毒軟膏的配方，它由砒石、鴉膽子、鉛丹、五倍子、黃柏、冰片、蒸餾水、單甘酯、甘油、凡士林、硬質(zhì)酸、三乙醇胺組成，用于治療外陰、陰道、宮頸部疣及外陰黑色病變。
中國專利CN1193526涉及一種治療婦科病的中藥散劑婦康潔陰散及制備方法，它是由中藥苦參、百部、蛇床子、三七、黃芩、土茯芩、五倍子、冰片等中藥配伍而成，防治婦科病中的滴蟲、陰癢、陰道炎、宮頸炎、宮頸糜爛、帶下、尖銳、濕疹等病。
中國專利CN1187358公開了一種復(fù)方潰瘍糜爛散，主治口腔潰瘍疾病，同時(shí)對(duì)燒燙傷、褥瘡、宮頸糜爛、外生殖器潰瘍糜爛等疾病也有顯著療效，由冰片、兒茶、枯礬、珍珠、人中白、五倍子按規(guī)定比例制成散劑。
中國專利CN1116949公開了一種婦科外用中藥，由珍珠、麝香、黃連、苦參、杏仁、蓖麻仁、白癬皮、五倍子、枯礬、蛇床子、冰片、硼砂等十幾種中藥配制而成，用于宮頸糜爛、滴蟲或霉菌性陰道炎、盆腔炎、子宮脫垂、外陰白色病變，外陰搔癢及女性生殖系統(tǒng)炎癥等。
以上專利和文獻(xiàn)存在處方復(fù)雜，成分多，未明確其有效成分，不易進(jìn)行質(zhì)量控制的缺點(diǎn)，并且沒有用于抗HPV病毒，也沒有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證實(shí)可以殺滅病毒。
王崢屹等對(duì)用鞣酸苦參堿殺精栓劑和及體外抑制淋病奈瑟菌和霉菌進(jìn)行了報(bào)道(王崢屹等，中華男科學(xué)，2001，7(4)275-278)。但沒有涉及本發(fā)明所述病毒感染。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為鞣酸(又名鞣質(zhì))和苦參堿鹽和/或其組合物作為活性成分，鞣酸苦參堿可以在市面上購買，也可以按中國專利申請(qǐng)專利號(hào)91105164.3和申請(qǐng)專利號(hào)02128785.6制備，其中含鞣酸苦參堿為5-30％，鞣酸為30-90％。鞣酸優(yōu)選由五倍子提取，苦參堿優(yōu)選由苦參或山豆根提取。鞣酸和苦參堿按一定比例生成鹽，其中鞣酸為6-100重量份，苦參堿為1-70重量份，優(yōu)選為鞣酸7-90重量份，苦參堿為1-20重量份。
近年研究結(jié)果表明(陳富強(qiáng)等，腫瘤防治雜志，2001，8(4)342-344；徐成康，中山醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，19(3)223-226)，29.3％的宮頸糜爛患者HPV陽性，而正常宮頸陽性率只為11.1％。據(jù)報(bào)道(Ahn ws et al，J Cell BiochemSuppl，1997；28-29133-139)，慢性宮頸炎中高危HPV(16、18)型表達(dá)率為69％。HPV與多種疾病有關(guān)，它分為許多亞型，根據(jù)其對(duì)組織惡性轉(zhuǎn)化程度的大小，將HPV分為高、中、低危型，其中高危型包括HPV16、18，宮頸糜爛及宮頸癌中HPV16是最常見的亞型，高危型HPV16、18檢出率隨宮頸糜爛程度的增加呈現(xiàn)遞增趨勢(shì)，顆粒型或乳突型糜爛HPV16、18檢出率與正常宮頸比較差異顯著，表明宮頸癌與HPV密切相關(guān)，與宮頸糜爛密切相關(guān)。用PCR可測(cè)得85％-90％的宮頸癌中有高危型HPV，宮頸癌中HPV16、18陽性率達(dá)83.33％，高危型HPV DNA整合到宿主細(xì)胞染色體，可產(chǎn)生E6、E7腫瘤蛋白，它們分別抑制抑癌基因p53和Rb，使細(xì)胞逃脫p53和Rb的控制，導(dǎo)致細(xì)胞周期控制失常，使通常處于靜止?fàn)顟B(tài)的細(xì)胞增生活躍、腫瘤生長。雖有多數(shù)生育年齡婦女主要通過性傳播感染，但只有少數(shù)發(fā)展成宮頸癌，若HPV16持續(xù)存在，就可使宮頸病變進(jìn)展。宮頸HPV感染與外陰感染不同，宮中以HPV16/18型為主，常不發(fā)生濕疣改變，而是以隱性感染長期存在，先引起不典型增生，當(dāng)有其他因子參與時(shí)而導(dǎo)致癌變。上述鞣酸苦參堿鹽和/或組合物能有效地殺滅和抑制HPV6/11、16/18型，可用于制備治療HPV的病毒感染和的藥物，治療尖銳濕疣、陰道、宮頸炎及宮頸糜爛和輔助治療子宮頸癌。
本發(fā)明通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)HPV病毒的量的改變來觀察活性成分和產(chǎn)品效果，該方法已在數(shù)篇公開發(fā)表的文獻(xiàn)中應(yīng)用(蔡有齡等，中國性病艾滋病防治，2002，82，108；吳元?jiǎng)佟⒎度饛?qiáng)等，實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床，2003，32，1)。
結(jié)果表明，尖銳濕疣的組織勻漿在加入鞣酸和/或其鹽后24小時(shí)，F(xiàn)Q-POVR不能再檢出病毒，而空白對(duì)照管及對(duì)照品管卻具有很高濃度的HPV病毒量，說明本發(fā)明的藥物及其有效成分具有能快速有效地滅HPV病毒的能力。
實(shí)驗(yàn)證明，單獨(dú)使用鞣酸藥液對(duì)金葡球菌、大腸桿菌和綠膿桿菌有抑制，但對(duì)白色念珠菌沒有抑菌作用。而本發(fā)明鞣酸苦參堿則對(duì)金葡球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌和白色念珠菌都有抑制。
本發(fā)明所述鞣酸苦參堿在制備能同時(shí)預(yù)防和治療人和動(dòng)物皮膚黏膜細(xì)菌、真菌和病毒性疾病藥物的用途，包括尖銳濕疣、細(xì)菌性、霉菌性、病毒性陰道、宮頸炎及宮頸糜爛和輔助治療子宮頸癌，特別是治療人和動(dòng)物皮膚黏膜HPV病毒性疾病藥物的用途。
本發(fā)明鞣酸苦參堿鹽和/或其組合物以及含有作為活性成分有效量的鞣酸苦參堿，與皮膚黏膜用藥的各種輔料配伍在制備各種制劑中的應(yīng)用，可以是膏劑、凝膠劑、洗劑、片劑、栓劑、膜劑、噴劑。
制劑中鞣酸苦參堿的濃度為1-70％，優(yōu)選為2-20％。
在用于制備藥用制劑時(shí)，可以與不同的藥物和可接受的載體組合，以利于制劑的形成，這些載體可以是淀粉、糊精、吐溫-80、卡波姆、纖維素、羧甲基纖維素鈉、海藻酸鈉、甘油、丙二醇、聚乙二醇、月桂氮唑酮、異丙醇、三乙醇胺、司盤60，但不限于此。
以下結(jié)合實(shí)施例，來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例，任何在本發(fā)明基本精神上的改進(jìn)或替代，仍屬于本發(fā)明權(quán)利要求書中所要求的保護(hù)范圍。
具體實(shí)施例方式
試驗(yàn)用原料和藥品來源鞣酸 陜西昂盛生物醫(yī)藥科技有限公司鞣酸苦參堿 陜西昂盛生物醫(yī)藥科技有限公司婦炎凈膠囊內(nèi)容物(本品為苦玄參、地膽草、當(dāng)歸、雞血藤、兩面針等藥味經(jīng)加工制成的膠囊) 廣西梧州制藥集團(tuán)股份有限公司實(shí)施例1鞣酸苦參堿抗HPV病毒泡騰片的制備鞣酸苦參堿1.00克酒石酸0.45克碳酸氫鈉 0.65克糊精 0.02克PEG6000 0.01克制備方法取鞣酸苦參堿、酒石酸分別過80目篩，以95％乙醇制成軟材，過12目篩制濕粒，于50℃干燥，備用。另取碳酸氫鈉加無菌蒸餾水制軟材，過12目篩制濕粒，于50℃干燥，然后與上述干粒混合，整粒，加適量滅菌蒸餾水，烘片刻，加PEG6000、糊精?；靹颍瑝浩?。
實(shí)施例2鞣酸苦參堿消毒液的制備鞣酸苦參堿10克1，2-丙二醇 15毫升吐溫-80 15毫升氮酮 3毫升HCl或NaOH調(diào)節(jié)pH至5.5
滅菌蒸餾水加至100毫升實(shí)施例3復(fù)方鞣酸苦參堿凝膠劑的制備鞣酸苦參堿 10克卡波姆 10克甘油 100克滅菌蒸餾水加至1000毫升制備方法取卡波姆分次撒入適量滅菌蒸餾水中，使其緩慢溶脹，加入甘油調(diào)勻后，滴加三乙醇胺攪拌成透明基質(zhì)，pH調(diào)至6.5-7.5。取鞣酸苦參堿10克加入適量熱滅菌蒸餾水中，溶解冷卻后，再邊加入邊攪拌于凝膠基質(zhì)中，最后加入滅菌蒸餾水至1000毫升，攪勻分裝即可。
實(shí)施例4熒光定量PCR檢測(cè)HPV病毒藥敏實(shí)驗(yàn)藥物樣品配制1號(hào)鞣酸5克加入1，2-丙二醇10毫升，吐溫-8010毫升，最后加滅菌蒸餾水至100，配制成5％的溶液。
2號(hào)鞣酸苦參堿5克加入1，2-丙二醇10毫升，吐溫-80 10毫升，最后加滅菌蒸餾水至100，配制成鞣酸苦參堿溶液。
HPV病毒來源來自多位病人臨床標(biāo)準(zhǔn)的尖銳濕疣標(biāo)本，切取后，用生理鹽水洗去血液，在無菌條件下，將標(biāo)本剪碎，加入3倍體積生理鹽水混勻、研磨成勻漿備用。
主要儀器PE7700型熒光定量PCR儀(包括電腦及軟件)。
引物及熒光探針達(dá)安基因臨床診斷中心提供的HPV6，11和16，18型FQ-PCR診斷試劑盒。
試驗(yàn)方法取尖銳濕疣組織勻漿50微升，按設(shè)定分組分別加入各種待測(cè)樣品50微升。
37℃溫育24小時(shí)，然后按達(dá)安基因診斷中心HPV6，11和16，18型FQ-PCR診斷試劑盒提供的操作步驟進(jìn)行檢測(cè)FQ-PCR反應(yīng)步驟采用常規(guī)堿裂解法提取DNA0.2ml入薄壁反應(yīng)管中，同時(shí)加入一定濃度的引物、F-PROBE、DNTP、DNA聚合酶及緩沖液等，用PE7700熒光PCR儀，93℃2min予變性后，按93℃45s，55℃120s，反復(fù)進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，定量結(jié)果由電腦軟件自動(dòng)分析計(jì)算出初始拷貝數(shù)的定量結(jié)果。

尖銳濕疣的組織勻漿在加入鞣酸和鞣酸苦參堿后24小時(shí)，F(xiàn)Q-POVR不能再檢出病毒，而而空白對(duì)照管及婦炎凈膠囊內(nèi)容物管具有很高濃度的HPV病毒量，說明本發(fā)明的鞣酸和鞣酸苦參堿具有能快速有效地滅尖銳疣病毒的作用。
實(shí)施例6細(xì)菌和真菌藥敏實(shí)驗(yàn)體外抑菌試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)材料菌株金葡球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌和白色念珠菌。試劑營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、沙氏瓊脂培養(yǎng)基。
藥物樣品配制原藥液配制分別稱量鞣酸和鞣酸苦參堿各0.01克，加入滅菌蒸餾水至10毫升為原藥液。
①取原液2ml作為濃度1。
②取原液2ml+水2ml，混勻，取出2ml作為濃度2。
③?、诓僮髦谢靹蚝笏幰?ml+水2ml，混勻，取出2ml作為濃度3。
④?、鄄僮髦谢靹蚝笏幰?ml+水2ml，混勻，取出2ml作為濃度4。
⑤?、懿僮髦谢靹蚝笏幰?ml+水2ml，混勻，取出2ml作為濃度5。
⑥?、莶僮髦谢靹蚝笏幰?ml+水2ml，混勻，取出2ml作為濃度6。
實(shí)驗(yàn)方法采用平皿二倍稀釋法，將已配制好的藥液分別加入冷卻至55℃左右的滅菌營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，混勻，制成不同濃度的藥物平板。
取金黃色葡萄菌，大腸桿菌，綠膿桿菌、白色念珠菌四種實(shí)驗(yàn)菌懸液，分別劃種于不同濃度的含藥平板，另外再取四個(gè)不含藥液的平板也接種四種細(xì)菌)，37℃培養(yǎng)18h，觀察記錄最小抑菌濃度MIC。
鞣酸藥液結(jié)果見下表1

鞣酸苦參堿藥液結(jié)果見下表2

實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、鞣酸組對(duì)實(shí)驗(yàn)的3種細(xì)菌(金葡球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌)均有不同程度的抑制作用(見下表)。但對(duì)白色念珠菌無抑制。
表1鞣酸的抗菌作用

2、鞣酸苦參堿組對(duì)實(shí)驗(yàn)的4種細(xì)菌(金葡球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、白色念珠菌)均有不同程度的抑制作用(見下表)。
表2鞣酸苦參堿的抗菌作用

權(quán)利要求
1.鞣酸及其苦參堿鹽或其組合物在制備預(yù)防和治療皮膚黏膜病毒性感染藥物中的應(yīng)用，其特征在于主要含鞣酸或其苦參堿鹽或其組合物，其中鞣酸為6-100重量份，苦參堿為1-70重量份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中鞣酸為7-90重量份，苦參堿為1-20重量份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1，其中鞣酸優(yōu)選自五倍子鞣酸或有效劑量的五倍子提取物，苦參堿優(yōu)選從苦參、廣豆根(廣西產(chǎn)山豆根)、或山豆根提取，或使用有效劑量的苦參、山豆根和廣豆根的苦參堿提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鞣酸與苦參堿生成的鹽或形成的組合物用于制備預(yù)防和治療人和動(dòng)物皮膚白色念珠菌和人乳頭瘤病毒感染藥物的用途。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鞣酸與苦參堿生成的鹽或形成的組合物用于制備預(yù)防和治療人和動(dòng)物皮膚黏膜金葡球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、白色念珠菌和病毒感染藥物的用途。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鞣酸與苦參堿生成的鹽或形成的組合物用于制備預(yù)防和治療人和動(dòng)物皮膚黏膜病毒感染藥物的用途。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鞣酸與苦參堿形成的組合物或生成的鹽用于制備預(yù)防和治療人和動(dòng)物皮膚黏膜金色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、白色念珠菌和人乳頭瘤病毒感染藥物的用途。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鞣酸或與苦參堿形成的組合物或生成的鹽用于制備預(yù)防和治療人和動(dòng)物皮膚黏膜人乳頭瘤病毒引起的疾病藥物的用途，包括尖銳濕疣、陰道和宮頸炎、宮頸糜爛及輔助治療宮頸癌。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鞣酸苦參堿鹽或其組合物，與皮膚用藥的各種輔料配伍在制備各種制劑中的應(yīng)用，可以是膏劑、凝膠劑、洗劑、片劑、栓劑、膜劑、噴劑和藥學(xué)能夠接受的其他外用制劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鞣酸苦參堿鹽或其組合物，與皮膚用藥的輔料卡波姆在制備凝膠劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及鞣酸及其苦參堿鹽或其組合物在制備預(yù)防和治療皮膚黏膜感染藥物中的應(yīng)用，尤其是在制備預(yù)防和治療人乳頭瘤病毒感染藥物中的應(yīng)用，該類病毒感染包括尖銳濕疣、陰道和宮頸炎及宮頸糜爛。所述應(yīng)用是將鞣酸及其苦參堿鹽或其組合物與皮膚用藥的各種輔料配伍制備成不同藥劑。
文檔編號(hào)A61P17/12GK1935145SQ20051003731
公開日2007年3月28日 申請(qǐng)日期2005年9月19日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月19日
發(fā)明者秦衛(wèi)華, 劉元 申請(qǐng)人:秦衛(wèi)華