專利名稱：一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗jxa1-r株耐熱凍干保護(hù)劑及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于獸用生物制品技術(shù)領(lǐng)域，涉及獸用病毒活疫苗制造的冷凍干燥技術(shù)，具體涉及一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑及制備方法。
背景技術(shù)：
在我國(guó)的獸用疫苗中，凍干活疫苗占相當(dāng)大的比例，根據(jù)生產(chǎn)工藝和保存條件不同，可將其分為常規(guī)保護(hù)劑活疫苗和耐熱保護(hù)劑活疫苗，目前國(guó)內(nèi)大多數(shù)產(chǎn)品為常規(guī)保護(hù)劑活疫苗。常規(guī)保護(hù)劑主要成分為脫脂牛奶、蔗糖、明膠等，組方簡(jiǎn)單、配制簡(jiǎn)便、易溶性良好，但熱穩(wěn)定性和保護(hù)功能差，產(chǎn)品的保存條件較為苛刻，大多需要在_15°C以下保存。在疫苗生產(chǎn)、運(yùn)輸以及使用過程中，如果冷鏈系統(tǒng)控制不當(dāng)，疫苗保存環(huán)境溫度升高，常常導(dǎo)致疫苗效力下降或失效，造成免疫失敗。 耐熱凍干保護(hù)劑比常規(guī)的凍干保護(hù)劑更周到地考慮了具有生物活性的制品在較高溫度和較長(zhǎng)保存時(shí)間的情況下，凍干物質(zhì)可能產(chǎn)生的物理和化學(xué)變化對(duì)活疫苗存活的影響，通過填充、防凍、抗氧化、酸堿調(diào)整、羥基中和等一系列機(jī)制，確保病毒在2 8 °C條件下，保存期可達(dá)24個(gè)月，效價(jià)無明顯下降，即使是較高的常溫甚至37°C也可以保存十天以上，因而其保護(hù)性能要比傳統(tǒng)保護(hù)劑更為優(yōu)良，從而使活苗的儲(chǔ)存、運(yùn)輸和使用更方便、經(jīng)濟(jì)。發(fā)達(dá)國(guó)家早在20世紀(jì)80年代就開始進(jìn)行耐熱保護(hù)劑的研究，目前已經(jīng)基本采用耐熱保護(hù)劑生產(chǎn)活疫苗，但由于保護(hù)劑的研究和應(yīng)用均屬于專利資料，各國(guó)都處于保密狀態(tài)。我國(guó)在耐熱凍干保護(hù)劑方面的研究雖然起步較晚，但近年來研究非?；钴S。我國(guó)不少具有國(guó)際戰(zhàn)略眼光的獸用生物制品企業(yè)均紛紛投入大量人力與資金，率先開展耐熱保護(hù)劑活疫苗的研究，研究領(lǐng)域主要包括ND、IBD, MD, IBV、雞痘和豬瘟等活疫苗產(chǎn)品，有的企業(yè)已經(jīng)取得了一定的成果，并將耐熱保護(hù)劑活疫苗產(chǎn)業(yè)化。但是，產(chǎn)品配套還是很不齊全；另外，國(guó)內(nèi)一些企業(yè)雖然獲得了產(chǎn)品批號(hào)，由于生產(chǎn)技術(shù)問題，至今尚無耐熱保護(hù)劑活疫苗產(chǎn)品投放市場(chǎng)。因此，目前我國(guó)耐熱保護(hù)劑活疫苗與國(guó)外同類產(chǎn)品相比仍處于劣勢(shì)地位。豬繁殖與呼吸綜合征是危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的一種主要傳染病，尤其是近幾年高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒在我國(guó)較大范圍的流行，更使我國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)遭受巨大的經(jīng)濟(jì)損失。用5%蔗糖脫脂乳凍干的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗已大量使用，雖預(yù)防效果良好，但疫苗的存放條件為-15°C以下，這樣給疫苗的存儲(chǔ)、動(dòng)輸、使用帶來極大不便。目前廣泛使用的豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑由明膠、胰蛋白胨、酶解酪蛋白、山梨醇、PVP、谷氨酸鈉、精氨酸鹽，磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀組成，可使產(chǎn)品在2 8°C保存24個(gè)月，病毒含量不發(fā)生改變但該耐熱凍干保護(hù)劑存在配方過于復(fù)雜、生產(chǎn)成本高、保護(hù)性能不十分理想等缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護(hù)劑，具有良好保護(hù)性能，使凍干后的豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗在2 8°C條件下保存有效期可達(dá)24個(gè)月以上，有效解決目前該疫苗需在低溫冷凍運(yùn)輸、儲(chǔ)存不便以及成本高等一系列問題。本發(fā)明的另一目的在于提供一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護(hù)劑的制備方法，配制方法簡(jiǎn)單、成本低、能夠大規(guī)模生產(chǎn)。
為實(shí)現(xiàn)上述目的本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下
一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護(hù)劑，其是由以重量百分比計(jì)的以下組分組成明膠0. 8 I. 2%、大豆蛋白胨4 6%、甘氨酸0. 5 I. 5%、海藻糖4 6%、聚乙烯吡咯酮I 2%、甘露醇0. 5 1%，余量為注射用水。優(yōu)選的，本發(fā)明所述的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護(hù)劑其是由以重量百分比計(jì)的以下組分組成明膠1%、大豆蛋白胨5%、甘氨酸1%、海藻糖5%、聚乙烯吡咯酮2%、甘露醇0. 8%、余量為注射用水。海藻糖是一種穩(wěn)定的非還原性二糖，其羥基能代替水分子同蛋白質(zhì)分子表面部分結(jié)合，對(duì)蛋白質(zhì)形成保護(hù)，同時(shí)，海藻糖的分子較小，易于以分子的形式填充到蛋白質(zhì)分子的空隙中，有效限制蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，從而能避免變性失活；海藻糖具有較高的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度，易形成玻璃態(tài)，將蛋白質(zhì)分子支撐和包裹起來使之不易變性，水化能力雖與蔗糖基本相同，但保護(hù)作用卻遠(yuǎn)高于蔗糖。聚乙烯吡咯酮(PVP)是一種多聚體，對(duì)生物或生物大分子具有非特異性保護(hù)作用，同時(shí)它是一種非滲透性保護(hù)劑，通常和糖一起，主要通過與糖類間的氫鍵作用改變糖類的玻璃化溫度發(fā)揮作用；將海藻糖和聚乙烯吡咯酮(PVP)聯(lián)合使用，可起到良好的低溫、干燥保護(hù)劑作用。研究表明，在凍干某些生物制品時(shí)，添加大豆蛋白胨等植物源性蛋白質(zhì)比添加動(dòng)物源性蛋白質(zhì)，凍干前后病毒下降滴度減少，且植物源性蛋白質(zhì)比動(dòng)物源性蛋白質(zhì)更安全，避免了血清蛋白質(zhì)潛在的血源性病原體污染疫苗。試驗(yàn)表明，在眾多的氨基酸中，甘氨酸是最好的填充劑。甘露醇是山梨糖醇的異構(gòu)化體，其沒有吸濕性，干燥快且穩(wěn)定性好，凍干后制品不易回潮，復(fù)水迅速。據(jù)報(bào)道，低濃度甘氨酸可通過抑制10或100mmol/L磷酸緩沖鹽結(jié)晶所致PH值的改變而阻止蛋白質(zhì)藥物變性。本發(fā)明高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護(hù)劑的使用方法將本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑與高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒JXAl-R株抗原液以I I的體積比例充分混勻，定量分裝后立即進(jìn)行冷凍干燥。一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護(hù)劑的制備方法，其是按以下步驟進(jìn)行
1)高溫滅菌明膠、大豆蛋白胨、海藻糖、聚乙烯吡咯酮甘露醇溶于注射用水中，110 116 °C高溫滅菌；
2)微孔濾膜過濾除菌將甘氨酸、甘露醇溶于注射用水中，用孔徑為0.2-0. 3 的微孔濾膜過濾除菌；
3)混合分別完成除菌后把兩種成分按照I : I的體積比例混合，攪拌均勻，干燥即得。上述制備方法中，其中各組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為明膠0. 8 I. 2%、大豆蛋白胨4 6%、甘氨酸0. 5 I. 5%、海藻糖4 6%、聚乙烯吡咯酮I 2%、甘露醇0. 5 1%，余量為注射用水。上述制備方法中，所述步驟I)中注射用水的用量為注射用水總重量的1/2，滅菌的時(shí)間為10-20分鐘。上述制備方法中，所述步驟2)中注射用水的用量為注射用水總重量的1/2。本發(fā)明所述的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護(hù)劑結(jié)合高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒JXAl-R株抗原本身的特性在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上作出的改進(jìn)，其有益效果在于
(I)本發(fā)明的耐熱凍干保護(hù)劑減少了制品在冷凍干燥過程中各種理化因素可能對(duì)病毒活性的損傷，使凍干前后病毒損失率較低，不超過0. 2個(gè)滴度。(2)本發(fā)明的耐熱凍干保護(hù)劑活疫苗耐老化程度高，在37°C條件下保存IOd病毒損失率不超過0. 3個(gè)滴度，在2 8°C保存24個(gè)月，仍能達(dá)到農(nóng)業(yè)部審批通過的《高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗(JXAl-R株)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的各項(xiàng)指標(biāo)，有效解決了目前豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗需低溫冷凍運(yùn)輸、儲(chǔ)存不便等問題。(3)本發(fā)明的耐熱凍干保護(hù)劑在保證耐熱性能好、能有效保護(hù)活疫苗的前提下，還具有配方成分及配制方法簡(jiǎn)單、成本低、可實(shí)現(xiàn)大量生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，有效解決了現(xiàn)有耐熱凍干保護(hù)劑所存在的成分復(fù)雜和成本高等缺陷。下面結(jié)合具體的實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
具體實(shí)施例方式一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護(hù)劑的制備方法，其是按以下步驟進(jìn)行
1)高溫滅菌明膠、大豆蛋白胨、海藻糖、聚乙烯吡咯酮甘露醇溶于注射用水中，110 116 °C高溫滅菌；
2)微孔濾膜過濾除菌將甘氨酸、甘露醇溶于注射用水中，用孔徑為0.2-0. 3 的微孔濾膜過濾除菌；
3)混合分別完成除菌后把兩種成分按照I: I的體積比例混合，攪拌均勻，干燥即得。按照上述制備方法制備本發(fā)明的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，具體實(shí)施例及各組分的用量見表I :
表I各實(shí)施例耐熱凍干保護(hù)劑配制參數(shù)
權(quán)利要求
1.一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護(hù)劑，其特征在于其是由以重量百分比計(jì)的以下組分組成明膠0. 8 I. 2%、大豆蛋白胨4 6%、甘氨酸0. 5 I. 5%、海藻糖4 6%、聚乙烯吡咯酮I 2%、甘露醇0. 5 1%，余量為注射用水。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護(hù)劑，其特征在于其是由以重量百分比計(jì)的以下組分組成明膠1%、大豆蛋白胨5%、甘氨酸1%、海藻糖5%、聚乙烯吡咯酮2%、甘露醇0. 8%、余量為注射用水。
3.一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護(hù)劑的制備方法，其特征在于其是按以下步驟進(jìn)行 1)高溫滅菌明膠、大豆蛋白胨、海藻糖、聚乙烯吡咯酮甘露醇溶于注射用水中，110 116 °C高溫滅菌； 2)微孔濾膜過濾除菌將甘氨酸、甘露醇溶于注射用水中，用孔徑為0.2-0. 3 的微孔濾膜過濾除菌； 3)混合分別完成除菌后把兩種成分按照I: I的體積比例混合，攪拌均勻，干燥即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護(hù)劑的制備方法，其特征在于其中各組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為明膠0. 8 I. 2%、大豆蛋白胨4 6%、甘氨酸0. 5 I. 5%、海藻糖4 6%、聚乙烯吡咯酮I 2%、甘露醇0. 5 1%，余量為注射用水。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護(hù)劑的制備方法，其特征在于步驟I)中注射用水的用量為注射用水總重量的1/2，滅菌的時(shí)間為10-20分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護(hù)劑的制備方法，其特征在于步驟2)中注射用水的用量為注射用水總重量的1/2。
全文摘要
本發(fā)明具體涉及一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征株活疫苗JXA1-R耐熱凍干保護(hù)劑及制備方法。本發(fā)明的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑是由以重量百分比計(jì)的以下組分組成明膠0.8～1.2%、大豆蛋白胨4～6%、甘氨酸0.5～1.5%、海藻糖4～6%、聚乙烯吡咯酮1～2%、甘露醇0.5～1%，余量為注射用水；通過高溫滅菌、微孔濾膜過濾除菌、混合步驟制得。本發(fā)明的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXA1-R株耐熱凍干保護(hù)劑減少了制品在冷凍干燥中各種理化因素對(duì)病毒活性的損傷，使凍干前后病毒損失率較低，不超過0.2個(gè)滴度；有效解決目前該疫苗需在低溫冷凍運(yùn)輸、儲(chǔ)存不便以及成本高等問題。
文檔編號(hào)A61K39/12GK102727903SQ201210229549
公開日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2012年7月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月4日
發(fā)明者周智, 曲萍, 朱文冠, 林綺萍, 田克恭, 練炳洲, 翟新驗(yàn), 遇秀玲, 鄧小熊, 陳瑞愛 申請(qǐng)人:中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心, 廣東大華農(nóng)動(dòng)物保健品股份有限公司