專利名稱：從肝臟制取脂類抗癌藥物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥品的制備方法。
目前與其它抗腫瘤藥物相比，脂類抗腫瘤藥物的研制在國(guó)內(nèi)外都相對(duì)落后。一種脂類抗腫瘤藥物如〈化學(xué)文摘〉CA100109121Z介紹的日本專利JP58，213，716其系十二碳一烯酸制品，CA11291375W又介紹了臺(tái)灣信息，王、李兩人較為系統(tǒng)地研究了胡羅卜素及視黃酸類化合物，對(duì)大鼠C-6膠質(zhì)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用，它們發(fā)現(xiàn)作用最強(qiáng)的是視黃酸，其余是乙酰視黃酯、視黃醛、4.4-胡羅卜素、棕櫚酰視黃酯、β胡羅卜素及藏花酸。國(guó)內(nèi)脂類抗腫瘤藥物有油酸脂質(zhì)體、β欖香烯乳劑等，但它們各自都存在著缺陷，如油酸脂質(zhì)體在到達(dá)靶器官之前多半被巨噬系統(tǒng)截留，而β欖香烯乳劑的應(yīng)用范圍有一定局限，而且它們都是單一成分用量大因而導(dǎo)致毒副作用相對(duì)也大。
鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處，本發(fā)明的目的在于提供一種具有復(fù)合成分的毒副作用較小的脂類抗腫瘤藥物。
本發(fā)明的目的是通過(guò)以下措施來(lái)實(shí)現(xiàn)的一種從肝臟制取脂類抗癌藥物的方法，其特征在于(1)脂類提取物的制備按以下次序的步驟進(jìn)行a將新鮮的動(dòng)物肝臟立即進(jìn)行X線照射，累計(jì)照射量在1000-4000拉德，b將被照射的肝臟立即制成勻漿，c將勻漿在30-50℃溫度下放置2-4天，d將上述勻漿液再于50-80℃溫度下放置3-5天，e將上述物質(zhì)用約10倍體積的Folch分配液浸泡8-12小時(shí)并不時(shí)地?fù)u振，f收集下層液體，以理論上層液洗滌下層液一次，取該下層液過(guò)濾后減壓蒸餾，濃縮至干，將濃縮液以3～5倍體積的氯仿/甲醇(2∶1，V/V)混合液溶解蒸干物，離心或過(guò)濾除去不溶物，再減壓蒸干，趁熱稱重，加0.75～2%重量的維生素E，旋轉(zhuǎn)混勻即得脂類提取物，(2)乳劑的制備取50-70克/升上述脂類提取物、大豆磷脂10-50克/升、及適量水混合，將它們?nèi)榛怪蔀闈舛葹?-7%的乳劑。濾液是在40～60℃的水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸餾。
本發(fā)明的方法主要包括有從動(dòng)物肝臟獲得脂類提取物及將它制成乳劑的兩個(gè)過(guò)程。
脂類提取物的制備首先將動(dòng)物的肝臟(包括家畜及魚類)取出，趁新鮮立即進(jìn)行大劑量X線照射，累計(jì)照射劑量在1000-4000拉德，使仍存活的肝組織發(fā)生輻射變化，可能引起DNA中的突變，酶構(gòu)象及其催化活性的變化、肝組織中各組分由輻射引起的非酶促變化，然后將被照射的肝臟立即制成勻漿。再將勻漿在30-50℃溫度下放置2-4天。之后再于50-80℃溫度下放置3-5天。在上述兩種溫度條件下，肝組織自身會(huì)發(fā)生相應(yīng)的生物化學(xué)變化，其中包括大分子的降解，生成各種降解產(chǎn)物。將它們用約十倍體積的Folch分配液(氯仿甲醇水＝2∶1∶0.6)浸泡8-12小時(shí)并不時(shí)振搖。收集下層液體過(guò)濾除去肝臟殘?jiān)?，最好將肝臟殘?jiān)偃缟现貜?fù)浸泡一次，合并下層濾液，以理論上層液洗滌下層液一次，棄去上層液將下層液置于40～60℃的水浴中減壓蒸餾，至不再有餾出液為止，再以3～5倍體積的氯仿/甲醇(2∶1，V/V)混合液溶解蒸干物，離心或過(guò)濾除去不溶物，再減壓蒸干，趁熱稱重，加0.75～2%重量的維生素E，旋轉(zhuǎn)混勻，于是存留在蒸餾容器內(nèi)的外觀為淺棕色的液體在常溫下又凝結(jié)成脂膏狀的物體即是本發(fā)明的脂類提取物，趁熱倒至消毒過(guò)的容器中，或立即制備乳劑，如不立即使用應(yīng)充氮?dú)獗芄?～5℃保存。
乳劑的制備其主要原料為脂類提取物，輔助原料有大豆磷脂和水。當(dāng)制備一立升乳劑時(shí)取上述的脂類提取物50-70克，然后再加入輔助原料大豆磷脂(乳化劑)，用量為10-50克/升。將脂類提取物大豆磷脂和水混合在一起總體積為一立升，再用超聲或乳勻機(jī)使之成為pH＝4.5-7.5、粒徑≤15微米，其濃度5-7%。
本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有如下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明制成的乳劑主要成分為脂類復(fù)合物，它們都是生理性組分易被人體吸收，多種組分復(fù)合作用的結(jié)果抗腫瘤效果好，由于使用量較化療藥物少，因而對(duì)造血系統(tǒng)沒(méi)有特異的損傷。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明其藥效顯著。
例1
取新鮮牛肝8公斤立即進(jìn)行X線照射，累積照射量為1000拉德，照射后立即將牛肝用電動(dòng)組織絞切器制成粘稠漿狀物，將其置于30-50℃溫箱中2天，然后再置于50-80℃的溫箱中3天，取出稱重為2.5公斤。用20000mlFolch分配液(氯仿∶甲醇∶水＝2∶1∶0.6)浸泡過(guò)夜后吸出下層溶液約10000ml過(guò)濾除去肝臟殘?jiān)?，再將肝殘?jiān)瑯咏萏崛∫淮危喜⑾聦訛V液，以理論上層液洗滌下層一次，再取下層液將其在40～60℃水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸餾，至不再有餾出液為止，此時(shí)再以3倍體積的氯仿/甲醇(2∶1，V/V)混合液溶解蒸干物，離心或過(guò)濾除去不溶物，再減壓蒸干趁熱稱重210克，產(chǎn)率約2.6%，加4.2克維生素E旋轉(zhuǎn)混勻可得到外觀為淺棕色的脂膏狀脂類提取物。
取上述脂類提取物50克、大豆磷脂10克、加水至1000ml，用乳勻機(jī)將其制成1000ml乳劑，其PH＝4.5、粒徑≤15微米、許可含量范圍為5±0.75%。
例2取新鮮豬肝8公斤重復(fù)例1的操作，其中X線累積照射量為4000拉德。在30-50℃的溫箱中4天，在50-80℃的溫箱中5天，取出后稱重為2.1公斤。第二次蒸餾前用5倍體積的氯仿/甲醇(2∶1，V/V)混合液溶解蒸干物，蒸餾后產(chǎn)率約2.3%，加3.8克維生素E旋轉(zhuǎn)混勻得190克脂類提取物。
取上述脂類提取物70克、大豆磷脂50克、加水至1000ml，用乳勻機(jī)將其制成1000ml乳劑，其pH＝7.5、粒徑≤15微米、許可含量范圍為7±1.05%。
經(jīng)化學(xué)分析本原料藥的成分如下酸值110-150碘價(jià)50-100皂化值150-200羥值125-145過(guò)氧化脂質(zhì)＜1.5mEq/100g甘油三酯＜3.0%總磷脂30-35%總膽固醇5-8%總脂肪酸55-68%自由脂肪酸40-45%膽紅素0.003-0.01%蛋白質(zhì)未測(cè)出總唾液酸1.0-1.5%鞘氨醇0.16-0.18%其它(未定)9-19%
下面是應(yīng)用本發(fā)明的乳劑進(jìn)行抗腫瘤藥效學(xué)試驗(yàn)的初步結(jié)果癌細(xì)胞種類方法生長(zhǎng)抑制率U14子宮頸癌400ug/ml濃度88.8%細(xì)胞系(體外試驗(yàn))200ug/ml濃度30.4%(體外試驗(yàn))下面是應(yīng)用本發(fā)明的乳劑進(jìn)行小鼠體內(nèi)試驗(yàn)的初步結(jié)果癌細(xì)胞種類方法抑瘤率荷移植性腫瘤5%、0.3ml/只×7天S180小鼠腹腔注射給藥41.4%(皮下接種)瘤內(nèi)注射給藥42.6%瘤內(nèi)注射給藥43.2%
權(quán)利要求
1.一種從肝臟制取脂類抗癌藥物的方法，其特征在于(1)脂類提取物的制備按以下次序的步驟進(jìn)行a將新鮮的動(dòng)物肝臟立即進(jìn)行X線照射，累計(jì)照射量在1000-4000拉德，b將被照射的肝臟立即制成勻漿，c將勻漿在30-50℃溫度下放置2-4天，d將上述勻漿液再于50-80℃溫度下放置3-5天，e將上述物質(zhì)用約10倍體積的Folch分配液浸泡8-12小時(shí)并不時(shí)地?fù)u振，f收集下層液體以理論上層液洗滌下層液一次，取該下層液過(guò)濾后減壓蒸餾，濃縮至干，將濃縮液以3～5倍體積的氯仿/甲醇(2∶1，V/V)混合液溶解蒸干物，離心或過(guò)濾除去不溶物，再減壓蒸干，趁熱稱重加0.75～2%重量的維生素E，旋轉(zhuǎn)混勻即得脂類提取物，(2)乳劑的制備取50-70克/升上述脂類提取物、大豆磷脂10-50克/升、及適量水混合，將它們?nèi)榛怪蔀闈舛葹?-7%的乳劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從肝臟制取脂類抗癌藥物的方法，其特征在于濾液是在40～60℃的水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸餾。
全文摘要
一種從肝臟制取脂類抗癌藥物的方法，它是將動(dòng)物肝臟經(jīng)X線照射后制成勻漿，于30—50℃溫度下放置2—4天，再于50—80℃溫度下放置3—5天。之后用Folch分配液提取并收集下層液過(guò)濾后減壓蒸餾，得到脂類提取物，取該脂類提取物50—70克/升、大豆磷脂15—50克/升、及適量水混合，將它們?nèi)榛闯蔀闈舛仁?—7％的乳劑。本發(fā)明工藝方法簡(jiǎn)單、制得的抗癌藥物抑癌效果明顯，毒副作用較小。
文檔編號(hào)A61K35/37GK1113763SQ9411266
公開(kāi)日1995年12月27日 申請(qǐng)日期1994年12月6日 優(yōu)先權(quán)日1994年12月6日
發(fā)明者崔肇春, 林肇輝, 王慶梅, 徐奇?zhèn)?申請(qǐng)人:大連醫(yī)科大學(xué)