專利名稱：抗癌中藥組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物，特別是涉及一種具有抗癌作用的中藥組合物。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是嚴(yán)重危害人類健康及生命的常見(jiàn)病，其死亡率居各種疾病之首。世界每年約有500萬(wàn)人因患惡性腫瘤而被奪去生命。目前治療腫瘤的主要手段包括手術(shù)、放療、 化療，但由于化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞的選擇性較差，在殺滅或抑制腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，亦嚴(yán)重?fù)p傷生長(zhǎng)相當(dāng)活躍的正常細(xì)胞，并對(duì)機(jī)體的重要器官如心、肝、腎、肺及神經(jīng)系統(tǒng)等產(chǎn)生一定的毒副作用，對(duì)機(jī)體的免疫產(chǎn)生抑制作用。正因上述的各種原因，使世界上許多國(guó)家的科學(xué)家們逐步把研究重心移向中藥方面。腫瘤的中醫(yī)藥治療在我國(guó)有悠久的歷史， 在我國(guó)腫瘤臨床上運(yùn)用中醫(yī)藥十分普遍，據(jù)大量的臨床報(bào)道，中醫(yī)藥的應(yīng)用具有改善癥狀， 提高生存質(zhì)量，延長(zhǎng)生存期，在一定程度上穩(wěn)定或縮小腫瘤的效果；與化放療同用具有明顯的減毒增效作用。與西醫(yī)西藥相比，中醫(yī)藥療效廣泛、毒副反應(yīng)小、耐受性好，適用人群廣， 而且治療成本相對(duì)較低，在腫瘤治療領(lǐng)域發(fā)揮著西方醫(yī)學(xué)不可替代的作用，越來(lái)越受到國(guó)際社會(huì)的重視。中藥重樓為百合科重樓屬(Paris)植物滇重樓(Paris polyphylla Smith var. yannanensis)及七葉一枝花(paris polyphylla Smith var. chinensis (Franch.) Hara)的根莖，具有清熱解毒，消腫止痛、涼肝定驚之功效，用于治療臃腫、咽喉腫痛、毒蛇咬傷、跌打傷痛、涼風(fēng)抽搐等癥，是著名中成藥云南白藥、季德勝蛇藥片、宮血寧膠囊等的主要組成藥物?，F(xiàn)代藥理作用表明該藥具有止血、祛痰和抑菌、鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜、抗早孕殺滅精子、抗細(xì)胞毒等作用，在臨床應(yīng)用于治療功能性子宮出血、神經(jīng)性皮炎和外科炎癥以及治療腫瘤等，都有顯著的療效。目前以重樓為主要成分的復(fù)方有金復(fù)康口服液、樓蓮膠囊、肝復(fù)樂(lè)膠囊等。黃藥子 CTuber Dioscoreae)又名黃獨(dú)(Dioscorea bulbifera L)、香芋、紅藥子等，為薯蕷科薯蕷屬植物黃獨(dú)的塊莖。主要分布于長(zhǎng)江以南各地。黃藥子之名始載于宋代 《開(kāi)寶本草》，其性寒苦，入肝、肺經(jīng)。古代認(rèn)為有清熱解毒，涼血止血，消腫散癭的功效?！肚Ы鹪铝睢分幸呀?jīng)記載用黃藥子酒可以治療甲狀腺癌的治療方法。中醫(yī)臨床用黃藥子單、復(fù)方制劑進(jìn)行抗腫瘤的治療，療效明顯?，F(xiàn)代藥物研究表明本品含有多種抗癌化學(xué)成分，其抗腫瘤效果明顯，同時(shí)對(duì)多種皮膚真菌有抑制作用。黃藥子含有留體皂甙、二萜內(nèi)酯及1-(3-丙氨基)-2-甲基哌啶活性成分等。它在體內(nèi)和體外均有一定的抗腫瘤作用，抗瘤活性隨劑量增大而增大。然而其抗腫瘤機(jī)制尚不明確，抑制甲硫氨酸氨肽酶II活性可能是黃藥子抗腫瘤的一個(gè)機(jī)制?？傊?，黃藥子的抗腫瘤作用有待進(jìn)一步研究。目前只有重樓皂苷與黃芪多糖的藥物組合物(CN101152408A)的專利見(jiàn)諸報(bào)道。 到目前為止尚未發(fā)現(xiàn)具有抗癌作用且由重樓皂苷提取物和黃藥子醇提物的中藥組合物見(jiàn)諸報(bào)道
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種具有抗癌作用的中藥組合物，所述的具有抗癌作用的中藥組合物，它的抗癌活性高且具有廣譜性，其制備方法簡(jiǎn)單。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案加以實(shí)現(xiàn)的，一種具有抗癌作用的中藥組合物，該具有抗癌作用的中藥組合物是由重樓皂苷提取物和黃藥子醇提物按質(zhì)量比1 1-1 2，其中重樓皂苷提取物中含有留體類皂苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25% 60%，黃藥子醇提物中黃藥子甾體皂苷類物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12% 43%。所述中藥組合物較佳的一種配比是由重樓皂苷提取物和黃藥子醇提物按質(zhì)量比 1 1所組成。上述的具有抗癌作用的中藥組合物的制備方法，包括以下過(guò)程1)重樓皂苷提取(1)將云南產(chǎn)滇重樓的粗粉過(guò)5目篩后用4倍體積比的70% 85%乙醇浸泡1小時(shí)，然后在85°C的溫度下加熱回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液并濃縮而得到浸膏；(2)將上述浸膏加入到50 100倍體積比的0% 20%乙醇中并分散均勻，離心， 沉淀后再溶解，再離心，重復(fù)2次，合并上清液；(3)將上述上清液經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂層析柱，所用干樹(shù)脂量按照與浸膏重量比例為 4 1 10 1計(jì)算，上柱流速為1 3BV/h，洗脫液棄去用；用60% 80%乙醇洗脫，流速為2 5BV/h，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮真空干燥后即可得到重樓皂苷提取物；2)黃藥子醇提物的制備(1)將黃藥子粉碎成Icm小塊，按黃藥子小塊與去離子水Ig IOml比例將黃藥子加入去離子水中，在溫度100°c提取半小時(shí)，回收提取液，并且按第1次回流提取操作條件再進(jìn)行回流提取2次，合并3次提取液；(2)將步驟1)合并的提取液經(jīng)過(guò)濾，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮，濃縮液在溫度100°C 蒸發(fā)干燥得到為黃藥子醇提物，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15% ；3)重樓皂苷提取物和黃藥子醇提物組合按重樓皂苷提取物粉末與黃藥子醇提物的質(zhì)量比1 1，加入去離子水中，經(jīng)超聲混合均勻得到具有抗癌作用的中藥組合物，以每毫升水溶液中共計(jì)含20毫克重樓皂苷提取物和黃藥子醇提物。所述提取物與藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任一制劑。所述組合物可以加藥學(xué)上可接受的輔料制成臨床上或藥學(xué)上可接受的注射劑或口服制劑。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于，與重樓皂苷單獨(dú)使用相比，抑瘤率明顯提高。而且該中藥組合物制備方法簡(jiǎn)單，活性更高且作用明顯。與以往重樓皂苷與黃芪多糖藥物組合物相比具有廣譜抗癌，針對(duì)多種癌癥，肝癌，艾氏，S180肉瘤都有很好的治療效果，抑瘤率達(dá)到 40% -50%，并可制備成各種不同的劑型。
具體實(shí)施例方式1、將云南產(chǎn)滇重樓500g粗粉過(guò)5目篩后分別用4倍體積比的70%和85%乙醇浸泡1小時(shí)，然后在85°C的溫度下加熱回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液并濃縮而得到浸膏；將上述浸膏加入到100倍體積比的20%乙醇中并分散均勻，離心，沉淀后再溶解，再離心，重復(fù)2次，合并上清液；將上述上清液經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂層析柱，所用干樹(shù)脂量按照與浸膏重量比例為5 1計(jì)算，上柱流速為1 !3BV/h，洗脫液棄去；用60% 80%乙醇洗脫，流速為2 5BV/h，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮真空干燥后即可得到重樓皂普提取物 47. 19g。2、將黃藥子藥材500g粉碎成Icm小塊，按黃藥子小塊與去離子水Ig IOml比例將黃藥子加入去離子水中，在溫度100°c提取半小時(shí)，回收提取液，并且按第1次回流提取操作條件再進(jìn)行回流提取2次，合并3次提取液；將提取液經(jīng)過(guò)濾，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮， 濃縮液在溫度100°C蒸發(fā)干燥得到為黃藥子醇提物75. 32g。3、取重樓皂苷提取物粉IOmg與黃藥子醇提物10mg，配制成每毫升水溶液中共計(jì)含20mg，重樓皂苷提取物和黃藥子醇提物的具有抗癌作用的中藥組合物混合液。本發(fā)明的中藥組合物的藥效試驗(yàn)如下將得到的組合物，通過(guò)體內(nèi)對(duì)荷瘤小鼠的試驗(yàn)顯示，與重樓皂苷單獨(dú)使用相比，抑瘤率明顯提高，且無(wú)明顯毒副作用，而且該中藥組合物制備方法簡(jiǎn)單，活性高且作用明顯。將上述中藥組合物進(jìn)行抗腫瘤活性試驗(yàn)，其方法和結(jié)果如下一 .抗腫瘤活性試驗(yàn)方法1體外抗腫瘤活性試驗(yàn)1. 1細(xì)胞株及培養(yǎng)小鼠肺腺癌LA795細(xì)胞株，培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/mL青霉素，100 μ g/ mL鏈霉素的RPMn640培養(yǎng)基中，于37°C，5 % CO2培養(yǎng)箱及飽和濕度條件下培養(yǎng)，3-4天傳代一次。人肺腺癌A549細(xì)胞株，培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/mL青霉素，100 μ g/mL 鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，于37°C，5% CO2培養(yǎng)箱及飽和濕度條件下培養(yǎng)，3 4天傳代一次。1. 2藥物抗腫瘤活性測(cè)定MTT法將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用胰酶消化后配制成濃度為3X104個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，接種于96孔酶標(biāo)板，每孔加200 μ L0 24h后換不含血清培養(yǎng)液使細(xì)胞同步化生長(zhǎng)，每孔 200 μ L。第三天加含不同濃度藥物及相應(yīng)溶劑對(duì)照的新鮮培養(yǎng)液，每孔加200 μ L，受試藥設(shè) 8個(gè)劑量組，每組設(shè)8個(gè)平行孔，于37°C培養(yǎng)24h后，每孔加無(wú)血清無(wú)酚紅培養(yǎng)液新鮮配制的0. 5mg/mLMTT100 μ L，繼續(xù)培養(yǎng)4h，然后，每孔加100 μ LDMSO溶解MTT甲簪顆粒，用微型振蕩器振蕩混勻后，于酶標(biāo)儀上測(cè)定光密度值(OD)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，取平均值。以溶劑對(duì)照處理腫瘤細(xì)胞為對(duì)照組，由OD值計(jì)算抑制率，公式為細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=(對(duì)照組OD值一實(shí)驗(yàn)組OD值)/對(duì)照組ODX 100%，并由此求得IC50(半數(shù)抑制率)，IC5tl =細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率為50%的藥物濃度。2.體內(nèi)抗腫瘤活性驗(yàn)用制備的的藥物組合物分別進(jìn)行H22肝癌模型，S180實(shí)體瘤模型，艾氏實(shí)體瘤模型的藥效試驗(yàn)。2. 1.動(dòng)物造模2. 1. 1.H22肝癌模型取接種H22肝癌細(xì)胞后腹水飽滿的荷瘤小鼠，消毒腹部，于超凈工作臺(tái)中抽取乳白色腹水為瘤源，生理鹽水洗滌，腹水2mL，腹水與生理鹽水的比例為1 4，生理鹽水8mL，配成細(xì)胞懸液，以無(wú)菌注射器抽取0.2mL，分別接種于48只小鼠腋下。 整個(gè)操作在無(wú)菌條件下進(jìn)行。2. 1. 2. S180實(shí)體瘤模型取接種S180細(xì)胞后腹水飽滿的荷瘤小鼠，消毒腹部，于超凈工作臺(tái)中抽取乳白色腹水為瘤源，生理鹽水洗滌，腹水2mL，腹水與生理鹽水的比例為 1 4，生理鹽水8mL，配成細(xì)胞懸液，以無(wú)菌注射器抽取0.2mL，接種于48只小鼠腋下。整個(gè)操作在無(wú)菌條件下進(jìn)行。2.1.3.艾氏實(shí)體瘤模型取接種艾氏細(xì)胞后腹水飽滿的荷瘤小鼠，消毒腹部，于超凈工作臺(tái)中抽取乳白色腹水為瘤源，生理鹽水洗滌，腹水2mL，腹水與生理鹽水的比例為 1 4，生理鹽水8mL，配成細(xì)胞懸液，以無(wú)菌注射器抽取0.2mL，接種于48只小鼠腋下。整個(gè)操作在無(wú)菌條件下進(jìn)行。2.2.動(dòng)物分組及給藥接種次日開(kāi)始給藥，每日1次(1)模型組灌服生理鹽水，每只0. 2mL ； (2)重樓皂苷組按100mg/kg灌服實(shí)施例中制備的重樓皂苷提取物0. 2ml ； (3)黃藥子組按100mg/kg 灌服實(shí)施例中制備的黃藥子醇提物0. 2ml ； (3)重樓皂苷和黃藥子組合物組按200mg/kg 灌服實(shí)施例中制備的混合物0. 2mL·給藥兩周，于給藥結(jié)束后次日頸部脫臼處死小鼠，解剖取其瘤組織，稱重量，測(cè)抑瘤率抑瘤率(％) = (1-給藥組平均瘤重/生理鹽水組平均瘤重)X100%，摘取肺，脾，肝用多聚甲醛液固定，稱重肝臟及脾臟重量。肝指=(肝臟重量/ 體重)*1000，脾指=(脾臟重量/體重)*1000。二、抗腫瘤活性試驗(yàn)結(jié)果表1重樓皂苷提取物和黃藥子醇提物組合物體外抗腫瘤活性試驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種抗癌中藥組合物，其特征在于，所述中藥組合物由重樓皂苷提取物和黃藥子醇提物按質(zhì)量比1 1 1 2所組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗癌中藥物組合物，其特征在于，所述中藥組合物由重樓皂苷提取物和黃藥子醇提物按質(zhì)量比11所組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的抗癌中藥組合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟1)重樓皂苷提取(1)將重樓粗粉過(guò)篩后分別用4倍體積比的70% 85 %乙醇浸泡，然后加熱回流提取， 濃縮而得到浸膏；(2)將上述浸膏加入到50 100倍體積比的0% 20%乙醇中并分散均勻，離心，沉淀后再溶解，再離心，重復(fù)2次，合并上清液；(3)將上述上清液經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂層析柱，所用干樹(shù)脂量按照與浸膏重量比例為 4 1 10 1計(jì)算，上柱流速為1 !3BV/h，洗脫液棄去；用60% 80%乙醇洗脫，流速為2 5BV/h，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮真空干燥后即可得到重樓皂苷提取物；2)黃藥子醇提物的制備(1)將黃藥子粉碎成小塊，按黃藥子小塊與去離子水Ig IOml比例將黃藥子加入去離子水中，回流提取得提取液；(2)將步驟(1)合并的提取液經(jīng)過(guò)濾，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮，濃縮液在溫度100°C蒸發(fā)干燥得到為黃藥子醇提物，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15% ；3)重樓皂苷提取物和黃藥子醇提物按比例混合。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗癌中藥組合物的制備方法，其特征在于，所述步驟1)重樓粗粉過(guò)5目篩后用4倍體積比的70% 85%乙醇浸泡。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗癌中藥組合物的制備方法，其特征在于，所述步驟幻中黃藥子碎塊回流提取3次，每次半小時(shí)，黃藥子醇提物質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗癌中藥組合物的制備方法，其特征在于，所述提取物與藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任一制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物可以加藥學(xué)上可接受的輔料制成臨床上或藥學(xué)上可接受的注射劑或口服制劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于，重樓皂苷提取物中含有留體類皂苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25 60%，黃藥子中黃藥子留體皂苷類物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 12% 43%。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了一種具有抗腫瘤作用的中藥組合物及其制備方法和用途。所述的中藥組合物是由重樓皂苷提取物和黃藥子醇提物按1∶1～1∶2配伍所組成的藥物混合物。其制備過(guò)程包括重樓皂苷提取物的制備、黃藥子醇提物的制備、及重樓皂苷提取物與黃藥子醇提物混合物的制備。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)制備過(guò)程簡(jiǎn)單，所得到的中藥組合物具有抗癌作用，它的抗癌活性高且具有廣譜性，與單獨(dú)應(yīng)用重樓皂苷或黃藥子醇提物相比，組合物的抗腫瘤活性更強(qiáng)，且毒副作用更小，同時(shí)有增強(qiáng)免疫的作用。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102309665SQ201110269310
公開(kāi)日2012年1月11日 申請(qǐng)日期2011年9月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月13日
發(fā)明者尹雙雙, 滿淑麗, 王潔銀, 高文遠(yuǎn) 申請(qǐng)人:天津大學(xué)